EXPANZE ANALYZÁTORŮ IMUNOCHEMICKÉ DIABETES, METLA … 2007-07.pdf · 2014. 7. 24. ·...

E X P A N Z E A N A L Y Z Á T O R Ů I M U N O C H E M I C K É

Ř A D Y U N I C E L - U N I C E L ® D X I 6 0 0

D I A B E T E S , M E T L A T Ř E T Í H O T I S Í C I L E T Í

I N D I K Á T O R O V É P R O T E I N Y V M O Č I ( 2 )

- V Y Š E T Ř O V Á N Í P R O T E I N U R I E

informační magazín číslo 7 - 2007

i n f o r m a č n í m a g a z í n č í s l o 7 - 2 0 0 72

Predstavujeme Vám moderné onkologické

pracovisko

nkologický ústav sv. Alžbety (OÚSA) je špecializovaným zdra-

votníckym zariadením, ktoré je zamerané na prevenciu, dia-

gnostiku a liečbu nádorových ochorení. Dejiny OÚSA súvisia

s príchodom sestier Rehole sv. Alžbety do Bratislavy, ktoré

v roku 1743 vybudovaly svoju nemocnicu. Táto bola od prvej

polovice 20.storočia profilovaná ako onkologické zariadenie. Po

zoštátnení v roku 1950 sa nemocnica stala centrálnym Onkologickým

ústavom pre Slovensko. Od roku 1996 je Onkologický ústav sv. Alžbety

neštátnym zdravotníckym zariadením poskytujúcim zdravotnícke služby

pre pacientov z celého územia Slovenska.

V súčasnosti v OÚSA funguje 7 lôžkových oddelení s 203 posteľami. Kli-

nika onkologickej chirurgie je centrom pre chirurgickú liečbu karcinómov

pečene a žlčových ciest, pankreasu, štítnej žľazy, prsníka a čreva. Klinika

gynekologickej onkológie je centrom chirurgickej liečby nádorov materni-

ce a ovárií. Oddelenie maxilofaciálnej chirurgie je centrom chirurgickej

liečby nádorových ochorení v oblasti hlavy a krku. Na Klinike internej

onkológie sa hospitalizovanou, ako aj ambulantnou formou vykonáva

chemoterapia vo všetkých nádorových lokalizáciách. Klinika rádioterapie

je najväčším centrom externej rádioterapie, brachyterapie v SR, zároveň je

jediným pracoviskom, kde sa vykonáva stereotaktická rádiochirurgia moz-

gových nádorov. Súčasťou Kliniky nukleárnej medicíny je najväčšie lôžko-

vé oddelenie pre liečbu karcinómov štítnej žľazy rádiojódom. Okrem toho

na Klinike nukleárnej medicíny funguje diagnostické oddelenie, ktoré má

najbohatšie skúsenosti so SPECT a PET vyšetreniami v SR. Súčasťou OÚSA

je aj plne digitalizovaná Rádiologická klinika s modernými CT a MR zaria-

deniami. Veľa pozornosti sa v OÚSA venuje in vitro diagnostike. Na Ústave

laboratórnej medicíny pôsobia oddelenia biochémie, hematológie, imuno-

diagnostiky, klinickej imunológie, farmakológie, genetiky, patológie

a cytológie, akreditované na ISO 27025. Oddelenia sú vysoko automatizo-

vané, pričom v súčasnosti sa spúšťa do prevádzky systém preanalytickej

Jedným z najmodernejších onkologických pracovísk na Slovensku je Onkologický ústav svätej Alžbety

v Bratislave. Jeho riaditeľa Doc. MUDr. Juraja Kaušitza, CSc. sme sa opýtali na históriu, súčasný

stav, ako aj budúce plány tohto zariadenia.

prípravy vzoriek od firmy Beckman Coulter.

Súčasťou OÚSA je od roku 2004 aj Stomatolo-

gická klinika s vyše 40-timi ambulanciami,

poskytujúca kompletné stomatologické služby.

V OÚSA funguje aj Preventívne centrum vyko-

návajúce komplexné preventívne vyšetrenia

zamerané na odhaľovanie včasných prejavov

onkologických, ako aj kardiovaskulárnych ocho-

rení.

OÚSA je aj pedagogickým centrom. Na 12-tich

klinikách prebieha pregraduálna a postgraduálna

výchova predovšetkým pre potreby Lekárskej

fakulty UK a Slovenskej zdravotníckej univerzity.

V OÚSA sa veľa pozornosti venuje nielen roz-

voju odbornej úrovne, ale aj pozitívnemu prístu-

pu personálu ku neraz ťažko chorým pacientom,

pretože cieľom pôsobenia OÚSA je byť v zhode

s ideálmi služby bližnému, pre ktoré bola Nemoc-

nica sv. Alžbety v roku 1743 zriadená.

JOZEF SMOLKA

E-MAIL: [email protected]

Klinika rádioterapie je najväčším centrom externej rádioterapie, bra-chyterapie v SR, zároveň je jediným pracoviskom, kde sa vykonáva ste-reotaktická rádiochirurgia mozgo-vých nádorov.

i n f o r m a č n í m a g a z í n č í s l o 7 - 2 0 0 7 3

ObsahExpanze analyzátorů imunochemické řady UniCel – UniCel® DxI 600 4

Nový kit pro stanovení HBsAg na analyzátorech Beckman Coulter 6Infekce virem hepatitis B (HBV) je celosvětovým problémem.

První automatizované stanovení Inhibinu A - expanze reprodukčního panelu 7

Analyzátor UniCel DxI 800 v imunoanalytické laboratoři 8Nový analyzátor v laboratoři vždy generuje proces změny.

Konverze promývacího roztoku: WB - WB II 12

Diabetes, metla třetího tisíciletí 12

Nové reagencie pro průtokovou cytometrii 15

Co je nového v ultracentrifugaci? 16Nová stolní ultracentrifuga. Nový rotor – 150 000 RPM. Nový adapter

pro mikrozkumavky 1.5 ml.

Nejistoty imunochemických stanovení 17Kvalita diagnostických zdravotnických prostředků in vitro (IVD MD) je spolu s cenou

jedním z rozhodujících faktorů při výběru poskytovatele zdravotní péče, rozhoduje-

li se mezi několika dodavateli.

Indikátorové proteiny v moči (2)- vyšetřování proteinurie 19Proteinurie a hematurie jsou jedny z nejčastějších patologických nálezů u onemoc-

nění ledvin a močových cest.

Masarykova městská nemocnice v Jilemnici má novou laboratoř 26Ofi ciální slavnostní otevření laboratoře uspořádalo vedení nemocnice

31.5.2007 za účasti starosty města a regionálního tisku.

Euromedlab 2007 2717. Evropský kongres klinické biochemie a laboratorní medicíny, známý

pod názvem Euromedlab, se letos konal od 3.6. do 7.6. v Amsterdamu.

Víkend plný zábavy a her 28

Pozvánka na akci 29Ve dnech 23. - 25.9. 2007 se uskuteční VIII. Celostátní sjezd

České společnosti klinické biochemie.

Zamyšlení 30

Kde se můžeme setkat (září – prosinec 2007) 32

Konference/seminář s účastí společnosti Immunotech, a.s. formou stánku

Časopis vydává a distribuujeIMMUNOTECH a.s., Radiová 1, 102 27 Praha 10

Časopis připravujíMgr. Jiří Moos, CSc.Mgr. Pavel KružíkMgr. Patrik ŠafRNDr. Helena KurzweilováRNDr. Běla Říčařová, CSc.Ing. Petr SuchanMgr. Markéta KrupařováIng. Roman Šandrik, PhD.Ing. Kateřina ŤukováIng. Lukáš Palivec, PhD.

Do časopisu přispěliRNDr. Jozef SmolkaIng. Mgr. Tereza TietzeIng. Kateřina LapišováIng. Petr Matějka, RNDr. Zdeněk Čecháček s.r.o. - IAL a MSLRNDr. Helena Kurzweilová, CSc.Mgr. Pavel KružíkMgr. Jiří Moos, CSc.Ing. Petr Šmídl, CSc.MUDr. Jana Granátová, Fakultní Thomayerova nemocnice RNDr. Bohuška Černá, Masarykova městská nemocnice JilemniceMonika Boušková, Oblastní nemocnice PříbramIng. Lukáš Palivec, PhD.Mgr. Markéta Krupařová

Grafi cká podobaNina Nováková

TiskárnaREPRO servis s. r. o.Starochuchelská 15/195, 159 00 Praha 5

Náklad čísla1400 výtisků


� efektivní nakládání se vzorky

� jednoduchá obsluha

� doplňování reagencií a spotřebního materiálu za chodu

� chlazený systém reagencií

� minimální údržba

� možnost automatizace

� široké spektrum testů

V letošním roce uvede fi rma Beckman Coulter na trh nového člena rodiny

analyzátorů UniCel koncept, dlouho očekávaný imunochemický analyzátor

UniCel® DxI 600. Tento analyzátor je svou průchodností 200 testů za hodinu

vhodný pro střední laboratoře, případně jako záložní nebo statimový analyzá-

tor pro laboratoře velké, a doplní tak řadu imunochemických analyzátorů fi rmy

Beckman Coulter (Access®, Access® 2, UniCel® DxI 800). Systém je založen na

stejné (ověřené) technologii a pracuje se stejnými reagenciemi jako ostatní

imunochemické analyzátory Beckman Coulter. Svými technickými a provozní-

mi parametry poskytuje laboratoři vysoký komfort jednoduché obsluhy, fl exi-

bilního výkonu a rychlého uvolnění primární zkumavky ze systému.

Expanze analyzátorů imunochemické řady

UniCel – UniCel® DxI 600Jako jediný ze současných analyzátorů na trhu

vytváří v prvním kroku analýzy vzorku (primární

zkumavky) vnitřní alikvot a primární zkumavku

neprodleně uvolňuje ze systému k dalšímu zpra-

cování v laboratoři. Alikvot je skladován v chlaze-

ném zásobníku po dobu potřebnou k provedení

všech požadovaných testů, případně i refl exních

testů, či pro opakování měření.

Přístroj UniCel® DxI 600 je koncipován

tak, aby základní rutinní úko-

ny, tj. doplňování


Pro malé až středně velké labora-toře je ideální spojení analyzátoru UniCel® DxI 600 s biochemickým analyzátorem UniCel® DxC 600.

reagencií, spotřebních materiálů i vkládání sto-

jánků se vzorky, probíhalo bez nutnosti vstupu do

ovládacího softwaru. Stavové kontrolky systému

a informační panel přímo na přístroji informují

obsluhu o stavu systému a potřebě nevyhnutel-

ných zásahů pro plynulou činnost přístroje.

Komunikace prostřednictvím softwaru na řídící

konzoli je potřebná pouze při programování kali-

brací, kontrol kvality nebo jejich vyhodnocení,

případně na základě výzvy systému (oznámení

o chybách).

Veškeré spotřební materiály, ale i reagencie, vzor-

ky a statimové vzorky lze vkládat do přístroje kdy-

koliv, i za plného provozu, a to bez přerušení nebo

pozastavení činnosti přístroje. Systém disponuje

zásobníkem na 50 chlazených reagenčních packů

po 50 testech, což výrazným způsobem zvyšuje

„walk - away“ kapacitu přístroje. Reagencie obsa-

hují čárový kód, jsou kapalné a nevyžadují žádnou

předúpravu. Rovněž velkoobjemové zdvojené

zásobníky na promývací pufr, kapalný a pevný

odpad, a zdvojené zásoby substrátu redukují počet

nutných doplňování zásob. Díky tomu je celková

„walk - away“ kapacita přístroje až 5 hodin.

Údržba systému je minimální. Díky množství senzorů, které neustále kont-

rolují stav systému, přístroj nevyžaduje žádnou týdenní údržbu. Denní údržba

je kratší než 10 minut. Rychlost systému je zajištěna dvěma nezávislými pipe-

tory reagencí, které zajišťují, že přístroj lze použít i v případě poruchy jedno-

ho z nich.

Pro velké laboratoře nabízíme možnost zabudovat analyzátor do automa-

tické linky, kde ideálně splní funkci záložního analyzátoru pro analyzátor

UniCel® DxI 800.

Pro malé až středně velké laboratoře je ideální spojení analyzátoru Uni-

Cel® DxI 600 s biochemickým analyzátorem UniCel® DxC 600, případně

UniCel® DxC 800, pomocí modulu CTA. Modul CTA propichuje primární

zkumavku, vytváří alikvot pro imunochemický analyzátor a předává pri-

mární zkumavku biochemickému analyzátoru. Vznikne tím unikátní kombi-

novaný systém UniCel® DxC 660i (případně UniCel® DxC 860i). Obě části

kombinovaného systému pracují zcela nezávisle a lze je použít i samostat-

ně, například pro statimová vyšetření. V případě poruchy biochemické čás-

ti je imunochemická část plně funkční a naopak. Systémy UniCel používají

jednotné stojánky, které mohou být přímo vkládány do jednotlivých systé-

mů bez nutnosti třídění vzorků a zrychlují a zefektivňují preanalytickou

část. Stojánky jsou centrifugovatelné, což spolu s možností propichování

víček minimalizuje kontakt obsluhy s biologickým materiálem a snižuje

riziko potenciální infekce.

TEREZA TIETZE


KATEŘINA LAPIŠOVÁ



Graf 3: Distribuce výsledků

Nový kit pro stanovení HBsAg na analyzátorech Beckman Coulter

Infekce virem hepatitis B (HBV) je celosvěto-vým problémem. Na světě je infi kováno kolem

2 miliard lidí, z nichž přibližně jeden milion ročně zemře a u 400 miliónů pacientů nemoc

přejde do chronického stádia.

V České republice začíná být poměrně velkým problémem rozšíření

infekce mezi injekčními uživateli drog. Nezanedbatelná je i možnost

vertikálního přenosu z matky na dítě, kdy v naprosté většině případů

dochází k chronické infekci dítěte (viz. graf 1 a 2).

Laboratoře testující krevní vzorky požadují rozlišení různých genoty-

pů a subtypů a detekci velmi malého množství povrchového antige-

nu hepatitidy B (HBsAg, tzv. australský antigen).

Základní doporučení pro testování HBV:1. Plně automatizovaný „random access“ analyzátor se střední až vyšší průchodností

2. Vysoká senzitivita testu pro časné rozpoznání HBsAg na konci inkubačního období

a k identifi kaci chronické infekce

3. Vysoká citlivost pro všechny genotypy

4. Schopnost detekovat mutanty

5. Specifi cita minimálně 99,8 %

V roce 2007 uvádí fi rma Beckman Coulter na trh nový kit na stanovení HBsAg.

