Macam Medium Dan Reagent
25
Click here to load reader
-
Upload
husnu-rizal -
Category
Documents
-
view
126 -
download
3
description
menjelaskan berbagai medium dan reagent yang digunakan di laboratorium khususnya untuk pengujian mikrobiologi
Transcript of Macam Medium Dan Reagent
MACAM MEDIUM DAN REAGENTBy. Drh. Husnurrizal
Medium Yeast Mannitol AgarKomposisi : 1. Mannitol 10 gram 6. CaCO3 3 gram
2. Ekstrak Khamir 0,2 gram 7. Congo Red 1% 2,5 gram
3. K2HPO4 0,5 gram 8 Agar-agar 15 gram
4. MgSO4 0.2 gram 9. Aquadest 1000 ml
5. NaCl 0,1 gram pH :7,4±0,2
Medium Cair Glucosa Extract Khamir (Glukosa Yeast Extract Broth)Komposisi : 1. Trypton 10 gram 4. Glukosa 5 gram
2. Yeast Extract 10 gram 5. Aquadest 1000 ml3. K2HPO4 5 gram pH :7,4±0,2
Medium Cair Tryptopan 1%Komposisi : 1. Trypton 1 gram
2. Aquadest 100 ml pH :7,4±0,2
Medium cair MR-VP (Methyl Red – Voges Prouskauer)Komposisi : 1. Pepton 7 gram 3. K2HPO4 5 gram
2. Glukosa 5 gram 4. Aquadest 1000 ml pH :7,4±0,2
Medium cair Tryptopan + GlukosaKomposisi : 1. Tryptopan 10 gram 3. Aquadest 1000 ml pH :7,4±0,2
2. Glukosa 10 gram
Medium TSI Agar (Triple Sugar Iron Agar)Komposisi : 1. Meat Extract 3. Gram 7. Na2S2O3 0,5 gram
2. Yeast Extract 3 gram 8. Laktosa 10 gram
3. Pepton from Casein 15 gram 9. Sukrosa 10 gram
4. Pepton from Meat 5 gram 10. Glukosa 1 gram5. NH4 Fe (III) Citrat 0,5 gram 11. Agar-agar
15 gram
6. NaCl 5 gram 12. Aquadest 1000 ml
Medium DSI Agar (Double Sugar Iron Agar)Komposisi sama dengan TSI Agar, kecuali : 1. Sukrosa 10 gram
2. Glukosa 1 gram pH :7,4±0,2
Medium SSI Agar (Single Sugar Iron Agar)Komposisi sama dengan TSI Agar, kecuali Glukosa 10 gram pH :7,4±0,2
Medium Cystein/Cystine/Methionine AgarKomposisi : 1. Meat Extract 3 gram 6. NaCl 5 gram
2. Yeast Extract 3 gram 7. Na2S2O3 0,5 gram3. Cystein/Cystine/Methionine 10 gram 8. Agar-agar 15
gram4. Glukosa 10 gram 9.
Aquadest 1000 ml5. NH4 Fe (III) Citrat 0,5 gram pH :7,4±0,2
Medium Simmon CitrateKomposisi : 1. (NH4) H2 PO4 1 gram 5. Mg SO4 0,2 gram
2. K2HPO4 1 gram 6. BTB (Bromo Thymol Blue) 0,08 gram
3. NaCl 5 gram 7. Agar-agar 12-15 gram
4. Na Citrate 2 gram 8. Aquadest 1000 ml
Medium Agar Citrate + GlukosaKomposisi sama dengan Medium Agar Citrat hanya di tambah dengan Glukosa 1 gram
Medium Agar Citrate + LactatKomposisi sama dengan Medium Agar Citrat hanya di tambah dengan Na Laktat/Ca Laktat/Li Laktat sebanyak 1 gram
Medium NitrifikasiKomposisi : 1. K2HPO4/Na2 HPO4 13,5 gram 5. (NH4)2 SO4 2,5 gram
2. KH2PO4 0,7 gram 6. FeCl3. 6 H2O 14,4 gram
3. MgSO4. 7 H2O 0,1 gram 7. CaCl2. 7 H2O 18,4 gram
4. NaHCO3 0,5 gram 8. Aquadest 1000 ml
Medium DenitrifikasiKomposisi : 1. KNO3 2 gram 3. CaCO3 5 gram
2. Glukosa 10 gram 4. Larutan Winogradksy 1000 ml pH :7,4±0,2
Isi Larutan Winogradksy :1. K2HPO4 5 gram 4. Fe SO4. 7H2O 0,05 gram2. Mg SO4. 7 H2O 2,5 gram 5. Mn SO4 0,05
gram3. NaCl 2,5 gram 6. Aquadest 1000
ml
Medium Pati AgarKomposisi : 1. Meat Extract 3 gram 3. Agar-agar 15-20 gram
2. Pati (Soluble Strack) 2 gram 4. Aquadest 1000 ml pH :7,4±0,2
Medium Nutrien GelatineKomposisi : 1. Meat Extract 3 gram 3. Gelatine 12-15 gram
2. Peptone 5 gram 4 Aquadest 1000 ml pH :7,4±0,2
Medium Agar Susu SkimLarutan A komposisi : 1. Peptone 10 gram
2. Agar-agar 20 gram pH :7,4±0,23. Aquadest 1000 gram
Larutan B Susu Bebas Lemak 10% : komposisi : 1.Susu Skim 10 gram2. Aquadest 100 ml
Kedua larutan di buat dan disterilkan secara terpisah. Setelah larutan A dimasukkan ke dalam cawan petri steril, setelah itu baru Larutan B ditambahkan sebanyak 1 ml secara aseptis.
Medium Selulosa AgarKomposisi : 1. K2HPO4 1 gram 5. NaCl 2 gram
2. Mg SO4. 7 H2O 1 gram 6. Selulosa 10 gram3. Na2CO3 1 gram 7. Agar-agar 12-20 gram4. (NH4)2 SO4 2 gram 8. Aquadest 1000 ml
Medium Nutrien AgarKomposisi : 1. Meat Extract 3 gram 3. Agar-agar 15-20 gram
2. Peptone 5 gram 4. Aquadest 1000 ml pH :7,4±0,2
Medium Nitrate CairKomposisi : 1. Meat Extract 3 gram 3. KNO3 1 gram
2. Peptone 5 gram 4. Aquadest 1000 ml pH :7,4±0,2
Medium Kentang Agar (Potato Dextrose/Glukosa Agar)Komposisi : 1. Kentang 200 gram 3. Agar-agar 15-20 gram
2. Dextrose/Glukose 20 gram 4. Aquadest 1000 ml pH :7,4±0,2Kentang di kupas dan di potong kecil-kecil, lalu di rebus sampai lunak (mendidih) disaring
dan diambil filtratnya, lalu filtrat ditambah dengan aquadest sampai 1000 ml dicampur
dengan Dextrose/Glukose + Agar-agar dipanaskan.
Medium YMA (Yeast Mannitol Agar)Komposisi : 1. Mannitol 10 gram 5. NaCl 0,1 gram
2. Extract Khamir 0,2 gram 6. Congo Red 1% 2,5 gram
3. . K2HPO4 0,5 gram 7. Agar-agar 15 gram
4. Mg SO4. 7 H2O 0,2 gram 8. Aquadest 1000 ml
Medium YGA (Yeast Extract Glukosa Agar)Komposisi sama dengan medium YMA tetapi Mannitol diganti dengan Glukosa sebanyak 10 gram.
Medium YSA (Yeast Extract Sukrosa Agar)Komposisi sama dengan medium YMA tetapi Mannitol diganti dengan Sukrosa sebanyak 15 gram.
Medium UreaKomposisi : 1. Peptone 1 gram 5. Phenol Red 0,012 gram
2. Glukosa 1 gram 6. Agar-agar 12 gram3. NaCl 5 gram 7. Aquadest 1000 ml4. KH2PO4 2 gram pH : 6,8±0,2
Untuk kristal Urea 20 gram tidak disterilkan dengan Autoclave tetapi hanya dipanaskan pada suhu 700C (bisa dengan Oven), sedangkan no:1-7 harus disterilkan dengan Autoclave.
Medium Urea (Metode Christensen)
Komposisi : 1. Peptone 1 gram 4. Phenol Red 0,012 gram
2. NaCl 5 gram 5. Agar-agar 15-20 gram3. KH2PO4 2 gram 6. Aquadest 1000 ml
Media tersebut diatas disterilkan dengan Autoclave pada suhu 121 0C selama 20 menit.
Medium Urea + GlukosaKomposisi sama hanya di tambah Glukosa sebanyak 1 gram.
Medium Urea CairKomposisi sama hanya Agar-agar dihilangkan.
Medium Urea (yang Redimite/siap saji)1. Timbang Agar-agar (khusus untuk Urea) sebanyak 15 gram + 1000 ml
aquadest panaskan sampai larut masukkan ke dalam Erlenmeyer di cek pHnya (6,8±0,2) lalu mulut Erlenmeyer ditutup dengan kapas disterilkan (Autoclave suhu 121 0C selama 15 menit)
2. Timbang Kristal Urea sebanyak 29 gram dipanaskan pada suhu ± 70 0C selama 15 menit
3. No. 1 dan 2 di campur secara aseptik (Campuran ini disebut medium Urea)4. Tuang campuran medium tersebut ke dalam tabung reaksi streril secara aseptis.5. Dinginkan dan media siap digunakan.
Medium GliserolKomposisi : 1. Extract Khamir 10 gram
2. Agar-agar 15 gram3. Aquadest 1000 ml
Larutkan dulu bahan-bahan diatas, kemudian saring bila perlu; selanjutnya ditambah dengan Gliserol 20 gram. Disteril dengan Autoclave pada suhu 121 0C selama 15 menit.
Medium Mannitol Phenol Red AgarKomposisi : 1. D (-) Mannitol 10 gram 4. Phenol Red 0,025 gram
2. Pepton 1 gram 5. Agar-agar 15 gram3. Yeast Extract 0,5 gram 6. Aquadest 1000
mlph medium diatur (7,0 ±0,1) lalu disterilkan dengan Autoclave pada suhu 121 0C selama 15 menit.
