Charakterystyka genów ziemniaka indukowanych podczas patogenezy

Grzegorz Bednarczyk

Practical course at the

Leibniz-Institute of Plant Biochemistry

Department Stress and Developmental Biology

Halle (Saale)

Germany

Leibniz-Institute of Plant Biochemistry

Systemowa odporność nabyta (SAR) w ziemniaku

Leibniz-Institute of Plant Biochemistry

Podwyższona odporność przeciwko

dalszej infekcji

Pseudomonas syringae

powiązana jest z akumulacja OPDA

3.02.52.01.51.00.5 0

[nm

ol/g

fw

]

0 6 12 18 24 36 48

czas [h]

40

30

20

10

0

[nm

ol/g

fw

]

0 6 12 18 24 36 48

czas [h]

JA OPDA Odpowiedz lokalna

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0

[nm

ol/g

fw

] 0 6 12 18 24 36 48

czas [h]

2.5

2.0

1.5

1.0

0.5

0

[nm

ol/g

fw

]

0 6 12 18 24 36 48

czas [h]

JA OPDA Odpowiedz systemowa O

COOH

O

COOH

Charakterystyka genów ziemniaka indukowanych podczas patogenezy

Analiza makromacierzy DNA

ziemniaka

Leibniz-Institute of Plant Biochemistry

Podwyższona ekspresja dwóch genów indukowanych lokalnie i systemowo w

ziemniaku, po infiltracji PEP - 13:

•receptor kinazy białkowej - StPERK•czynnik transkrypcyjny - StMYB59

Charakterystyka genów ziemniaka indukowanych podczas patogenezy

Leibniz-Institute of Plant Biochemistry

RT-PCR (reverse transcriptase PCR) •Roślina 11 – RNA 24h po infiltracji PEP – 13•Roślina 12 – RNA 24h po infiltracji PEP – 13

PCR cDNA z odpowiednio zaprojektowanymi primerami dla:

•fragmentu genu receptora kinazy białkowej – StPERK (Roślina 11)

•fragmentu genu czynnik transkrypcyjnego - StMYB59 (Roślina 12)

Charakterystyka genów ziemniaka indukowanych podczas patogenezy

Analiza PCR uzyskanych transformantów

StPERK StMYB59

Leibniz-Institute of Plant Biochemistry

Transformacja bakterii E.coli (DH5α) wektorem pCR zligowanym odpowiednio z StPERK oraz StMYB59

Charakterystyka genów ziemniaka indukowanych podczas patogenezy

Leibniz-Institute of Plant Biochemistry

•Trawienie wyizolowanego i oczyszczonego DNA plazmidowego (pCR) zawierającego fragment genu: StPERK, StMYB59

•Oczyszczanie wytrawionej wstawki

4.5 kb

340 bp

EcoR1 EcoR1

280 bp StPERK pCR 3.9kb

3.9 kb

280 bp

Charakterystyka genów ziemniaka indukowanych podczas patogenezy

Leibniz-Institute of Plant Biochemistry

•Przygotowanie sond StPERK, StMYB59 wyznakowanych izotopem 32P

•Hybrydyzacja typu Northern

24 h

H2O H2O PEP13 PEP13

8 h

H2O H2O PEP13 PEP13

Sonda StPERK, odpowiedź lokalna

Charakterystyka genów ziemniaka indukowanych podczas patogenezy

Leibniz-Institute of Plant Biochemistry

Dziękuję za uwagę