[Nr 100] Dynamics of retroelements activity during reprogramming of human fibroblast to induced pluripotent stem cells(iPSc)

Katarzyna Tomczak 1,2, Katarzyna Szatkowska 2, Urszula Oleksiewicz 2, Maciej Wiznerowicz 2,3

1Postgraduate School of Molecular Medicine, Medical University of Warsaw, Warsaw, Poland2Laboratory of Gene Therapy, Department of Cancer Immunology, The Greater Poland Cancer Centre, Poznań, Poland3Department of Cancer Immunology and Diagnostics, Chair of Medical Biotechnology, Poznań University of MedicalSciences, Poznań, Poland

E-mail address: tomczak.kate@gmail.com

Aim: Retroelements constitute around 90% of all transposable elements in the human genome. These endogenous parasitesequences are able to move through the genome from one location to another contributing to genome diversity and disease,including cancer. The expression of mobile elements is regulated by epigenetic mechanisms including histone modificationsand DNA methylation. Intensive epigenetic remodelling of the chromatin structure is important process occurring duringcellular reprogramming and formation of induced pluripotent stem cells (iPS) through forced expression of selectedtranscription factors. Here, we investigated the dynamics of retroelements activity during generation of induced pluripotentstem cells (iPS).

Material and methods: Retroelements activity was measured in primary human dermal fibroblasts (PHDF) cells duringreprogramming to pluripotent state. Plasmids containing L1 cassette and encoding EGFP gene were incorporated intoPHDFs via nucleofection. Cells were transducted with lentiviral vector (STEMCCA) containing four Yamanaka'stranscription factors OKSM (Oct-3/4, Klf4, SOX2 and c-Myc). Morphology changes were observed daily and the percentageof EGFP positive cells was evaluated by FACS analysis.

Results:Our research confirmed that cellular reprogramming process induces activation of retroelements (such as LINE-1)in human cells. 10-fold of EGFP positive cells containing L1 plasmid were observed during reprogramming of PHDF to iPSc.

Conclusions: Our ongoing experiments are aimed towards profiling of dynamics of retroelements activity duringreprogramming of human cells depleted of selected epigenetic factors gene expression. Our project will contribute to betterunderstanding of the molecular mechanisms that control retroelements during cellular reprogramming and are involved inhost defence against these genomic parasites.

http://dx.doi.org/10.1016/j.onko.2013.09.101

[Nr 101] Wykorzystanie brachyterapii HDR w leczeniu wznowy miejscowej raka prostaty

Mirosław Kolbusz *, Jarosław Łyczek, Łukasz Kowalik

Zakład Brachyterapii, Szpital Specjalistyczny w Brzozowie Podkarpacki Ośrodek Onkologiczny im. Ks. B. Markiewicza,Brzozów

*PrelegentAdres email: lukasz@kowalik.org

Cel: Ocena skuteczności leczenia ratunkową brachyterapią HDR pacjentów ze wznową raka prostaty, leczonychpierwotnie radykalnie metodami radioterapii z pól zewnętrznych, brachyterapii oraz metodą skojarzoną (leczeniechirurgiczne + uzupełniająca EBRT)

Materiał i metody: W latach 2000–2013 leczono 173 chorych ze wznową miejscową raka gruczołu krokowego. Kryteriawłączenia: choroba potwierdzona badaniem histopatologicznym, wyłącznie miejscowe zaawansowanie choroby (wykluczenieprzerzutów odległych w badaniu NMR, CT, scyntygraficznym), wartość PSA < 50 ng/ml. Wszyscy chorzy byliprzygotowywani do leczenia ratunkowego 3-miesięczną całkowitą blokadą androgenową. Przy kwalifikacji analizowanostopień złośliwości klinicznej, wyjściowy stopień zaawansowania klinicznego, techniki pierwotnego leczenia radykalnego,czas od zakończenia leczenia do zdiagnozowania wznowy. Kryteria wyłączenia obejmowały chorych po 70. roku życia, cechęT3b, trwałe i znacznie nasilone efekty jatrogenne po leczeniu pierwotnym (ze strony cewki moczowej i narządów miednicymniejszej). Terapia wznowy prowadzona była w 3 frakcjach z 21-dniowymi odstępami, z podaniem dawki 10 Gy na obszarPTV. W znieczuleniu podpajęczynówkowym marcainą zakładano aplikatory igłowe pod kontrolą TRUS na płytcestabilizującej, z założonym cewnikiem Foley'a No 16F (cewnik utrzymywano do 24 godzin po zabiegu). Planowaniew systemie Oncentra Prostate Nucletron. Po zakończonym leczeniu analizowano 5-letnie przeżycie całkowite, przeżycie wolneod objawów choroby w korelacji z wyjściowym stopniem zaawansowania klinicznego, stopniem złośliwości histologicznejoraz wartością PSA.