Medium MC BETHKomposisi : 1. K2HPO4 1 gram 5. CaCl2 2 gram
2. MgSO4.7H2O 1 gram 6. Kertas Filter 1 lembar3. NaCl 1 gram 7. Aquadest 1000 ml
4. (NH4)2.SO4 2 gram pH :7,4±0,2
Medium Glukonobacter OxydansKomposisi : 1. Glukosa 100 gram 3. Agar-agar 15 gram
2. Yeast Extract 10 gram 4. Aquadest 1000 ml pH :6,8±0,2Medium ini dipakai untuk menumbuhkan Acetobacter sp
Medium SSA (Staphylococcus Selektive Agar)Komposisi : 1. Yeast Extract 2,5 gram 6. NaCl 7,5 gram
2. Pepton from Casein 10 gram 7. K2HPO4 5 gram
3. Gelatine 30 gram 8. Agar-agar 1,5 gram
4. Laktosa 2 gram 9 Aquadest 1000 ml
5. Mannitol 10 gram
Medium VJA (Vogel Johnson Agar) = (Staphylococcus Selektive Agar)Komposisi : 1. Pepton from Casein 10 gram 6. Glycine 10 gram
2. Yeast Extract 5 gram 7. Phenol Red 0,025 gram3. Mannitol 10 gram 8. Agar-agar 13 gram4. K2HPO4 5 gram 9. Aquadest 1000 ml5. Lithium Chlorida 5 gram
NB : Tiap 10 ml medium VJA harus ditambah 3-4 tetes Kalium Tellurit 1%.Medium VJA (Vogel Johnson Agar) dan medium SSA (Staphylococcus Selektive Agar) dipakai untuk identifikasi Staphylococcus sp
Medium Glukosa Yeast Extract AgarKomposisi : 1. Extract Khamir 5 gram 4. Agar-agar 20 gram
2. Peptone 5 gram 5. Aquadest 1000 ml3. Glukosa 10 gram
Medium Streptococcus Selektive AgarKomposisi : 1. Peptone 5 gram 7. Glukosa 5 gram
2. Peptone from Casein 14,4 gram 8. Sodium Azide 0,2 gram
3. NaCl 4 gram 9. Crystal Violet 0,0002 gram
4. Na Citrate 1 gram 10. Agar-agar 15 gram
5. L-Cistine 0,2 gram 11. Aquadest 1000 ml
6. Na2SO3 0,2 gram
Medium Lactobacillus Selektive Agar (Rogosa Agar)Komposisi : 1.Peptone from Casein 10 gram 7. Na Acetate 15 gram
2. Yeast Extract 5 gram 8. MgSO4 0,575 gram
3. Glukosa 20 gram 9. Ferri Sulfate 0,034 gram
4. KH2PO4 6 gram 10. Manganase Sulfate 0,12 gram
5. NH4 Citrate 2 gram 11. Agar-agar 15 gram
12. Aquadest 1000 ml6. Polyoxy Ethylen Surbitol Monoblecite 1 gram pH : 5,5±0,2
Medium Dexstrine CairKomposisi : 1. Extract Dagaing 3 gram 4. BTB 1% 1 ml
2. Peptone 5 gram 5. Aquadest 1000 ml3. Dexstrine 5 gram pH :7,0±0,2
Medium Jensen AgarKomposisi : 1. Dextrosa 2 gram. 6. Agar-agar 15 gram
2. Casein 0,2 gram.(yang telah dilarutkan dalam 10 ml NaOH 0,1 ml)
3. K2HPO4 0,5 gram 7. Aquadest 1000 ml4. MgSO4. 7H2O 0,2 gram 5. FeCl3. 6H2O sedikit pH medium :7,0±0,2
Medium Nitrate CairKomposisi : 1. Extract Daging 3 gram 3. KNO3 1 gram
2. Peptone 5 gram 4. Aquadest 1000 ml pH : 7,2±0,2
Medium Lactose CairKomposisi : 1. Extract Daging 3 gram 4. Phenol Red 1,6% 1 ml
2. Peptone 5 gram 5. Aquadest 1000 ml3. Laktosa 5 gram pH :7,0±0,2
Medium Lactose AgarKomposisi : 1. Extract Daging 3 gram 4. BTB 1% 1 ml
2. Peptone 5 gram 5. Agar-agar 15 gram3. Laktosa 5 gram 6. Aquadest 1000 ml
pH : 7,0±0,2
Medium untuk Reduksi SUSUReagent yang dipakai adalah 1. Methylen Blue 5% 0,005 gram
2. Aquadest 100 ml
Medium Peptone Iron AgarKomposisi : 1. Peptone 15 gram 5. Na2S2O3. 5H2O 0,08 gram
2. Proteosa Peptone 5 gram 6. Agar-agar 20 gram
3. Fe NH4 Citrate 0,5 gram 7. Aquadest 1000 ml
4. K2HPO4 1 gram pH : 7,0±0,2
Medium Sukrosa Triptone CairKomposisi : 1. Extract Daging 3 gram 3. Sukrosa 5 gram
2. Triptone 5 gram 4. Aquadest 1000 ml pH : 7,0±0,2
Medium EMB Agar (Eosine Methylene Blue Agar)Komposisi : 1.Peptone from Casein 10 gram 5. Eosin 0,4 gram
2. K2HPO4 2 gram 6. Methylen Blue 0,065 gram
3. Laktosa 5 gram 7. Agar-agar 15 gram
4. Sukrosa 5 gram 8. Aquadest 1000 mlMedium ini selektif untuk bakteri Gram negatip.
Medium EA (Endo Agar)Komposisi : 1. Peptone 10 gram 5. Basic Fuchine 0,4 gram
2. Laktose 10 gram 6. Agar-agar 15 gram3. K2HPO4 3,5 gram 7. Alkohol 40
ml4. Na2SO3 2,5 gram 8. Aquadest 1000
ml pH : 7,1±0,2NB : Medium EA (Endo Agar) mengandung zat penghambat Na2SO3 dan Basic Fuchine.Bila Laktosa negatip media berwarna merah muda dan bila Laktosa positip media berwarna merah tua/merah methalik karena bakteri meragi Fuchine membentuk Aldehide + Asam.
Proses oksidasi juga dapat menyebabkan Laktosa menjadi positip karena O2 dapat memecah ikatan antara Fuchine dengan Sulfite, dimana Sulfite teroksidasi menjadi Sulfat. Medium ini selektif untuk bakteri Gram negatip.
