5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 1/27

BIOTECHNOLOGIA W

KRYMINALISTYCE

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 2/27

Wprowadzenie

Największe zmiany, jakie zaszły w ostatnich

latach w biologii kryminalistycznej, związane są

z wprowadzeniem do badań technik genetykimolekularnej. Dzięki pracowania reakcji PCR

możliwa stała się indywidualizacja tak małych

śladów, jak np. pojedyncza cebulka włosowa,

czy też mikrośladowe zaplamienia krwią lubwydzielinami ciała ludzkiego, wobec których

klasyczne metody serologiczne były bezradne. 

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 3/27

Metody biotechnologiczne

• Ekstrakcja DNA z biologicznych próbek

• Metody typowania DNA w locus DQα 

• 5 loci PolyMarkera• Locus D1S80, TH01, VWA, FGA, CD4

• Fragmenty genu amelogeniny

umożliwiające określenie płci 

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 4/27

Locus DQα i pięć loci PolyMarkera 

• DQα (Human Leukocyte Antigen )

• LDLR (Low Density Lipoprotein Receptor)

• GYPA (Glycophorin A)

• HBGG (Hemoglobin G Gammaglobin)• D7S8

• GC (Group Specific Component)

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 5/27

Locus D1S80

• Region VNTR

• 16 par zasad powtarzających się

wielokrotnie

• Definiowane cyframi od 14 do 41

• Wysoki współczynnik dyskryminacji 

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 6/27

Fragment genu amelogeniny

• Gene Print™ Sex Determination System 

• XX: 212pz

• XY: 212 i 218pz• Wysoce konserwatywna budowa

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 7/27

Fragment genu amelogeniny

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 8/27

STR w locus TH01, VWA, FGA,CD4

• Shost Tandem Repeats liczące 2-7 pz

• Wysoki polimorfizm

• TH01 na chromosomie 11• VWA na chromosomie 12

• FGA ma chromosomie 6

• CD4 na chromosomie 12 

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 9/27

Ekstrakcja DNA

• Oddzielne pomieszczenie

• Niezbędne wyposażenie 

• Ekstrakcja organiczna - bardzo skutecznametoda

• Procedura

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 10/27

Ekstrakcja DNA

• Krew płynna, fragmenty zamrożonychtkanek miękkich 

• Plamy krwi, śliny, nasienia 

• Wymazy z ust

• Drobiny krwi, zeskrobiny spod paznokci

• Plamy będące mieszaninami 

• Wymazy z pochwy

• Włosy 

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 11/27

Etapy badań: 

• Ekstrakcja DNA

• Ocena ilości wyizolowanego DNA 

• Typowanie DNA w układzie PolyMarkera iHLA DQα: nastawienie reakcji PCR,ocena produktów PCR na żelu

agarozowym, hybrydyzacja i barwienieproduktów PCR

• Interpretacja wyników

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 12/27

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 13/27

Interpretacja wyników PM

• Na podstawie zabarwionych na niebieskokropek

• Odczyt pasków w stanie mokrym

• Intensywność zabarwienia świadczy o

pozytywnej próbie

• Różnica intensywności wskazuje namieszany charakter próbki

• Kontrola ujemna

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 14/27

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 15/27

Interpretacja wyników w locus DQα 

• Porównanie uzyskanego wzoru na paskutestowym z sondami komplementarnymi

• Początek odczytu od C 

• Kontrola ujemna

• Kontrola dodatnia

• Wybarwienie na kolor niebieski

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 16/27

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 17/27

Definiowanie alleli

• Na zasadzie porównania

• Na wynik duży wpływ ma ilość DNA 

• Zjawisko wypadania alleli (allele dropout) • Przykłady 

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 18/27

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 19/27

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 20/27

 Archiwizacja żeli 

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 21/27

Definiowanie alleliTH01,VWA,FGA,CD4

• Sprawdzenie pochodzenia prób

• Typowanie na zasadzie porównania

• Odczyt na mokrych żelach • Przykłady 

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 22/27

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 23/27

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 24/27

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 25/27

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 26/27

Literatura:

• „Badanie polimorfizmu DNA przy użyciu techniki

PCR” - Wydawnictwo Centralnego LaboratoriumKryminalistycznego KGP Warszawa 2000

• http://clk.policja.pl/portal/clk/503/11021/Zespol_ Bazy_Danych_DNA.html

• http://clk.policja.pl/portal/clk/503/11026/Zespol_ Badan_Biologicznych.html

• http://www.biote21.com/html/pl/sek-home-01.html

5/16/2018 12-Biotechnologia w kryminalistyce - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/12-biotechnologia-w-kryminalistyce 27/27

Pytania: