KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN...

23
KKTC YAKIN DOGU UNiVERSiTESi MUHENDiSLiK FAKUL TESi BiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE DANISMANI Doc;. Dr. TERiN ADALI Lefkosa, 2015

Transcript of KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN...

Page 1: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

KKTC

Y AKIN DOGU UNiVERSiTESi

MUHENDiSLiK F AKUL TESi

BiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU

OGRENCiNiN ADI SOY ADI

SERDAR TONBUL

20122578

BiTiRME PROJESi

iNCE TABAKA KROMATOGRAFi

PROJE DANISMANI

Doc;. Dr. TERiN ADALI

Lefkosa, 2015

Page 2: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

i>-REAs~r~ ~<v v,i. _,. (- ~--

...•. ~ rn YAKIN DOGU UNiVERSiTESi BiYOME~iKAL MUHENDiSLiGi bold,ln} 20~221t~~ ff umarali SERDAR TONBUL'un hazirladigi "INCE TABAKA KROMATO~FI'' adh · "I

~"HE~DiSLiK FAKULTESi'nde Lisans Tezi olarak kabu1 edilrnistir. ~::.C:,.l(O$A "'~

Do9.Dr.Terin ADALI

Uye

Melis OZDENEFE

Uye

Cemre OZGO<;MEN

Uye

Fatih Veysel NUR<;iN

1

Page 3: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

2

ETiK

Yakm Dogu Universitesi Muhendislik Fakilltesi, tez yazim kurallarma uygun olarak hazirladigmuz bu tez cahsmasinda;

• tez icindeki butun belge ve bilgileri akademik kurallar cervesinde elde ettigimizi, • gorsel, isitsel ve yazih turn bilgi ve sonuclan bilimsel ahlak kurallarma uygun olarak

sundugumu, • kullamlan verilerde herhangi bir yanhs olmamasi icin ozen gosterdigimizi, • ve bu tezin herhangi bir bolumunu bu universite veya baska bir universitede baska bir

tez cahsmasi olarak sunmadrgmu

beyan ederim.

Page 4: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

TE~EKKUR SAYFASI

Bitirme projemde katkdarmdan,yard1mlarmdan ve bilgilendirmelerinden dolayi Saym Doc.Dr.Terin Adah'ya tesekkilr ederim ...

3

Page 5: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

i<;iNDEKiLER

KABUL VE ONAY SAYFASI .i

ETiK .ii

TESEKKUR .iii

i<::iNDEKiLER iv

TABLO LiSTESi v

RESiM LiSTESi vi

BOLUM 1:GiRi~

1.1. Kromatografi Nedir 5

1.1.1.Kromatografi mekanizmalan 6

1.1.2.Adsorbsiyon kromatografisi 6

1.1.3.Dagihm ( partisyon) kromatografisi 7

l .1.4Kromatografinin simflandmlmasi 7

1.1.4.1. Duzlemsel Kromatografi 8

1.1.4.2.Kagit Kromatografisi 8

1.1.4.3. Kol on Kromatografisi 8

1.1.4.4. Gaz Kromatografisi 9

1.1.4.5. Yuksek Basinch S1v1 Kromatografisi 10

1.1.4.6. Ince Tabaka Kromatografi 11

1.2. Ince Tabaka Kromatografi 11

1.2.1. Kullamm Alanlan 12

1.2.2. Ince tab aka kromatografinin avantaj lan 13

1.2.3. iTK deney sonucunun goruntulenme teknikleri 13

1.3 Proje Amaci. 13

1.4. Deneyde Kullamlacak Malzemeler. 13

4

Page 6: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

1. 5. Dene yin Y apihsi ·: 14

1.6 Resimler. .

1.6.1. Resim 1 Kromatogram 6

1.6.2.Resim 2 Kromatografi Tipleri 8

1.6.3.Resim 3 Ince Tabaka Kromatografi 11

1.6.4.Resim 4 Cam Solusyon Siseleri 16

1.6.5.Resim 5 Deney Ttlpleri 17

1.6.6.0mekleme Yapilacak Cam Plaka 18

1.6.7.Resim 7 Plaka Tank1 19

1.6.8.Resim 8 Ornekleri Eklemek Icin Enjektor. 20

1.6.9.Resim 9 Cozucu Solusyon Hazirlamak i9in Cam Tank 21

1.7. Kaynaklar 22

Page 7: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

KROMATOGRAFiNEDiR?

Kromatografi, bir kansimda bulunan maddelerin, biri sabit digeri hareketli faz olmak ilzere birbirleriyle kansmayan iki fazh bir sistemde aynlmasi ve saflastmlmasi yontemidir.

ilk kez Rus botanikci Mikhail Tsvett (1903) tarafmdan gelistirilen bir yontemdir. Tsvett bu yonterni bitki pigmentlerinin renkli bilesenlerini ayrrmakta kullamlmistir. Kullandigi kolonda renkli bantlar olustugundan, bu ayirma yontemine kromatografi admi vermistir

Diger ayirma yontemlerinin tam yeterli olamadigi durumlarda, tercihen kullamlan bilr ayirma yontemidir. Ozellikle fiziksel ve kimyasal nitelikleri cok benzeyen maddelerin ayrrlma islemlerfnde, kromatografi yonteminin kullammi ile basanli sonuclar elde edilmektedir.

Kromatografi tekniginde yararlamlan temel prensip, bir kansimdaki cesitli maddelerin hareketli bir faz yardmu ile sabit bir faz uzerinden gecirilmeleri ve bu gecis sirasinda farkh hrzlarla hareket edebilmeleridir.

Sabit faz: Bu faz daima bir "kati" veya bir "kati destek uzerine emdirilmis bir srvi tabakasmdan" olusur.

Hareketli faz: Bu faz daima bir "srvi'' veya "gazdan" olusur.

Sabit faz, hareketli faz ve karisunmda yer alan maddeler arasmdaki etkilesimin tiirii: Kromatografide "yilzey tutunmas1 veya adsorpsiyon" ile ''s:ozilnilrlilk" olgulan temel etkile§im tilrlerini olustururlar. Sayet basit faz bir "kati" ise, kansimdaki maddelerle sabit faz arasmda "yilzey tutunmasi (adsorpsiyon)" etkilesimi gerceklesir.

Hareketli fazm icerisinde yer alan bilesenler, -sabit faza ait dolgu maddesiyle etkilesmeleri sebebiyle, bir miktar tutulurlar. Bu tutulma, ornekteki farkh bilesenler icin farkh miktarlarda olur. Boylece bilesenler sabit fazm sonlanna dogru, farkli hizlarda ilerledikleri icin, birbirinden aynlnus durumda sabit fazi farkh zamanlarda terk ederler. Bu sekilde sabit fazdan cikan bilesenlerin derisimleri uygun bir bicimde olcultlr ve zamana veya hareketli fazm kullamlan hacmine karsi "kromatogram" denilen grafikler elde edilir

5

Page 8: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

Resim 1 : Kromatogram

KROMATOGRAFi MEKANiZMALARI

ADSORBSiYON KROMATOGRAFiSi

Kati veya srvi molekullerin , sivi veya gaz molekilllerini cekim kuvvetleri yarduruyla yuzeyde tutmasma adsorbsiyon denir. Burada sozu edilen adsorbsiyon fiziksel adsorbsiyondur. Zayif van der waals ,elektro statik cekimler ve dipol -dipol etkilesimleri ne dayamr ,tersinirdir.

Adsorbsiyon kromatografisinde aymm, kansirru olusturan farkh bilesiklerin sabit faz yuzeyinde degisik derecede adsorbe olmalan ilkesine dayamr. Sabit faz kati, hareketli faz srvi veya gazdir .. Sabit faz olarak alumina (Ah03), silikajel (Si02), talk ve bunun gibi gozenekli maddeler, hareketli faz olarak alkol, aseton,kloroform gibi butun organik cozuculer kullamlabilir. Sabit ve hareketli fazm secimi .aymmi yapilacak bilesiklerin polaritesine kimyasal ozelliklerine bagh olarak yapihr.Genelde polar maddeler icin polar cozuculer apolar maddeler icin apolar cozuculer kullamhr,

Cesitli maddelerin adsorblayici veya sabit faz uzerinde adsorblanma dereceleri farkli oldugundan .farkli yerlerde toplamrlar. En fazla adsorblanan maddelcrin suruklenmesi ve hareketleri daha zayif daha yavas, tersine az adsorblananlarm hareketleri ve suruklenmeleri hizh olur.

6

Page 9: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

DAGIL~M (PARTiSYON) KROMATOGRAFiSi

LIBRARY

Dagihm, bir kansimdaki maddelerin birden fazla cozucu icerisindeki cozunurlukleri oranmda dagilmasrdir. Bu, cozucunun ve maddenin ozclliklerine bagh bir fonksiyondur.

Bu kromatografide aymm cozunurluk esasma gore kansimm sabit ve hareketli faz arasmdaki dagihmma dayamr. Bu yontemde, sabit srvi faz, yuksek yuzey alanh gozenekli bir kati destek maddesine emdirilmistir. Hareketli faz ise srvi veya gazdir. Ayinrm gerceklestirilecek bilesikler hareketli ve sabit faz sivilannda farkli cozunurler. Cozunurluk farkmdan dolayi bilesikler sistemi once veya sonra terkederler. <;ozilntirltigti sabit fazda olan bilesikler sistemde daha uzun sure tutuldugu icin sistemi daha gee terk ederler.

• Kromatografi 'nin Srmflandmlmasi

Q Aynlma Mekanizmalanna Gore

• Uygulama Bicimine Gore

• Faz Tiplerine Gore

• Ayrilma Mekanizmalarma Gore

• Adsorpsiyon kromatografisi

• Partisyon kromatografisi

• Iyon degistirme kromatografisi

• Jel filtrasyon (Molekuler eleme) kromatografisi

• Iyon cifti kromatografisi

• Afinite kromatografisi

• Uygulama Bicimine Gore

• Duzlemsel kromatografi

• Kagit kromatografisi

• Ince tabaka kromatografisi (TLC)

Kolon kromatografisi

• Gaz kromatografisi (GC)

• Yuksek basmch srvi kromatografisi (HPLC)

7

Page 10: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

• Faz Tiplerine Gore

• - S1v1 kromatografisi

• S1v1-Kat1 kromatografisi

• S1v1-S1v1 kromatografisi

• - Gaz kromatografisi

• Gaz-Kati kromatografisi

• Gaz-S1v1 kromatografisi

Resim 2 : Kromatografi tipleri

UYGULAMA Bi<;iMLERiNE GORE KROMATOGRAFiK YONTEMLER

DUZLEMSEL KROMATOGRAFi

Duz bir yuzey halinde durgun fazm kullamldigi ve hareketli fazm bu yuzeyde yer cekimi veya kapiler etkisiyle hareket ettigi kromatografik metotlan anlatan bir terimdir.

8

Page 11: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

KAGIT KROMATOGRAFiSi

Uygulamasi en basit ve en 90k kullamlan yontemlerden biri olan kagit kromatografisi genellikle suzgec kagrtlan kullamlarak yapihr .. Burada etkin mekanizma dagilmadir, Ctmku dagilma kromatografisindeki sabit fazm yerini burada ozel olarak yapilrms olan bir suzgec kagidi almaktadir. Suzgec kagidi suyu 90k kolay ve kuvvetle adsorbladigindan yapilannda dogal olarak bir miktar su icerir ve sabit sivi faz rolunu oynar. Kagida uygulanan maddeler kansimmm birbirlerinden aynlmalan, kagrt uzerinde hareket eden cozucuyle kagidm icerdigi su arasmdaki dagilma farkma baghdir.Analizi yapilacak madde cozelti halinde olmah ve katilar uygun bir cozucude cozunmelidir. Cozeltiler belli bir konsantrasyonda olmahdir, en az %1 'lik cozelti kullamlmahdir,

KOLON KROMATOGRAFiSi

Kolon kromatografisi ilk uygulanan kromatografik yontemdir ve kromatografinin baslangicidir.Bu kromatografide sabit faz olarak silikajel(Si02) seluloz, aluminyum oksit(Al203), zeolit ,kalsiyumkarbonat v.b.gibi aktif yuzeyli maddeler, hareketli faz olarak da organik cozuculer kullamhr. Bu yontemde aynrm yapilacak kansim uygun bir cozucude cozulerek bir kolon icine doldurulmus kati sabit fazdan gecirilir. Kolonda bilesenler sabit faz tarafmdan adsorblamrlar .Sonra aynlacak kansimm 9ozilldilgil cozucu yada farkh polaritedeki cozuct; veya cozucu kansimlan kolondan gecirilerek bilesenler kolonun altmdan ayn ayn ahmr. Cozucusu buharlastinlarak saf madde elde edilir.

GAZ KROMATOGRAFiSi

Gaz kromatografisi, diger kromatografiler gibi bir kansimda bulunan maddeleri ayirmaya yarar. Diger kromatografilere gore avantaji sonuclann cabuk elde edilmesi ve ucuz olmasidir. Gaz kromatografisi ikiye aynhr.

Gaz-KatI Kromatografisi:

Bu kromatografide de iki faz vardir. Sabit faz olarak yancapi kucuk uzun bir kolon icine yerlestirilmis genis yuzeyli dolgu maddeleri(adsorban, silikajel, alumina vb.), hareketli faz olarak da dolgu maddelerinin arasmdan kolayhkla gecebilen gaz kullamhr. Genellikle tasiyici gaz olarak azot veya helyum gazlan kullamhr.

Gaz-S1v1 Kromatografisi:

Burada sabit faz, gaz -kati Kromatografisindeki genis yuzeyli dolgu maddelerine emdirilmis bir sivnyuksek mol kutleli polimerler) ve hareketli faz gazdir.

Gaz kromatografi aleti oldukca basittir. Sistem belli bash 5 kisimdan olusur.

9

Page 12: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

Aymmi istenen kansim, bir enjektor yardurnyla enjeksiyon kismma enjekte edilir. Enjektor bolumu isitilrms durumdadir, kansim hemen buharlasir ve buhar halinde inert tasiyici gaz ile birlikte kolona girer. Kolenda her bilesik kaynama noktasma, molekul buyuklugune ve kolondaki sabit faz ile etkilesimine bagh olarak kolonda farkh hizlarda goc ederek devamli tasmirlar ve boylece birbirlerinden aynlarak farkli zamanlarda kolondan cikarlar, Kolondan cikan herbir bilesen dedektore girer, dedektorde bilesenlerin miktan ile orantih olarak belirlenir ve kaydedicide grafik olarak cizilir. Her bilesik ahkonma zamam ile belirlenir. Ahkonma zamam bir bilesigin enjekte edilmesinden dedektorden cikisma kadar gecen suredir. Bu sure her bilesik icin farkhdir.

YUKSEK PERFORMANSLI SIVI KROMATOGRAFiSi

Kisaca HPLC (High Performance Liquid chromatography) olarak isimlendirilir.Eski kromatografi turlerinin iyilestirilmis ve hizlandmlrms seklidir.Burada da kolon bir aletin icine yerlestirilmistir.lsleyis olarak gaz-sivi kromatografisine benzer,yalmz burada hareketli faz s1v1d1r.HPLC cihazmda farkh kolonlar kullamlarak dort farkh mekanizma uygulanabilir.

Bunlar:

1-Adsorbsiyon Kromatografisi

2-Dagilma Kromatografisi

3-iyon Degistirme Kromatografisi ,

4-Jel Gecirgenlik Kromatografisi

Iyon Degistirme Kromatografisi:Bu yontemde sabit faz anyon ve katyon degisimi yapabilecek gruplar iceren recineler ,hareketli faz ise tamponlanrms srvilardir.Ornegin; yapismdaki Na+ iyonundan dolayi dogal bir recine olan zeolit (Na2AL2Si4012) katyon degistirmede kullamhr,

Jel Gecirgenlikunolektiler eleme) Kromatografisi: Bu yontern dogal ve yapay polimer kansimlanm ayirmada kullamhr. Buyontemde sabit faz gozenekli bir recinedir. Recineler buyuk molekul agirhkli polimer maddelerdir. Gozeneklere girip cikan k-U9-Uk molekuller kolonu daha gee terk eder, gozeneklere girmeyen buyuk molekuller kolonu once terk ederek aynhrlar, Burada ayirma molekul buyuklugune goredir.

10

Page 13: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

iNCE TABAKA KROMATOGRAFiSi

Ince tabaka kromatografisi, yapihs teknigine gore kagit kromatografisine benzer. Bu kromatografi turunde sabit faz olarak silikajel(Si02), alilminyumoksit(Al203) ,toz seluloz gibi maddeler kullamhr. Burada etkin mekanizma adsorbsiyondur.

iTK' de ozel olarak hazirlanmis cam, alurninyum veya plastik levhalar kullanihr. Bu levhalann ilzeri silikajel, alumina gibi bir adsorbanla kaplanrmstir. Bu plakalar hazir olarak satilabildigi gibi laboratuvarda da hazirlanabilir. Cam levhalann boyutlan 5xl 0cm ile 20x20cm arasmda degisir. Adsorblayici tabakamn kalmhgi yapilacak analizin cinsine gore degisir, bu kalmhk 0.25-2mm arasmdadir. Plakalar kullamlmadan once 110°C deki etilvde 2 saat kurutularak aktiflestirilir ve hemen kullanihr.

Bu islem sirasinda, plakanm alt kesimlerine bir damlahkla onceden damlatilmis olan kansimi da farkh hizlarla yukanya surukler. Ayinm bu sekilde saglanrms olur. Yurume hizi maddenin, kati fazm ve cozucunun polaritesine baglidir.

Omeklerin plakalara uygulanmasi ve gelistirme kagrt kromatografisinde oldugu gibidir. Ince tabaka kromatografisinde gelistirme asagidan yukanya dogru yapilir. Plakanm tanka yerlestirilmesinden once tank atmosferinin cozucu buhanyla doymus olmasma dikkat edilir. Aynlan maddelerin lekelerinin belirlenmesi ve kullamlan reaktifler kagrt kromatografisinde oldugu gibidir .

~~.·@ .. , .. v '/.'I' '''"°* ma,

11

Page 14: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

Ince tabaka kromatografisi kan ve srvi fazdan olusan bir kromatografik metotdur.

Kati Faz

Silika (Si02)

Alumina (Ah03)

S1v1 Faz

Kimyasal Cozuculer

Hekzan

Toluen

Etil Asetat

oroform

Aseton

Metanol

Asetik Asit

Su

(En D-U~-Uk polar)

(En Yuksek Polar)

Ince tabaka kromatografisi genellikle kullamldrgi yerler;

Gidalardaki insektisit/pestisit varhgmi belirlemek icin

Bitkilerdeki pigment maddelerinin belirlenmesi

Bir maddenin saf olup olmadigimn belirlemnesi

Saflastirma calismalanmn sonucunun analizinde

Organik maddelerin birbirinden aynsnrmak icin

12

Page 15: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

Ince tabaka kromatografisinin avantajlarr;

• Hizh

• Hassas

• Basit

• Ucuz

ince tabaka kromografisi sonucunun gdrunttllenmesi ;

• Ultraviyole 1~1k altmda goruntulerne " Iyodin buhanyla ozgun olmayan bir boyama ile kahverengimsi renk olusturarak • Ninhidrin Metodu (Aminoasitleri pembe renkte gorunur hale getirir)

PROJEAMACI

Ince tabaka kromatografi ile bir amino asitten baska bir molekulun bir amino grubu transferi.

Kullamlacak malzemeler :

• 1 Ox20 cam plaka ( 2 adet)

• Deney tupleri

• Mikro pipetler

• Cam tank

• lslem yapilacak ornekler

• Cozucu kimyasallar

• Sabit faz Hareketli faz kimyasallar

• Kalem

• Cetvel

• Uv 1~m tabancasi

13

Page 16: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

DENEY Y APILU;,I

<;oziicii 1.Tiip 2.Tiip 3.Tiip 4.Tiip 0.2 ml - 0.1 - 0.1 disodium ketoglutarete 0.2 ml Alanine - - 0.1 0.1 0.2 ml Sodium 0.1 0.1 - - pyruvate 0.2 ml sodium 0.1 - 0.1 - L-glutamate 0.4 ml sodium 0.1 0.1 0.1 0.1 arsenate Liver extract 0.3 0.3 0.3 0.3

• Tabloda gosterildigi gibi kimyasallardan solusyon hazirlamr.

• 45 dakika boyunca 37 C derecede inkube edilir.

• Inkubasyon suresi sonunda her bir tupe 1 ml %70 ethanol eklenir ve calkalamr.

• Santrifuje koyulan tupler 3 dakika oyunca 1400 rpm hiz ile cevrilir.

• 2 adet ince tabaka kromatografi plakasi elimizde olacaktir.

• Bunlardan birisi amino asit digeri ise keto asit kromatografi plakasidir.

• Plakalar kirlenmeyecek sekilde tutulup alt kisimdan 2 cm yukarda olmak kaydi ile isaretleme yapihr,

• Isaretlenen bu noktaya 2 ser cm arahklarla orneklerin eklenecegi noktalar belirlenir ve bu noktalara omekler eklenir.Bu omeklerin miktan 1 ul yeterli olacaktir.

• Amino asitlerin yuklu oldugu plakaya 1 kez omekleme yapmak yeterli olacaktir.

• 1,2,3,4 numarah tuplerden ornekler ahmp plaka uzerindeki yerlerine uygulamr.

0 Amino asit plakasi uzerinde 5 ve 6 noktalanna bir damla glutamik asit ve alanin uygulamp kurutulur.

• Keto asit plakasmda bir noktaya ornek uygulama 5 kez tekrarlanmahdir ( bunun sebebi plaka uzerinde renklenme olusmasi icindir.)

14

Page 17: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

• Her uygulamadan sonra uygulanan omekler kurutulur.

• Keto asit icin olan plakada 2 ve 4 noktalarma bir damla dinitrofenil hidrazim uygulamp plaka tekrar kurutulur bu islem 5 kez tekrarlamr.

• Keto asit plakasmda 5 ve 6 noktalanna sirasi ile bir damla a-ketoglutarete ve bir damla Sodium pyruvate eklenir.

• Daha sonra her noktaya DNPH uygulamp kurutulur. Diger islemler gibi 5 kez tekrarlamr.

• Her uygulama icin temiz pipet kullamhr.

• Amino asit plakasi icin hazir olan tank icinde 3: 1 oramnda H20 kansrm propildir.

• Hareketli faz olarak %3 amonyak ile doymus n-butanol iceren tank icerisine keto asit plakasi yerlestirilir,

• Plakalar tank kenanna temas etmemelidir.

• Tank icerisine 4 ml cozucu eklenir.

• Plakalar tank icerisinde 1 saat inkube edilir.

• Cozucu plakalarm yuzeyinde ilerlemeye baslar.

• Bu sure sonunda plakalar disan amlip cozuctmun geldigi nokta isaretlenir ve plakalar kurumaya birakihr.

• Uv 1~m altmda orneklerin ve cozucuntm kat ettigi mesafe isaretlenir.

• Her noktada kat edilen mesafe icin Rf degerleri hesaplandiktan sonra standart Rf degerleri ile karsilastinlip aynsma hizi elde edilir.

• Rf : Cozucunun ytlrtldtigu uzakhk I maddenin yurdugu uzaklik

• Dagihm katsayisi : Sabit fazdaki madde konsantrasyonu I hareketli fazdaki madde konsantrasyonu formulleri kullamhr.

15

Page 18: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

Resim 4 : Cam Kimyasal Soliisyon Siseleri

16

Page 19: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

Resim 5 : Deney Tiipleri

17

Page 20: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

Resim 6 : Ornekleme yapilacak Cam plaka

18

Page 21: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

Resim 7 : Plaka tank!

19

Page 22: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

Resim 8 : Ornekleri Eklemek i~in Enjektor

20

Page 23: KKTC - Universitydocs.neu.edu.tr/library/6345861426.pdfBiYOMEDiKAL MUHENDiSLiGi BOLUMU OGRENCiNiN ADI SOY ADI SERDAR TONBUL 20122578 BiTiRME PROJESi iNCE TABAKA KROMATOGRAFi PROJE

Resim 9 : <;oziicii Soliisyon Hazrrlamak Icin Kullamlacak Cam Tanklar

& -~,

21