Zeszyty Naukowe WCO, Letters in Oncology Science 10S (2013) 1–79 55

Wyniki: Uzyskano przeżycie całkowite 5-letnie na poziomie 72% i wolne od objawów na poziomie 53%. Dla p < 0,0015-letnia przeżywalność przy wyjściowym stopniu Gleasona < 6 pkt wynosiła 81%, a dla wartości równych i powyżej 6 pktw skali Gleasona – 43%. Nie wykazano istotnej znamienności statystycznej dla 5-letniego przeżycia zależnego od stopniazaawansowania klinicznego (dla T1, T2, T3 odpowiednio 81%, 72%, 67%). Również wartość PSA nie wykazywała istotnychróżnic statystycznych (wartość graniczną stanowiło 10 ng/ml). Przy p > 0,001 istotny statystycznie dla 5-letniejprzeżywalności jest czas, jaki upłynął od zakończenia leczenia pierwotnego do wznowy (< 2 lat – przeżywalność35%, > 2 lat – 84%).

Wnioski: Ratująca brachyterapia HDR jest metodą bezpieczną i preferowaną w leczeniu wznowy miejscowej u pacjentówleczonych wcześniej radykalnie innymi metodami, a niezbędnym warunkiem jest odpowiednia kwalifikacja pacjentów.Jednym z najważniejszych czynników predykcyjnych jest czas, jaki upłynął od zakończenia leczenia do wznowy, zaś bardzoistotnym czynnikiem prognostycznym jest stopień złośliwości w skali Gleasona.

http://dx.doi.org/10.1016/j.onko.2013.09.102

[Nr 102] Źródła promieniotwórcze stosowane w brachyterapii nowotworów

Łukasz Kowalik *, Jarosław Łyczek

Zakład Brachyterapii, Szpital Specjalistyczny w Brzozowie Podkarpacki Ośrodek Onkologiczny im. Ks. B. Markiewicza,Brzozów

*PrelegentAdres email: lukasz@kowalik.org

Cel: Porównanie źródeł promieniowania HDR używanych w brachyterapii nowotworów, najpopularniejszych na rynkueuropejskim oraz ocena kosztów eksploatacji sprzętu do brachyterapii, a co za tym idzie kosztów wykonywanych procedur.

Materiał i metody: Porównano budowę, rozkład promieniowania (funkcja radialna, anizotropowość), krok i sposób ruchuźródła oraz aktywną długość źródeł promieniowania izotopu Ir-192 firm Nucletron, Varian oraz BEBIG, a takżeprzedstawiono źródło Co-60 firmy BEBIG.

Wyniki: Aparaty wyposażone w źródła Ir-192 firm Nucletron oraz BEBIG mają podobną budowę fizyczną kapsułz izotopem promieniotwórczym, comawpływ na porównywalne rozkłady promieniowania. Aparat firmy Varian wyposażonyjest w dwa źródła promieniowania Ir-192, przez co aktywna długość wykorzystywana podczas napromieniania jest dłuższa,charakterystyka promieniowania ma wpływ na planowanie leczenia. Izotopy Ir-192 oraz Co-60 różnią się średnią energiąprodukowanych elektronów podczas rozpadu promieniotwórczego (EIr-192 = 380keV, ECo-60 = 1,25MeV) oraz czasempółrozpadu (T1/2 Ir-192 = 72,8 dnia, T1/2 Co-60 = 5,26 roku), co niesie za sobą różnice w radialnym rozkładziepromieniowania, jego zasięgiem oraz rozkładem promieniowania wokół kapsuły zawierającej izotop. Aparat firmy BEBIGwyposażony w izotop Co-60 charakteryzuje się innymi czasami napromieniania chorego (różnica 10–20%), częstościąwymiany źródła (raz na 5 lat vs raz na 3 miesiące) przy globalnie dużo niższych kosztach eksploatacji.

Wnioski: Przy wyposażaniu nowych zakładów brachyterapii powinno się brać pod uwagę ilość leczonych chorych,najczęstsze lokalizacje nowotworów, w których wykorzystana jest brachyterapia, oraz koszty eksploatacji aparatówbrachyterapii. Czynnikiem istotnym są także parametry źródeł przedstawione w pracy.

http://dx.doi.org/10.1016/j.onko.2013.09.103

[Nr 103] Badanie lekowrażliwości na nitrofurantoinę szczepów E. coli izolowanych z moczu od chorych leczonych wWielkopolskim Centrum Onkologii w latach 2002–2012

Zefiryn Cybulski, Alicja Grabiec, Zofia Talaga

Pracownia Mikrobiologii, Wielkopolskie Centrum Onkologii, Poznań

Adres email: zefiryn.cybulski@wco.pl

Cel: Celem pracy było: 1) prześledzenie lekooporności na nitrofurantoinę wyhodowanych z moczu pałeczek okrężnicy, 2)ustalenie, czy nitrofurantoina może być wykorzystywana do leczenia objawowego w pierwszym etapie zakażenia, zanim napodstawie wyników posiewu i antybiogramu wprowadzone będzie leczenie celowane.

Materiał i metody: Badania retrospektywne były prowadzone 1.01.2002–31.12.2012. Analizowano lekowrażliwośćpałeczek okrężnicy wyhodowanych z posiewów moczu z bakteriurią 1000 cfu/mL lub wyższą. Wykonywano badaniailościowe i jakościowe. Mocz posiewano na podłoża cps metodą ez kalibrowanych. Izolowane bakterie diagnozowano,stosując standardowe metody biochemiczne. Lekooporność 646 szczepów E. coli badano w systemie ATB Expression firmybioMerieux w latach 2002–2010 oraz Vitek 2, również firmy bioMerieux, w latach 2011–2012.

Zeszyty Naukowe WCO, Letters in Oncology Science 10S (2013) 1–7956