Medium MCA (Mac Conkey Agar)Komposisi : 1. Peptone from Casein 17 gram 6. Neutral Red 0,03 gram
2. Peptone from Meat 3 gram 7. Christal Violet 0,001 gram
3. NaCl 5 gram 8. Agar-agar 15 gram
4. Lactose 10 gram 9. Aquadest 1000 ml
5. Bile Salt 1,5 gram pH : 7,1±0,2NB : Medium MCA (Mac Conkey Agar) mempunyai zat penghambat Garam Empedu dan Kristal Violet.Bila Laktosa positip media menjadi berwarna merah muda dan Laktosa negatip berwarna kuning. Contoh : bakteri E. Coli memfermentasi Laktosa selama 24 jam. Dalam 48 jam jika karbohidratnya (Glukosa) habis maka akan memecah Asam Amino menjadi NH3 (basa) yaitu kuning. Medium ini selektif untuk bakteri Gram negatip.
Medium Agar DarahKomposisi : 1. NaCl 5 gram 4. Agar-agar 15 gram
2. Tryptone 10 gram 5. Aquadest 1000 ml3. Yeast Extract 5 gram pH : 7,0±0,2
NB : tiap-tiap 10 ml medium ini ditambah dengan 1 ml darah.
Medium Salmonelle Shigella AgarKomposisi : 1. Extract Daging 5 gram 7. Ferri Citrate 1 gram
2. Peptone from Meat 5 gram 8. Brilliant Green 0,0003 gram
3. Lactose 10 gram 9. Indikator Neutral Red 0,025 gram
4. Bile Salt 8,5 gram 10. Agar-agar 15 gram
5. Na2S2O3 0,5 gram 11. Aquadest 1000 ml
6. Na Citrate 10 gram pH : 7,0±0,2NB : Pakai tabung reaksi steril panjang dan medium tidak perlu disterilkan.Medium SSA (Salmonella Shigella Agar) mempunyai zat penghambat Brilliant Green & Bile Salt (menghambat bakteri Gram Positip) serta S2O3 & Citrate (menghambat bakteri golongan Coliform). Medium ini selektif untuk bakteri Salmonella dan Shigella. Bakteri Salmonella koloni berwarna Coklat dan
ditengahnya ada titik Hitam; sedangkan Shigella koloni kecil-kecil dan berwarna Coklat.
Medium BSA (Bismuth Sulfite Agar)Komposisi : 1. Extract Daging 5 gram 6. Brilliant Green 0,025 gram
2. Peptone from Meat 10 gram 7. Bismuth Sulfide (Indikator) 8 gram
3. Glukosa 5 gram 8. Agar-agar 15 gram
4. K2HPO4 4 gram 9. Aquadest 1000 ml
5. FeSO4 0,3 gramNB : Pakai tabung reaksi steril panjang dan medium tidak perlu disterilkan.Medium BSA (Bismuth Sulfite Agar) mengandung zat penghambat Brilliant Green (menghambat bakteri Gram Positip) dan Bismuth (menghambat bakteri Proteus dan bakteri golongan Coliform)Koloni Salmonella : Mata ikan (Fish Eye)/Mata Kelinci (Rabbit’s Eye)koloni bulat, ditengah koloni warna hitam dan pinggirnya warna perak methalik. Warna Hitam terjadi karena Sulfite bereaksi dengan Ferro sedangkan warna Perak Methalik bereaksi dengan Bi2+.
Medium PSA (Pseudomonas Selektif Agar)Komposisi : 1. Pepton from Casein 10 gram 5. Glyserol 10 gram
2. Pepton from Meat 10 gram 6. Agar=agar 15 gram
3. MgSO4 1,5 gram 7. Aquadest 1000 ml
4. K2HPO4 1,5 gram pH : 7,2
Medium S.I.M (Sulfida Indole Motilitas)Komposisi : 1. Pepton from Casein 20 gram 4. Na2S2O3 0,2 gram
2. Pepton from Meat 6 gram 5. Agar-agar 3 gram3. NH4 Iron (III) Citrat 0,2 gram 6. Aquadest 1000
ml pH : 7,3±0,2
Medium KIA (Kliger’s Iron Agar)Komposisi : 1. Beef Extract 3 gram 7. Ferro Sulfat 0,2 gram
2. Yeast Extract 3 gram 8. NaCl 5 gram
3. Peptone 15 gram 9. Na2S2O3 0,3 gram
4. Protease Peptone 5 gram 10. Phenol Red 0,024 gram
5. Laktose 10 gram 11. Agar-agar 12 gram
6. Dextrose 1 gram 12. Aquadest 1000 ml pH : 7,4±0,2
Medium Simmon CitrateKomposisi : 1. (NH4)2 H2PO4 1 gram 5. MgSO4 0,2 gram
2. K2HPO4 1 gram 6. BTB 0,08 gram
3. NaCl 5 gram 7. Agar-agar 12 gram
4. Na Citrate 2 gram 8. Aquadest 1000 ml pH : 6,8±0,2
Medium PAD (Phenyalanine Deaminase)Komposisi : 1. Yeast Extract 1 gram 6. L-Phenyalanine 1 gram
2.( NH4)2 Sulfat 2 gram 7. BTB 0,025 gram
3. K2HPO4 0,6 gram 8. Agar-agar 12-15 gram
4. KH2PO4 0,4 gram 9. Aquadest 1000 ml
5. NaCl 2 gram pH : 6,9±0,2
Medium Ornitine DecarboxylaseKomposisi : 1. Peptone from Meat 5 gram 4. BCP (Bromo Cresol Purple) 0,016 gram
2. Yeast Extact 3 gram 5. Ornitine 5 gram
3. Glukose 1 gram 6. Aquadest 1000 ml pH : 6,7±0,2
Medium Peptone AlkaliKomposisi : 1. Peptone from Meat 10 gram 4. KH2PO4 1,5 gram
2. NaCl 5 gram 5. Aquadest 1000 ml
3. K2HPO4 9 gram pH : 8,8±0,2
Medium Arginine DihidrolaseKomposisi : 1.Peptone from Meat 5 gram 4. BCP (Bromo Cresol Purple) 0,016 gram
2. Yeast Extact 3 gram 5. Arginine Monohydrochloride 5 gram
3. Glukose 1 gram 6. Aquadest 1000 ml pH : 6,7±0,2
Medium Tryptone CairKomposisi : 1. Tryptone 10 gram
2. NaCl 5 gram3. Aquadest 1000 ml pH : 7,3±0,2
Medium LIA (Lysine Irone Agar)Komposisi : 1. Peptone from Meat 5 gram 6. Lysine Monohydrochloride 10 gram
2. Yeast Extact 3 gram 7. BCP (Bromo Cresol Purple) 0,02 gram
3. Glukose 1 gram 8. Agar-agar 12,5 gram
4 Na2S2O3 0,04 gram 9. Aquadest 1000 ml
5. NH4Ferri Citrat 0,05 gram
Medium LDS (Lysine Deaminasi Sulfhidrase)Komposisi : 1. Peptone from Meat 4,5 gram 7. Na2S2O3 0,2 gram
2. Peptone from Saymeal 2 gram 8. NH4 Ferro Sulfat 0,2 gram
3. Yeast Extract 3 gram 9. BCP 0,032 gram
4. NaCl 5 gram 10. Agar-agar 6 gram
5. Glukosa 1 gram 11. Aquadest 1000 ml
6. Lysine Monohydrochloride 10 gram pH : 5,6±0,2
Medium Gula-gulaKomposisi : 1. Extract Daging 3 gram 3. Phenol Red 1% 1 ml
2. Peptone 5 gram 4. Aquadest 1000 mlSetelah semua komposisi itu larut, cek pHnya : 7,0±0,2, baru tambahkan Karbohidrat (Glukosa, Laktosa, Sukrosa, Maltosa, Dextrosa, dsb) sebanyak @ 5 gram ; dan jangan lupa diberi tanda pada tutup atau kapasnya nama-nama dari karbohidrat tsb.
Medium Mannitol Salt Phenol Red AgarKomposisi : 1. Peptone from Meat 10 gram 5. Phenol Red 0,025 gram
2. Extract Daging 1 gram 6. Agar-agar 15 gram
3. NaCl 7,5 gram 7. Aquadest 1000 ml
4. Mannitol 10 gram
Medium SGA 4%(Sabaraut Glukosa Agar 4%) (* + Chlorampenicol 100 mg/1000 ml)Komposisi : 1. Special Peptone 10 gram 3. Agar-agar 15 gram
2. Glukosa/Maltosa/Dextrosa 40 gram 4. Aquadest 1000 mlCatatan : Bila untuk menumbuhkan Bakteri tidak perlu di tambah Chlorampenicol. Bila untuk menumbuhkan Jamur maka perlu di tambah dengan Chloramphenicol.
Medium MRS Agar (De Man Rogosa Sharpe)Komposisi : 1. Peptone 10 gram 7. (NH4)2 Hydrogen Citrate 2 gram
2. Extract Daging 5 gram 8. Na Acetat 5 gram
3. Yeast Extract 5 gram 9. Mg SO4 0,1 gram
4. Glukosa 20 gram 10. Mn SO4 0,05 gram
5. K2HPO4 2 gram 11. Agar-agar 12 gram
6. Tween 80 1 gram 12. Aquadest 1000 mlpH media : 6,5±0,2. Untuk yang redimite MRS Agar =62 gram/lt dan MRS Cair=50 gram/lt
Media Sulfite Irone Agar BaseKomposisi : 1. Peptone from Casein 15 gram 4. FeSO4 1,4 gram
2. Yeast Extract 10 gram 5. Agar-agar 15 gram3. Na2SO3 0,5 gram pH : 6,9±0,2.
Medium Agar Darah TelluriteKomposisi : 1. Peptone 10 gram 3. Agar-agar 15 gram
2. NaCl 5 gram pH : 7,8±0,2.NB : medium disterilkan dengan Autoclave; dinginkan ad.Suhu ± 55 0C;tambah dengan darah 5% dan 10 ml Kallium Tellurite 3,5%.
Medium OxgalKomposisi : 1. Extract Daging 3 gram 3. Bile Salt 8%
2. Peptone 5 gramCatatan : Medium Oxgal dapat juga dibuat dari 100 ml Medium Nutrien Cair + Bile Salt 8 gram
Medium ThioglycolatKomposisi : 1. Peptone from Casein 15 gram 6. Na Thioglycolate 0,5 gram
2. Yeast Extract 5 gram 7. Na Resozurine 0,001 gram
3. Glukosa 5,5 gram 8. Agar-agar 0,75 gram
4. Cysteine 0,5 gram 9. Aquadest 1000 ml
5. NaCl 2,5 gram pH : 7,1±0,2.
Medium Lowenstein Jensen Agar Larutan I berisi : 1. Asparagin 3,6 gram 4. Mg
Sulfate 0,024 gram2. KH2PO4 2,4 gram 5. Glyserine
12 ml3. Mg Citrate 0,6 gram 6. Aquadest 600
mlLarutan I disterilkan dengan Autoclave pada suhu 115 0C selama 15 menit.
Larutan II berisi : 100 ml Telur Ayam atau Telur Bebek yang sudah dikocok homogen dan secara aseptis.Cara pembuatan larutan II :1). Siapkan Erlenmeyer steril yang berisi Glass Parel atau Glass Bite (bila tidak ada Glass Parel atau Glass Bite pakailah kerikil).2). Telur Ayam atau Telur Bebek dicuci sampai bersih lalu direndam dalam Alkohol 70% selama ± 24 jam
Larutan III berisi : 20 ml Malacite Green sterilLarutan I+II+III dicampur secara aseptis, kemudian dibagi-bagikan kedalam tabung reaksi steril secara aseptis sebanyak @ 5 ml. Lalu tabung-tabung ini dipanaskan pada suhu 85 0C selama 45 menit dalam inspirator.
Medium ini dipakai untuk menumbuhkan bakteri Mycobacterium tuberculosis.
Medium PAIKomposisi : 1. Telur 3 bagian
2. NaCl 0,85% 1 bagianNB : cara membuat medium ini sama seperti membuat medium Lowenstein Jensen, lalu dipanaskan pada suhu 90 0C selama 1 jam. Medium ini dipakai untuk menumbuhkan Corynebacterium difteri
Medium CSA (Corynebacterium Selective Agar (Cat: 5416) 500 gram)Cara pembuatan : Timbang 42 gram medium CSA + 1000 ml Aquadestpanaskan ad. Larut. Autoclave pada suhu 121 0C selama 15 menit. Dinginkan sampai suhu ± 45-50 0C setelah itu tambah dengan 50 ml Serum/lt dan 5-10 ml Kalium Tellurite 1% campur.
Medium untuk bakteri Asam Laktat : Medium Semi Solid MRS + Juice Tomato 20%
Cara pembuatan Juice Tomato 20% :1. Timbang Tomat sebanyak 20 gram2. Tambah 100 ml Aquadest3. Blender tomat tersebut4. Saring dan ambil air tomat yang jernih
Cara pembuatan medium MRS + Juice Tomato 20%1. Timbang medium MRS (Menurut kebutuhan)2. Tambahkan 100 ml cairan Juice tomat tersebut kedalam medium MRS3. Campur dan panaskan hingga larut4. Sterilkan medium tersebut dengan Autoclave pada suhu 121 0C selama 15 menit
Medium untuk bakteri Pediococcus halophyllus : Medium MRS + NaCl 5%Cara pembuatan NaCl 5% :
1. Timbang kristal NaCl sebanyak 5 gram2. Tambah dengan aquadest 100 ml3. Campur hingga larut
Cara pembuatan medium MRS + NaCl 5%1. Timbang medium MRS (Menurut kebutuhan)2. Tambahkan 100 ml larutan NaCl 5% tersebut kedalam medium MRS3. Campur dan panaskan hingga larut4. Sterilkan medium tersebut dengan Autoclave pada suhu 121 0C selama 15 menit
NB : Semua bakteri yang ditanam pada medium MRS hanya bertahan ± 2 minggu, sehingga sebelum 2 minggu bakteri tersebut perlu diremajakan.
Macam-macam bakteri yang memakai medium MRS + Juice Tomato 20%; MRS + NaCl 5%; dan TSA (Tryptone Soya Agar) adalah :
1. Leuconostoc mesenteroides FNCC : 0023 Medium TSA2. Acetobacter acetti FNCC : 0016 Medium TSA3. Lactobacillus bulgaricus FNCC : 0041 Medium MRS + Juice
Tomato 20% suhu pertumbuhannya 43-46 0C4. Lactobacillus plantarum FNCC : 0027 MRS + Juice Tomato
20%5. Pediococcus halophyllus FNCC : 0032 MRS + NaCl 5%6. Streptococcus thermophyllus FNCC : 0015 TSA suhu
pertumbuhannya 43-45 0C7. Staphylococcus epidermidis FNCC : 0048 TSA8. Enterococcus faecium FNCC : 0014 TSA9. Staphylococcus aureus FNCC : 0047 TSA10. Pseudomonas aeruginosa FNCC : 0063 TSA11. Bacillus cereus FNCC : 0057 TSA12. Bacillus subtilis FNCC : 0003 TSA13. Salmonella thypynum FNCC : 0050 TSA14. Lactobacillus acidophyllus FNCC : 0042 Medium MRS + Juice
Tomato 20% suhu pertumbuhannya 37-45 0C15. Streptococcus lactis dan Streptococcus eremoris suhu pertumbuhannya
25 0C
Catatan : 1. NRRL : Nothern Regional Reaserch Laboratory. 2. ATCC : American Type Culture Colections. 3. FNCC : Farming National Culture Colection.
Macam-macam indikator pH yang biasa dipakai untuk pembuatan medium :Nama Indikator Konsentrasi Nilai pH Perubahan warna (Asam ke basa)1. Thymol Blue 0,04% 1,2 - 2,8 Merah ke Kuning2. Methyl Orange 0,05% 3,1 - 4,4 Kuning ke Biru3. Brom Phenol Blue 0,48% 3,1 – 4,7 Kuning ke Biru4. Brom Cresol Green 0,04% 3,8 – 5,4 Kuning ke Biru5. Methyl Red 0,02% 4,2 – 6,3 Merah ke Kuning6. Klor Fenol Red 0,04% 5,1 – 6,7 Kuning ke Merah7. Brom Cresol Ungu 0,04% 5,4 – 7,0 Kuning ke Ungu8. Brom Thymol Blue 0,04% 6,1 – 7,7 Kuning ke Biru9. Phenol Red 0,02% 6,9 – 8,5 Kuning ke Merah10. Cresol Red 0,02% 7,4 – 9,0 Kuning ke Merah11. Thymol Blue 0,04% 8,0 – 9,6 Kuning ke Biru12. Phenolpthlain 0,10% 8,3 – 10 Tanpa warna ke Merah
Macam dan cara pembuatan Indikator :1. Methyl Orang (MO) : 0,5 gram MO bebas asam + 1000 ml aquadest, lalu disaring2. Methyl Red (MR) : 1 gram MR bebas asam + 1000 ml aquadest panaskan atau
larutkan dalam 600 ml alkohol + 400 ml aquadest3. Phenolpthlain (PP) : 5 gram PP + 500 ml alkohol + 500 ml aquadest4. Thymolphthalein (TP) : 0,4 gram TP + 600 ml alkohol + 400 ml aquadest5. α – Naphtholphthalein (α – NPt) : 1 gram α – NPt + 500 ml alkohol + 500 ml
aquadest6. Methyl Yellow (MY) : 1 gram MY dilarutkan dalam 1000 ml alkohol 80%7. Netral Red (NR) : 1 gram NR dilarutkan dalam 1000 ml alkohol 80%8. Congo Red (CR) : 1 gram CR dilarutkan dalam 1000 ml alkohol 80% atau 1000 ml
aquadest
Indikator yang mempunyai gugus Sulphonephthalein biasanya bersifat asam dan dapat larut dalam aquadest dengan penambahan NaOH.Penambahan NaOH bertujuan untuk menetralkan potensial asam Sulphanilat.
9. Bromo Phenol Blue (BPB) : 1 gram BPB + 15 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest10. Bromo Cresol Green (BCG) : 1 gram BCG + 14,4 ml NaOH 0,1N + 1000 ml
aquadest11. Bromo Cresol Purple (BCP) : 1 gram BCP + 18,6 ml NaOH 0,1N + 1000 ml
aquadest12. Chloro Phenol Red (CPR) : 1 gram CPR + 23,6 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest13. Bromo Thymol Blue (BTB) : 1 gram BTB + 16 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest14. Phenol Red (PR) : 1 gram PR + 16 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest15. Thymol Blue (TB) : 1 gram TB + 21,5 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest16. Cresol Red (CR) : 1 gram CR + 26,2 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest17. Meta Cresol Purple (MCP) : 1 gram MCP + 26,2 ml NaOH 0,1N + 1000 ml aquadest
18. Indikator Universal :a. 0,25 gram Bromo Thymol Blue (BTB) + 500 ml alkohol + 1000 ml aquadestb. 0,025 gram Thymol Blue (TB) + 500 ml alkohol + 1000 ml aquadestc. 0,625 gram Methyl Red (MR) + 500 ml alkohol + 1000 ml aquadestd. 0,5 gram Phenolphthalein (PP) + 500 ml alkohol + 1000 ml aquadest
Macam dan cara pembuatan reagent1. Reagent EHRLICH.a. Ehrlich A : - Paradimethyl amino benzaldehide 2 gram
- Alkohol 95% / spiritus fortior 95% 190 ml- HCl pekat/HCl cone 40 ml
b. Ehlich B : - Kalium Persulfat (K2S2O8) jenuh dalam aquadest
2. METHYL RED : timbang 1gram Methyl Red tambah dengan 300 ml Alkohol 95% dicampur sampai larut; setelah larut baru di tambah dengan 500 ml aquadest.
3. H2O2 3% : ambil 10 ml H2O2 pekat (30%) tambah dengan 90 ml aquadest.
4. KOH 40% : timbang 40 gram kristal KOH tambah dengan 100 ml aquadest.
5. Reagent BARRIT : timbang 5 gram serbuk α-Napthol lalu tambah dengan 95 ml Alkohol 95%.
6. Reagent NESSLER : HgCl2 + KI sampai mengendap Jingga tepat larut + NaOH (penambahan NaOH berhenti jika ditambah NH4Cl terjadi endapan Coklat).
7. Reagent ZN (Ziel Nellson)ZN A : Larutan A : timbang 0,3 gram Basic Fuchine + 10 ml Alkohol 95%.
Larutan B : timbang 5 gram Phenol + 95 ml Aquadest.Lalu larutan A dan Larutan B dicampur.
ZN B : Alkohol Asam 3% : ambil 3 ml HCl 37% (HCl Pekat/cone) atau ambil 5 ml H2SO436 N (H2SO4 pekat/cone) + 100 ml Alkohol 95%.
ZN C : Timbang 0,3 gram serbuk Methylen Blue + 30 ml Alkohol 95% diaduk sampai larut; lalu tambah dengan 100 ml Aquadest, aduk sampai larut setelah itu disaring.
8. Cat GRAMa. Gram A : Larutan 1 : timbang 2 gram Kristal Violet + 20 ml Alkohol 95%
Larutan 2 : timbang 0,8 gram NH4 Oksalat + 80 ml Aquadest. Campur larutan 1 dan larutan 2.
b. Gram B : timbang 1 gram kristal Iodine + 2 gram kristal KI; dicampur dan digerus;Setelah tercampur baru tambah 300 ml Aquadest.
c. Gram C : ambil 700 ml Alkohol 95% + 300 ml Aceton.d. Gram D : timbang 0,25 gram serbuk Safranin + 10 ml Alkohol 95% campur sampai
larut lalu tambah dengan 100 ml Aquadest.
9. KARBOL FUCHINE : ambil 10 ml larutan jenuh Fuchine dalam Alkohol 95% + 90 ml Fenol 5%.
10. LAKTOFENOL:Isi : 1. Kristal Fenol 20 gram 3. Gliserine 40 ml2. Asam Laktat 20 ml 4. Aquadest 40 ml
11. LAKTOFENOL COTTON BLUE:Isi : 1. Kristal Fenol 20 gram 4. Cotton Blue 0,05 gram2. Asam Laktat 20 ml 5. Aquadest 40 ml3. Gliserine 40 ml
12. MALACHITE GREEN 5% : timbang 5 gram Kristal Malachite Green + 100 ml Aquadest
13. MORDANIsi : 1. Tanin 20% 2 ml 3. Larutan jenuh Al K(SO4)2 atau Tawas (Al(SO4)2 5 ml
2. HgCl2 jenuh 2 ml
14. NIGROSIN : timbang 10 gram serbuk Nigrosin; larutkan Nigrosin dalam 100 ml aquadest, panaskan sampai mendidih selama 30 menit, tambah 0,5 ml Formalin (sebagai pengawet) campur, lalu saring dengan kertas saring.
15. Reagent NEISSER :o Neisser A : isi 1. Methylen Blue 0,3 gram 2.
Alkohol 95% 6 ml3. Asam Acetat Glacial 15 ml 4. Aquadest panas 285 ml
o Neisser B : isi 1. Kristal Violet 1 gram 2. Alkohol 95%
10 ml3. Aquadest panas 300 ml
o Neisser C : isi I. Bismark Brown : 1 gram + Aquadest panas : 500 ml.
II. Chrysoidine : 1 gram + Aquadest panas : 300 ml.III.Vesuvine : 1 gram + Aquadest panas : 500 ml.NB : Untuk Neisser C : PILIH SALAH SATU SAJA.(Pengecatan ini
dipakai untuk pewarnaan Granula)
16. ASAM ACETAT 5% : ambil 5 ml Asam Acetat Glacial (99,7%) + 100 ml Aquadest.
17. ASAM BORAT 0,2 N : timbang 12,4 gram kristal Asam Borat pekat + 1000 ml Aquadest.
18. ASAM NITRAT 10% : ambil 14,5 ml HNO3 pekat (69%) + 100 ml Aquadest.
19. CuSO4 20% : timbang 20 gram kristal CuSO4.5H2O + 100 ml Aquadest.
20. FENOL 5% : timbang 5 gram kristal Fenol + 100 ml Aquadest.
21. GLISERINE 5% : ambil 5,26 ml + 100 ml Aquadest.
22. HCl 1% : ambil 1 ml HCl pekat (37%) + 100 ml Aquadest.
23. HCL 0,1N : ambil 10 ml HCl pekat (37%) + 1000 ml Aquadest.
24. HgCl2 : timbang 0,1 gram kristal HgCl2 + 100 ml Aquadest.
25. H2O2 3% : ambil 10 ml H2O2 pekat (30%) + 90 ml Aquadest.
26. K2HPO4/Na2HPO4 0,2 N: timbang 34,9 gram kristal K2HPO4/Na2HPO4+1000 ml Aquadest.
27. NaCl 0,85% : timbang 0,85 gram kristal NaCl + 100 ml Aquadest.
28. NaOH 1N : timbang 40 gram kristal NaOH + 1000 ml Aquadest.
29. NaOH 0,2N : timbang 80 gram kristal NaOH + 1000 ml Aquadest.
30. VASPAR : timbang 50 gram Vaseline + 50 gram Parafine.
31. IODIUM 10% : timbang 10 gram kristal Iodium (I2) + 20 gram kristal KI dicampur dan digerussambil diberi Aquadest 100 ml perlahan-lahan.
32. Larutan Pencuci (K2Cr2O7) : Timbang 4,9 gram kristal K2Cr2O7 + 100 ml Aquadest campur hingga homogen lalu tambah secara pelan-pelan cairan H2SO4 pekat/cone (sama banyak).Nb : jangan dibalik cara masukkannya.
33. Larutan STANDART BROWN :Isi : BaSO4 1% dan Na Citrate 1%Cara : 1. Campurlah 7 ml BaSO4 1% dengan 49 ml NaCitrate 1%.2. Bagilah campuran ini dalam 10 tabung reaksi steril, masing-masing 1 ml, 2 ml, 3 ml, dan seterusnya sampai tabung ke 10 yang berisi 10 ml.3. Tambahkan dalam masing-masing tabung Na Citrate 1% sehingga volume masing-masing tabung menjadi 10 ml.
34. STANDART BROWN III : 0,5 ml BaCl2.2H2O 1,17% + 99,5 ml H2SO4 (0,36 N) 1%
35. Larutan LDF (Larutan Dapar Fosfat = Larutan Buffer Fosfat)a. LDF I : 1. K2HPO4 1 gram 2. KH2PO4 4 gram
3. Aquadest 300 ml pH : 6,0±0,1b. LDF II : 1. K2HPO4 16,730 gram 2. KH2PO4 0,5 gram
3. Aquadest 1000 ml pH : 8,0±0,1(NB : pengaturan pH dibuat dengan Asam Fosfat 18N dan KOH 10N yang sudah diencerkan dengan aquadest steril sampai 500 ml)
36. Membuat HCl 25% sebanyak 100 mlCara : konsentrasi HCl pekat = 37%
Pakai Rumus : (VN)1 = (VN)2
37 25 V1. 37 V1. ------ = 100.------ -------- = 25 37.V1 =
2500100 100 100
2500V1 = --------- = 67,6 V1 = 67,6 ml. 37
Jadi dipipet HCl pekat (37%) sebanyak 67,6 ml lalu ditambah dengan 32,4 ml Aquadest.
Note: diambil dari berbagai sumber