Principem je imunoanalýza na paramagnetických částicích s chemiluminiscenční

detekcí. Souprava je použitelná pro analyzátory Access, Access 2, UniCel DxI 600

a Unicel DxI 800 fi rmy Beckman Coulter

Při klinické validaci kitu bylo použito následujících postupů:

1. Pro ověření detekce subtypů – „SFTS 2004 Subtype panel“ obsahující 8 různých

HBsAg subtypů (adw2, adw4, adr, ayw1, ayw2, ayw3, ayw4, ayr).

2. Pro ověření rozpoznání různých genotypů bylo použito 7 genotypů A-G

z panelu „Teragenix HBV Genotype panel (HBVGTP-002).

Všech 8 subtypů v rozmezí koncentrací 0,5-1,0 ng/mL bylo soupravou Access HBs-

Ag detekováno a potvrzeno soupravou Access HBsAg Confi rmatory. Rovněž všech 7

genotypů bylo detekováno jako reaktivní.

Souprava byla rovněž testována na panelu 15 rekombinantních mutantních protei-

nů jednobodovými nebo vícebodovými mutacemi na 22 různých aminokyselinách:

Část molekuly Mutace

HBs 1 Z100S, L109P, S113T, T114S, T118A / T118V

HBs 2 P120S, P120T, T123N

HBs 3 C124R, T125M, T126S, P127T / P127A, Q129R,

G130N, N131T, K133I / M133T, F134N

HBs 4 P142S, T143L / T143S / S143L, D144A / D144E, G145R / G145K

HBs 5 Y161F, A166V

Všech 15 rekombinantních proteinů HBsAg bylo soupravou Access HBsAg deteko-

váno a potvrzeno soupravou Access HBsAg confi rmatory.

Další předností soupravy je vynikající separace pozitivních a negativních vzorků.

Tato data byla získána na skupině sestávající se z 5020 dárců krve ze dvou center

a z 565 pacientů, u kterých bylo požadováno vyšetření

HBV z důvodu expozice, případně zvýšeného rizika

infekce (viz. graf 3).

Další informace o soupravě:PN Název

A24291 Access HBsAg 2x50 tests

A24292 Access HBsAg calibrators

A24293 Access HBsAg QC

A24294 Access HBsAg

Confi rmatory

Množství vzorku 110 μl

Stabilita kalibrace 56 dní

Stabilita reagencie 56 dní

Čas do prvního výsledku 55 minut

TEREZA TIETZE




Graf 1: Typický serologický profi l akutní HBV infekce

Graf 2: Typický serologický profi l chronické HBV


letošním roce fi rma Beckman Coulter

uvede na trh nový kit Access® Inhibin A

jako první automatizovanou soupravu pro

kvantitativní stanovení hladiny lidského

inhibinu A v séru a plasmě na imunochemic-

kých systémech Beckman Coulter (Access®,

Access® 2, UniCel DxI® 600/800).

Tento kit je standardizován dle Diagnostic System

Laboratories Inc. (DSL) ELISA kitu a pro zachování

„konzistence“ využívá stejné protilátky. Validační testy

prokázaly excelentní analytickou citlivost a reprodu-

kovatelnost jednotlivých šarží.

Stanovení Inhibinu A by mělo být součástí těhoten-

ského screeningu ve druhém trimestru pro odhady

rizika Downova syndromu (trizomie 21). Rozšíření

screeningu o další test významně snižuje riziko faleš-

né pozitivity a redukuje počet provedených amnio-

centéz, což celkově přispěje k lepší péči o pacientky,

snížení počtů stresových situací a invazivních zákroků.

Omezení počtu amniocentéz má také značně pozitiv-

ní ekonomický dopad (viz. tabulka 2).

V současné době probíhá klinická validace soupravy

pro účely screeningu vrozených vývojových vad.

Tento kit je kompatibilní pouze s novým promýva-

cím roztokem (WB II).



TEREZA TIETZE


První automatizované stanovení Inhibinu A - expanze reprodukčního panelu

PN Název

A36097 Access Inhibin A 2x50 tests

A36098 Access Inhibin A Calibrators (7x2,5 ml)

A36100 Access Inhibin A QC (3 hladiny, 2x2,5 ml)

Access® Inhibin AACTIVE Inhibin A (DSL-10-28100)

Formát2-krokový sendvičparamagnetické částice

2-krokový sendvičmikrodestičky

Objem vzorku 70 μl 50 μl x 2 (duplikát)

Čas do prvního výsledku 56 min 5 hodin

Dynamický rozsah 1-1500 pg/ml 0-1000 pg/ml

Analytická citlivost <1 pg/ml 1 pg/ml

Stabilita otevřeného packu 28 dní -

Stabilita kalibrační křivky 28 dní Kalibrace každé destičky

Hladiny kalibrátorů pg/ml0, 10, 50, 100 ,500, 1000, 1500

0, 10, 30, 100, 250, 500, 1000

Kalibrátory připraveny k použití připraveny k použití

Hladiny kontrol pg/ml ~ 150, 400, 800 ~ 100, 400

Kontroly připraveny k použití připraveny k použití

AFP, uE3,

hCG

AFP, uE3, hCG,

Inhibin A

AFP, uE3, hCG,

Inhibin A, PAPP-A

% falešné pozitivity

při 75% detekci7,5 4 2

Počet pozitivních pacientek 750 400 200

Počet amniocentéz 640 340 170

% redukce amniocentézy 45 73

Tabulka 1: Informace o soupravách pro stanovení Inhibinu A

Tabulka 2: Parametry biochemického screeningu


Úvod (aneb jak implementovat analyzátor do provozu laboratoře)Nový analyzátor v laboratoři vždy generuje proces změny. Zásah do zaběhlé rutiny

je logicky tím hlubší a provozně často bolestnější, čím více metod je změnou

postiženo. Důvodem problémů zpravidla není přístroj sám o sobě, neboť jeho

instalace, zaškolení obsluhy i převod metod, to vše je věcí čistě technickou. Jádro

problému je spíše v implementaci zařízení do provozu laboratoře. Aby se nový

analyzátor stal skutečně přínosem, měly by být naplněny následující podmínky:

� musí dojít k maximálnímu využití výhod a předností zařízení,

� reálné či potenciální slabiny nebo omezení přístroje musí být minimalizovány,

� provoz laboratoře se musí přizpůsobit vlastnostem přístroje.

V následujících odstavcích se pokusíme ukázat naše představy o implementaci jak

analyzátoru UniCel DxI 800, který je již v provozu v laboratořích RNDr. Zdeněk

Čecháček s.r.o. Brno (1) a pokrývá metodiky imunoanalytické a sérologické labora-

toře, tak i analyzátoru UniCel DxI 600, jenž by měl být hlavním nositelem stan-

dardních imunochemických vyšetření v laboratoři LEDIA s.r.o. Jihlava (2).

Vlastnosti UniCel DxI 800/600Technické vlastnosti analyzátorů nejlépe představí následující tabulka – údaje jsou

převzaty z dokumentace výrobce, fi rmy Beckman Coulter.

Analyzátor UniCel DxI 800 v imunoanalytické laboratoři

Využití přednostíTechnické parametry přístrojů dávají tušit jisté

výhody, které použití analyzátoru uživateli nabízí.

Nás oslovily především vlastnosti jako výkon, ali-

kvotace, kapacita (především počet reagencií na

„boardu“), doplňování zásob za provozu („za

letu“), univerzálnost stojánku ve spojení s jinými

zařízeními Beckman Coulter a jednoduchá obslu-

ha. Tyto jsme se pak pokusili optimálním použi-

tím přetavit ve skutečné přednosti.

a) VýkonDeklarovaný výkon UniCel DxI 800, tj.400, resp.

200 (dvoukrokové metody) testů za hodinu repre-

zentuje kapacitu cca 300 000 testů/rok, a to při

250 pracovních dnech, 4 hodinách běhu přístroje

(bez inkubací) a poměru jednokrokových a dvou-

krokových metod 1:1. Tato hodnota překračuje

více než třikrát naše požadavky. V praxi to zna-

mená, že každodenní požadavky na analýzy

(vzorky, kontroly i kalibrace) budou bez problémů

realizovány, a to navíc s rezervou, která poskytne

dostatek prostoru nejen pro statimové vzorky

(fertilizace in vitro), ale i pro případ výpadku sys-

tému (poruchy, servisní prohlídky apod.). Spekt-

rum metod v brněnské laboratoři představují sta-

timy fertilitních hormonů (LH, FSH, estradiol,

progesteron, hCG), rutinní vyšetření nádorových

markerů (CEA, AFP, PSA, FPSA, CA 125, CA 15-3

a CA 19-9), virologie (hepatitidy a HIV) i infekč-

ních nemocí (toxoplasma), dále skupinu méně

frekventních metod (T3, T4, kortisol, hGH, ostase

– bALP apod.).

Poloviční výkon UniCel DxI 600 dává analogic-

ké předpoklady pro plynulé zvládnutí všech

požadavků na běžná imunochemická vyšetření

v jihlavské laboratoři (štítná žláza, fertilita,

tumormarkery, ostatní hormony) s další perspek-

tivou využití přístroje v rámci imunologické

a sérologické laboratoře (hepatitidy, HIV, infekční

nemoci).

b) Alikvotace a „univerzální“ stojánkyPrvním krokem zpracování vzorku je vytvoření

interního alikvotu s objemem pro všechny

požadované i případně doplňkové (refl exní) testy

a jeho uložení do chlazeného bloku. Tato skuteč-

nost spolu s výkonem 200 - 400 alikvotů za hodi-

nu dává předpoklad pro rychlé uvolnění vzorků

ze systému. To se stává neocenitelnou předností

přístroje při zpracování primárních zkumavek

v laboratořích LEDIA s.r.o. Primární vzorky jsou

vloženy do příslušných stojánků, v případě

Parametr UniCel DxI 800 UniCel DxI 600

Stojánky na vzorkyUniverzální pro UniCel DxI, UniCel DxC, Spinchron, Synchron LX20

Zkumavky na vzorky:sekundární,primární s/bez gelu

12, 13, 16 x 75 mm13, 16 x 75 mm13, 16 x 100 mm0,5 ml sample cup2 ml sample cup (Access)3 ml sample cup1 ml insert cup

12, 13, 16 x 75 mm13, 16 x 75 mm13, 16 x 100 mm0,5 ml sample cup2 ml sample cup (Access)3 ml sample cup1 ml insert cup

Mrtvý objem 150 – 800 μl 150 – 800 μl

Alikvoty - objem- zásobník- skladování- odpařování

600 μl (80 μl mrtvý objem)288 ks4-10°C, max. 3 hodiny≤ 1%

600 μl (80 μl mrtvý objem)288 ks4-10°C, max. 3 hodiny≤ 1%

Výkon alikvoteru 200-400 alikvotů za hod. 200-400 alikvotů za hod.

Stojánky na vzorkyUniverzální pro UniCel DxI, UniCel DxC, centrifuga Spinchron, Synchron LX20

Kapacita 4 vzorky

Zásobník na vzorky:vstupprezentacevýstup

25 stojánků = 100 zkum.4 stojánky31 stojánků

15 stojánků = 60 zkum.4 stojánky19 stojánků

Doba uvolnění 1.stojánku cca 3 min cca 3 min

Zásoby v přístroji: reagencie promývací roztoksubstráttekutý odpadreakční zkumavkypevný odpad

na 1200 testů – 3 hodiny50 reagenčních kazet2 x 10 litrů + rezerva 2l2 x 600 testů2 x 10 litrů2000 ks3600 RV + 73 reag.kazet

na 800 testů – 5 hodin50 reagenčních kazet2 x 10 litrů + rezerva 2l2 x 600 testů2 x 5 litrů2000 ks2000 RV + 40 reag.kazet

Doplňování zásob za provozu, bez nutnosti pauzy přístroje

Výkon - jednokrokové m.- dvoukrokové m.

400 testů za hodinu200 testů za hodinu

200 testů za hodinu100 testů za hodinu

Monitorování systémuDetekce obstrukce (sraženina, bublina)

Detekce obstrukce (sraženina, bublina)

výkon překračuje více než třikrát naše požadavky

požadavku na imunochemická vyšetření barevně

odlišených, v těchto stojáncích centrifugovány

(Spinchron) a následně vloženy do analyzátorů

UniCel DxI 600 a/nebo UniCel DxC 600 – velice

příjemná představa. Navíc předtřídění vzorků na

příjmu lze dokonce zcela pominout (vzorek bez

požadavků může být uvolňován do 9 s, zatímco

vzorek s požadavky za 9 - 36 s dle objemu séra

pro alikvot).

c) Počet reagencií na boarduOba přístroje Unicel DxI jsou vybaveny chlaze-

ným zásobníkem na 50 reagenčních kazet, tzn. že

každý jeden přístroj může být k dispozici pro bez-

konkurenčních 50 různých metod. Vzhledem

k tomu, že reagenční kazety jsou určeny pro

50 testů, je nutno počítat u více frekventních

metod s vyšším počtem reagencií na boardu. Ten-

to požadavek se týká testů, jejichž denní četnost

je vyšší než 50 resp. 100, 150 atd., což reprezen-

tuje 12 500, resp. 25 000, 37 500 atd. testů za rok

(při 250 pracovních dnech). Letmým pohledem

do statistik výkonů obou laboratoří v Brně i Jihla-

vě lze zjistit, že žádná metoda toto kritérium

aktuálně nesplňuje (TSH a FT4 se v Brně provádě-

jí RIA metodami). V principu jsou tedy přístroje

připraveny provádět skutečně 50 různých vyšet-

ření současně.

Nicméně pozornému čtenáři bezpochyby vyta-

ne na mysli otázka: „Co se stane, když je reagenč-

ní kazeta spotřebována během dne a navíc se

jedná o poslední kus z dosud používané šarže?“.

Dějová posloupnost je následující:

� přístroj oznámí nedostatek reagencií - zežloutnutí ikony

„Supplies required“

� obsluha zjistí na obrazovce „Supplies required“ chybějící rea-

gencie

� obsluha vloží reagencie (nové šarže) do přístroje

� přístroj oznámí, že reagencie nejsou kalibrovány

(svítící ikona „Supplies required“)

� obsluha naprogramuje a provede kalibraci reagencií

� po kalibraci přístroj provede příslušná vyšetření – vzorek

má k dispozici ve chlazeném zásobníku alikvotů!

Nutno však pravdivě přiznat, že z pohledu vydání statimové-

ho výsledku je čekání na kalibraci ztráta času. Ano, právě pro

statimy je vhodné držet v přístroji několik volných pozic pro

reagencie a tyto kalibrovat v předstihu (což je věcí výhradně

jen obsluhy). Počet různých metod v jediném přístroji však

stále zůstává na úctyhodné hodnotě 40 - 45. Aktuální potřeba reagencií

v přístroji je v Brně 29 metod, v Jihlavě 31 metod s výhledem dalšího rozší-

ření (až na cca 40 metod). Jsme a budeme tedy v pohodě.

d) Zásoby a jejich doplňování „za letu“Standardním ukazovatelem množství zásob reagencií, spotřebního materiálu

i kontejnerů pro odpad je walk-away time, čili doba provozu přístroje bez pří-

tomnosti obsluhy (resp. bez zásahu obsluhy). Možná, že nejen my, ale i někteří

čtenáři kdesi uvnitř cítí určitou nesmyslnost tohoto parametru, který jde tro-

chu mimo realitu života. Přece nenechám přístroj běžet bez kontroly (tj. zása-

hu) po libovolnou maximálně možnou dobu. Musím přece do přístroje mini-

málně vkládat vzorky, zkontrolovat přijetí požadavků z LIS nebo jejich odeslání

do LIS apod., nehledě na to, že přinejmenším reagencie se spotřebovávají

poměrně nerovnoměrně. Navíc měření tohoto parametru v časových jed-

notkách je poněkud zavádějící. Zásoby systému jsou vždy závislé na počtu tes-

tů a zpravidla limitované velikostí některého z kontejnerů pro reagencie, spo-

třební materiály nebo odpady. Limitujícím faktorem pro analyzátory UniCel DxI

800 jsou dvě lahvičky substrátu, které postačují každá pro 600 testů, Walk-

away time se tedy odvíjí od času potřebného na provedení 1200 testů, což

odpovídá době 4 hodiny (při průměrném výkonu 300 testů/hodinu). Připomeň-

me si, že za uvedených podmínek je přístroj schopen provést 300 000 testů za

rok! Omezenost vypovídací schopnosti parametru walk-away time snad podtr-

hává, že pokud by stejný limit 1200 testů platil pro UniCel DxI 600, pak by

hodnota walk-away time vzrostla na téměř neuvěřitelných 7 hodin!

Podstatné pro nás uživatele však je, že všechen spotřební materiál je v analyzá-

torech UniCel DxI zdvojen, a to dokonce takovým způsobem, že jej lze doplňovat

kdykoliv a při jeho výměně, resp. doplnění přístroj nerušeně pokračuje v práci.


e) Jednoduchá obsluhaPojem „jednoduchá obsluha“ je bezpochyby ještě hůře uchopitelný, než ter-

mín rozebíraný v předešlém oddíle. Maximalisticky bychom mohli požado-

vat, aby přístroj byl tak „jednoduchý“, aby s ním mohl pracovat kdokoliv. Co

tedy musí umět obsluha přístroje UniCel DxI, aby mohla provést rutinní

analýzu:

� správně uložit zkumavky se vzorky do stojánku příslušné barvy

a označení,

� otevřít víko prostoru pro vkládání vzorků,

� vložit korektně stojánek do přístroje (číslem dopředu),

� zavřít víko prostoru pro vkládání stojánků,

� umět vyhodnotit stav systému na základě kontrolních LED diod na před-

ním panelu a informačního panelu (viz obrázek),

� v případě potíží (žlutá nebo červená LED) přivolat pomoc,

� po otevření víka na výstupu umět vyjmout zpracované stojánky se vzor-

ky a zavřít víko.

Je zřejmé, že této sekvenci jednoduchých úkonů musí předcházet příprava

přístroje k činnosti zahrnující údržbu, doplnění zásob systému, kalibraci metod

a stanovení kontrol kvality, ovšem prováděné důkladně proškoleným personá-

lem. Funkčnost takovéto představy však vyžaduje realizaci změn v zaběhlých

pracovních postupech.

Eliminace omezeníV rámci potřeb běžného provozu se ukázalo za nevyhnutné zabývat se

dvěmi problémy, resp. omezení: objemem vzorku a adekvátní zálohou ana-

lyzátorů.

a) Objem vzorkuZvýšená spotřeba vzorku je jediným technickým omezením analyzátoru Uni-

Cel DxI. Nejedná se ani tak o záležitost jednotlivých vyšetření, kde se objemy

vzorku sice pohybují od 5 – 210 μl, ale v případě 47 z 55 dostupných metod

je požadovaný objem vzorku < 60 μl. Zdrojem nesnází jsou mrtvé objemy

vzorkové nádobky (80-800 μl) a interního alikvotu (80 μl/alikvot) a dále

i rezervní objem pro refl exní testy (dle typu refl exní metody, u nás 50 μl).

V našem provozu hraje roli zvýšená spotřeba vzorku pouze pokud neobdrží-

me primární zkumavku (vzorek v sekundární zkumavce ze spolupracující

laboratoře zaslaný na dotestování) a v případě pediatrických vzorků. Jak si

pomáháme u vzorků s omezeným objemem? Standardními i lehce nestan-

dardními (výjimečně) postupy:

� používáme stojánky, které jsou předdefi novány, aby z nich nebyl pipe-

tován rezervní objem pro refl exní testy (sekundární zkumavky

13x75 mm), objem vzorku „navíc“=280 μl,

� analýzu provádíme v nádobkách „0,5 ml Sample Cup“, objem

„navíc“=160 μl,

� vyšetření programujeme ručně – jen metody, pro něž je k dispozici

objem vzorku,

� mírným opatrným a vyzkoušeným pozdvihnutím zkumavky 13 x 75 ve

stojánku se zakázaným rezervním objemem lze objem vzorku navíc

snížit na cca 100 μl.

Zkušenosti z několikaměsíčního provozu uka-

zují, že problém nedostatečného objemu vzorku

lze uvedeným způsobem posunout do roviny zce-

la ojedinělé výjimky.

b) Zajištění průchodnosti analyzátoru pro statimy

Potřeba vydávat výsledky vyšetření pro centra

fertilizace in vitro denně (Brno) ve statimovém

režimu vyvolává nutnost zajistit si v okamžiku

jejich příjmu dostatečnou průchodnost analyzá-

toru vzhledem k ostatním rutinním vzorkům. To

se realizuje jednak „statimovým“ režimem vklá-

dání vzorků do přístroje, jednak organizačně, tj.

pozdržením rutiny přijaté před statimy. Další při-

pravenou variantou je rezervování jednoho ze

čtyř pipetorů pouze pro statimové metody, což

v praxi znamená, že pro ostatní vyšetření jsou

otevřeny (assignovány) 3 pipetory, zatímco pro

statimy všechny 4. Zpracování rutiny je v tomto

případě nepatrně prodlouženo, ale analyzátor je

schopen vždy zahájit zpracování statimů, bez

ohledu na skladbu a množství předchozích, již

alikvotovaných vzorků.

c) Záloha analyzátoruZe stejného důvodu jako v předešlém odstavci

bylo nutno řešit i odstávky provozu analyzátoru

UniCel DxI 800, a to ať již způsobené poruchou,

nebo plánovanou servisní prohlídkou. Jako plně

postačující se nám jeví záloha analyzátorem

Access 2, protože vzhledem k potřebám klientů

jistotu výsledku ihned nebo za všech okolností

doplňovat spotřební materiál lze kdykoliv, přičemž přístroj nerušeně pokračuje v práci


nejpozději do druhého dne musíme zajistit

u maximálně 10 metod (hormony pro fertilizaci

in vitro, HIV a základní hepatitidy). Bonusem

v případě přístroje Access 2 jsou identické rea-

gencie a tedy i výsledky. Dosavadní zkušenosti se

servisem potvrzují faktické zprovoznění přístroje

nejpozději do 24 hodin, takže rutinní vzorky jsou

vydány maximálně o den později než za stan-

dardního provozu, a to bez zvláštních časových

nároků, protože rezerva ve výkonu přístroje je

dostatečná.

Přizpůsobení provozu laboratořeSoftware analyzátorů UniCel DxI je odvozen od

staršího „bratříčka“ Access 2, takže rozjetí provo-

zu přístroje po instalaci nepřineslo žádné potíže.

Stačilo si jen zvyknout si na jiný systém režimu

údržby, který se spíše odvíjí od počtu na přístroji

provedených testů než od časových termínů.

A také strávit výrazně jednodušší obsluhu.

Zásadní část změny v laboratoři nás (v Brně)

stále ještě čeká, protože se týká sladění činností

dvou organizačně nezávislých celků – imunoa-

nalytické laboratoře a sérologické laboratoře.

UniCel DxI 800 využívají obě oddělení zatím

samostatně. Jen se po měsících dělí o údržbu.

Naší vizí je, aby pracovníci zodpovědní za kon-

krétní metody zajistili, aby tyto byly v přístroji

nakalibrovány, aby se v předepsaných interva-

lech stanovovaly vzorky kontroly kvality a jejich

výsledky vyhodnotily. Přísun vzorků z příjmu do

přístroje by měl běžet nezávisle, stejně tak jako

odesílání výsledků analýz do LISu. Kontrolu

výsledků vyšetření by pak opět prováděli zmíně-

ní zodpovědní pracovníci v klidu své laboratoře

či pracovny. Slibujeme si od toho rovnoměrnější

zatížení přístroje a samozřejmě zkrácení TAT. Leč

zatím narážíme na hluboce zakořeněné návyky

absolutní zodpovědnosti za metodu zahrnující

každičký jeden detail činností před, při a po

analýze. Zatím není kam spěchat, protože pro-

ces implementace analyzátorů do laboratoří

stejně jako finalizace portfolia vyšetření na jed-

notlivých přístrojích je stále ještě v pohybu. Ale

jednoho dne …

Několik poznámek na závěra) Bez čárových kódů to nejdePořídit si analyzátoru typu UniCel DxI do labora-

toře, která nevyužívá čárové kódy, je nešťastné.

Programování vzorků je pak v podstatě delší než

jejich zpracování systémem.

b) Provozní dokumentaceDeník údržby, který je uveden v dokumentaci přístroje je plně postačující

a vyhovující. Nicméně, protože formulář je na jeden měsíc a údržba je do

jisté míry orientována na počet testů, rozdělili jsme jej do dvou částí. Pro-

vozní denník a denník dlouhodobé údržby.

c) Kvalita reagencií, kontrola kvalityKvalita reagencií je samozřejmě základním předpokladem pro výběr analy-

zátoru. Stejně jako její monitorování v průběhu používání přístroje. Ale

o tom až příště.

Představení laboratoří(1): RNDr.Zdeněk Čecháček s.r.o., Brno je privátní laboratorní zdravotnické

zařízení poskytující služby v oblasti speciálních imunochemických metod, mik-

robiologie a sérologie. Počet imunochemických vyšetření (včetně sérologic-

kých) je cca 200 000 vzorků za rok. Provádějí se jak RIA/IRMA metodami na

dvou analyzátorech Stratec SR 300, tak na neizotopových analyzátorech (Uni-

Cel DxI 800, Access 2, LIAISON, ELECSYS, Chorus), resp. ELISA automatu ALISEI,

případně v omezené míře manuálně.

(2): LEDIA s.r.o., Jihlava je privátní laboratorní zdravotnické zařízení poskytu-

jící služby v oblasti klinické biochemie, základní hematologie, imunologie, séro-

logie a mikrobiologie. Počet imunochemických vyšetření (včetně imunologie

a sérologie) je cca 60 000 vzorků za rok. Provádějí se na analyzátoru Access 2,

ELISA automatu Dynex resp. manuálně. V laboratoři je od ledna 2007 bioche-

mický analyzátor UniCel DxC 600 a už několik let centrifuga Spinchron.

ING. PETR MATĚJKA

RNDR. ZDENĚK ČECHÁČEK, S.R.O. – IAL A MSL

BRATISLAVSKÁ 2, 602 00 BRNO



Konverze promývacího

roztoku: WB � WB II

Vážení uživatelé imunochemických

systémů Beckman Coulter,

rádi bychom Vás předběžně informova-

li o brzy plánované konverzi promýva-

cího roztoku (Wash Buffer, WB), kat. č.

Access®, Access® 2 - 81907, UniCel

DxI® 800 - 8547197, která by se měla

uskutečnit ke konci roku 2007. Modifi -

kace spočívá zejména ve výměně sou-

časného detergentu FC 100, který je

nahrazen ekologičtější složkou Tween

20 s příznivějším dopadem na životní

prostředí, jenž je běžně používán

v jiných průmyslových odvětvích (zdra-

votní, farmaceutický, potravinářský...).

Konverze přímo souvisí s modifi kací

některých metod s cílem zabezpečit

kompatibilitu výsledků při použití obou

typů promývacích roztoků. Většina kitů

zůstává beze změny a je kompatibilní

s oběma pufry (WB, WB II). Sedm

metod však vyžaduje modifi kaci, která

již proběhla u kitů FT4, DHEA-S, Prog

a TgAb. V současné době dobíhá transformace zbývajících kitů Toxo IgG, Rubel-

la IgM a HIV. Výměna promývacích roztoků u zákazníka bude zahájena až poté,

kdy budou k dispozici všechny kity kompatibilní s novým pufrem.

!!!Nový promývací roztok NELZE zaměnit/mísit s pufrem stávají-

cím!!! Proto bude potřeba kompletně vyměnit pufr v celém systému, s čímž

souvisí také drobná úprava hardwaru (nové, širší hrdlo nádoby s pufrem),

příslušná verze softwaru a APF, kterou provede servisní tým. Dalším krokem

je likvidace roztoků obsahující „starý“ WB (ředěný citranox, ředěný system

check). Nezbytná bude také rekalibrace všech metod, kterou provede pro-

duktová podpora.

Access Access 2 DxI

Požadovaný software

pro konverzi > 3.3 > 2.5 > 2.3

Protože se jedná o poměrně zásadní změnu, bude potřebná vzájemná spolu-

práce mezi laboratoří a fi rmou Beckman Coulter, aby nedošlo ke zbytečným

nedorozuměním a komplikacím. Konverze bude předem pečlivě naplánována

a bude se vždy jednat o individuální plán, dle dohody a přání zákazníka tak, aby

nebyl narušen provoz laboratoře.



TEREZA TIETZE


Diabetes, metla třetího tisíciletí

Krátce z historie diabetuDiabetes je onemocnění staré zřejmě jako civilizace

sama. První záznamy, které popisují typické příznaky

diabetu, vznikly před několika tisíci lety. Nejstarší

z nich pochází ze starověkého Egypta z roku 1552

před Kristem. Egyptský lékař Hesy-Ra tehdy na papy-

rovém svitku popsal symptom nadměrného močení.

Termín diabetes, který v řečtině znamená sifon,

použil poprvé řecký lékař Areteu z Capadocia v roce

70 tohoto letopočtu. Charakterizoval diabetes jako

onemocnění čtyř P: polyphagie (nadměrná chuť

k jídlu), polydipsie (nadměrný příjem tekutin), poly-

urie (nadměrné močení) a polyasthenie (vysoká

únava). Termín sifon symbolizuje skutečnost, že

postižení mají enormně zvýšený příjem energie,

která však tělem pouze bez užitku projde stejně jako

voda proteče sifonem. Označení mellitus pochází

z latiny a znamená medově sladký. Tato skutečnost

měla dlouhou dobu svůj diagnostický význam.

Ochutnávání moči patřilo totiž zejména ve středo-

věku k běžným vyšetřovacím postupům při dia-

gnostice diabetu. Ovšem až v roce 1815 izoloval

francouzský chemik Michel Eugene Chevreul cuker-

nou složku z diabetické moči a určil, že se jedná

o glukózu. Jeho objev posunul poznání podstaty

diabetu o velký kus dopředu. Stále ovšem zbývala

ještě hodně dlouhá cesta k objevu klíčové molekuly

tohoto onemocnění, tedy insulinu.

Důležitý objev na cestě k insulinu učinil v roce

1869 německý student medicíny Paul Langerhans.

V rámci disertační práce studoval pod mikroskopem

pankreatickou tkáň. Všiml si, že tkáň obsahuje

množství odlišných buněčných shluků, malých ost-

růvků. Na sklonku 19. století vyslovil Francouz Gus-

tave Laguesse myšlenku, že tyto ostrůvky produkují

substanci, která reguluje hladinu krevního cukru.

Dosud neizolovaný hormon dostal své jméno v roce

1910. Sharpey-Shafer z Edinburghu postuloval

hypotézu, že v pankreatu diabetiků chybí klíčová

molekula, kterou nazval insulin, tedy ten, který

pochází z ostrůvků (z latinského insula – ostrůvek).

Tato hypotéza byla defi nitivně potvrzena až v roce

1921, kdy Frederick Banting a jeho asistent, student

medicíny Charles Best z torontské univerzity, apli-

kovali extrakt psího pankreatu diabetickému psovi.

Výsledkem aplikace extraktu bylo snížení hladiny


krevní glukózy. Počátkem roku 1922 byl přečištěný

extrakt pankreatu poprvé použit k léčbě člověka.

Podařilo se tak zachránit život čtrnáctiletého chlap-

ce Leonarda Thompsona, který se již nacházel v dia-

betickém komatu. V roce 1923 byl tento mimořádný

objev oceněn Nobelovou cena za medicínu a fyzio-

logii. Objev insulinu znamenal a stále znamená

záchranu života pro miliony lidí na celém světě.

Co říká statistika?Objev insulinu učinil z nevyhnutelně smrtelné cho-

roby nemoc, která sice znepříjemňuje život, ale

nemusí ho nutně rychle zkrátit. Přestože existuje

způsob, jak postiženým pomoci, nevyplatí se tuto

nemoc podceňovat. Důvodů je hned několik. Prv-

ním je vysoká prevalence. Odhaduje se, že asi 3 %

celosvětové populace jsou zasažena touto nemocí.

Podle statistik Světové zdravotnické organizace bylo

v roce 2000 na zemi 171 milionů diabetiků. Očekává

se, že tento počet do roku 2030 vzroste na 366 mili-

onů. V České republice bylo v roce 2004 léčeno přes

700 000 diabetiků, tedy kolem 7 % obyvatel (Zdra-

votnická ročenka České republiky 2004). Ve Sloven-

ské republice bylo v témže roce registrováno 5,3 %

diabetiků (Zdravotnická ročenka Slovenské republi-

ky 2004). I přes existenci insulinu se diabetes stále

nachází na jednom z předních míst v příčinách

mortality. Diabetu se v roce 2000 celosvětově při-

soudilo 5,2 % předčasných úmrtí. Čísla jsou skuteč-

ně alarmující. Pojďme se podívat na to, co se za

vlastně za termínem diabetes melitus skrývá.

Co to je diabetes?Diabetes mellitus představuje skupinu onemocnění

se společným jmenovatelem, a tím je hypergly-

kemie. Existují dvě hlavní etiologické skupiny: dia-

betes mellitus 1. a 2. typu.

Diabetes mellitus 1. typu je znám také pod dříve používaným označením

insulin-dependentní diabetes. Jeho charakteristickým

rysem je autoimunitní destrukce B-buněk Langer-

hansových ostrůvků, které produkují insulin. Příčinou

hyperglykemie je tedy v tomto případě částečný nebo

úplný nedostatek insulinu. Laboratorně je obvykle

snížena bazální koncentrace insulinu a C-peptidu.

Také průběh křivky insulinu a C-peptidu po zátěži

v glukózovém tolerančním testu je nestandardní.

Autoimunitní proces lze dobře identifi kovat přítomností autoprotilátek proti ost-

růvkům a ostrůvkovým proteinům. Nejčastěji se vyskytují protilátky proti kyselině

glutamové (anti-GAD). Dále se stanovují protilátky proti tyrozinfosfatáze (anti-

IA2) a proti insulinu (anti-insulin). Stanovení autoprotilátek může mít i určitý pro-

gnostický význam. Autoprotilátky se mohou vyskytovat již před manifestací vlast-

ní choroby, v tzv. prediabetickém stadiu. Jejich přítomnost je spojována s rychlým

rozvojem onemocnění. Kombinované stanovení všech tří uvedených typů auto-

protilátek zvyšuje přesnost predikce. Na druhou stranu je třeba si uvědomit, že

přítomnost autoprotilátek neznamená jistotu, že se diabetes skutečně klinicky roz-

vine. Bylo prokázáno, že v patogenezi diabetu 1. typu hrají nezanedbatelnou roli

genetické faktory. Zdá se, že diabetes 1. typu je spojen se zvýšeným výskytem HLA

antigenů určitého typu. Z toho plyne, že dětem z rodin s historií diabetu by měla

být v tomto směru věnována zvýšená pozornost.

Diabetes mellitus 2. typu (dříve non-insulin-dependentní) představuje heterogenní skupinu onemoc-

nění. Většina diagnostikovaných diabetiků, uvádí se až 90 %, se řadí do této sku-

piny. Spojujícím článkem je opět hyperglykemie, která ale tentokrát není důsled-

kem absolutního nedostatku insulinu. Spíše se jedná o neschopnost tkání reagovat

na jeho přítomnost. Bazální hladiny insulinu a C-peptidu jsou u těchto pacientů

normální nebo mohou být dokonce zvýšené. Od diabetu 1. typu se liší také nepří-

tomností autoimunitní destrukce ostrůvkových buněk. Protože hyperglykemie

není obvykle tak těžká, jako tomu je u diabetu 1. typu, může zůstat tato vážná

choroba nerozpoznána, a to i po dobu několika let. V těchto případech nerozpo-

znaného, a tedy nekompenzovaného diabetu narůstá riziko rozvoje komplikací,

které toto onemocnění provázejí. Zasažena bývá velká část cévního systému.

Hovoří se tzv. mikroangiopatii a makroangiopatii. Důsledkem jsou pak patologické

změny na různých orgánech. Nejčastěji bývají postiženy oči, ledviny, nervový

a kardiovaskulární systém a kůže. Statistiky jsou i v těchto případech alarmující.

Diabetes je hlavní příčinou slepoty u mladých lidí. Diabetici jsou také vystaveni

vyššímu riziku infarktu myokardu a mozkové mrtvice než ostatní. Chronické selhá-

ní ledvin, které se může po mnoho let vyvíjet bez vnějších známek, patří také

Nejčastěji bývají postiženy oči, ledviny, nervový a kardiovas-kulární systém a kůže. Statistiky jsou i v těchto případech alarmující.


k velmi četným komplikacím diabetu. V konečném stadiu je řešením jen transplan-

tace nebo doživotní dialýza. První známkou poškození tepének a kapilár v glo-

merulech je propouštění velmi malých množství proteinů, např. albuminu, tzv.

mikroalbuminurie. Pomocí stanovení albuminu v moči použitím citlivých metod

lze tento problém včas zachytit.

Velmi častým průvodním jevem diabetu 2. typu je obezita. Trpí jí až 85 %

těchto diabetiků. S obezitou jsou obvykle spojeny postižení kardiovaskulárního

systému. Vzájemným propojením tzv. centrální obezity, hyperinsulinemie, hyper-

glykemie, hypertense a porušeného metabolismu lipidů (dislipidemie) je tzv.

syndrom X, který je také někdy označován jako syndrom insulinové resistence

nebo metabolický syndrom. Jeho hlavní význam zřejmě spočívá v tom, že pou-

kazuje na vzájemnou souvislost několika patologických stavů, jejichž současná

existence výrazně zvyšuje riziko kardiovaskulárních příhod.

Je šance na změnu?Všechny statistiky související s diabetem jsou velmi alarmující a vyvolávají

otázku, zda je možné tento neúprosný vývoj nějak zvrátit. U diabetu 1.

typu, jehož rozvoj je značně ovlivněn genetickými faktory a dále životním

stylem a stravovacími návyky, se prozatím nepo-

dařilo prokázat možnost účinné primární pre-

vence. Jiná je ale situace u diabetu 2. typu, který

je spojován s tzv. centrální obezitou. Zdá se, že

existuje pojítko mezi vzrůstající prevalencí této

nemoci a změnami životního stylu, které před-

stavují na jedné straně nedostatek fyzické aktivi-

ty a na straně druhé vysoce energetickou stravu

bohatou na živočišné tuky a cukry a chudou na

nestravitelné podíly. Výsledkem tohoto stylu je

vzrůstající procento jedinců s nadváhou a obezi-

tou. Vše se zdá být jasné a jednoduché. Stačí

změnit životní styl.

Aby nezůstalo jen u zdání, je skutečný vliv návy-

ků souvisejících se životním stylem ověřován pro-

střednictvím rozsáhlých studií. Výsledky dosavad-

ních pozorování jsou uvedeny ve zprávě WHO

z roku 2003. Uvádí se v ní, že fyzická aktivita má

prokazatelně pozitivní vliv na zvýšení citlivosti tká-

ní k insulinu. Touto cestou lze tedy předejít nebo

alespoň omezit insulinorezistenci. Vysoký příjem

tuků bohatých na nasycené mastné kyseliny má za

následek zvýšení bazální hladiny insulinu, snížení

citlivosti vůči insulinu a poruchy v toleranci glukó-

zy. Naopak zvýšený podíl nenasycených mastných

kyselin v tucích snižuje riziko rozvoje diabetu 2.

typu a zvyšuje citlivost k insulinu. Snížení nadváhy

má pozitivní efekt na snížení rizika rozvoje diabetu

2. typu. Podobným způsobem se projevuje i zvýše-

ný podíl vlákniny ve stravě.

Primární prevence diabetu 2. typu je tedy zřejmě

v rukách každého z nás. Odhaduje se, že tímto způ-

sobem by se prevalence tohoto onemocnění mohla

snížit až o 50 %. To už bezesporu stojí nejen za úva-

hu, ale i za námahu.

Sekundární prevence spočívá především ve včas-

ném odhalení nemoci, důsledném dodržování tera-

pie a pečlivé prevenci komplikací. Zde podává

pomocnou ruku také laboratorní diagnostika.

Současná nabídka diagnostiky související s diabetem a obezitouKód Produkt

IM3639 C-peptide IRMA

IM2456 C-peptide ILMA

33410 Ultrasensitive Insulin (Access)

IM3210 Insulin IRMA

IM3251 Albumin RIA

IM3650/IM3651 Anti-GAD IRMA

IM3652/IM3653 Anti-IA2 IRMA

A36473/A36474 Anti-Insulin IRMA

DSL-10-33700 Ghrelin Total ELISA

DSL-23100 Leptin IRMA

DSL-10-23100 Leptin ELISA

DSL-10-33600 PYY Total ELISA

HELENA KURZWEILOVÁ

E-MAIL: HKURZWEILOVA@

BECKMANCOULTER.COM

Vývoj počtu diabetiků v České republice

Vývoj počtu diabetiků v České republice

Vývoj počtu diabetiků ve Slovenské republice

Nové reagencie pro průtokovou cytometrii

IOTest® TCR Pan α/β-PEobjednací číslo: A39499

A39499 nahrazuje předcházející výrobek IM1467U

(klon BMA031)

klon IP26A

druh myš

izotyp IgG1

Počet testů: 50

Objem v testu: 20 μL

TCR (T Cell Receptor) α/β je exprimován CD3 pozi-

tivními lymfocyty T (89,4 - 98,4 % všech CD3+

lymfocytů T)

Související výrobky:IOTest® TCR Pan α/β-PC5

TCR Pan γ/δ-FITC, klon IMMU510, izotyp IgG1

IOTest® TCR Pan γ/δ-FITC

IOTest® TCR Pan γ/δ-PE

IOTest® TCR Pan γ/δ-PC5

Monoklonální protilátka IMMU510 značí všechny

γ/δ lymfocyty T, bez ohledu na jejich variabilní

řetězce.V periferní krvi je pozitivních 1,6 % - 8,9 %

CD3+ buněk zdravých dárců.

IOTest® Anti-NTB-A-PEObjednací číslo A40926

Klon: MA127

Izotyp: IgG1, Kappa

Druh: myš

Počet testů: 50


Název molekuly NTB-A je odvozen od „NK-, T-, and

B-cell Antigen“. Molekula NTB-A (NK-, T-, and

B-cell Antigen) je exprimována na NK buňkách,

lymfocytech T (kde se exprese NTB-A zvyšuje po

aktivaci), lymfocytech B a eozinofi lech. Dále je

exprimována také na buňkách chronické lymfatic-

ké leukemie B typu a lymfomů.

IOTest® CD226 (DNAM-1)-PEObjednací číslo A44227

Klon: KRA236

Izotyp: IgG1, Kappa

Druh: myš

Počet testů: 50


Označení molekuly je odvozeno od „DNAX accessory molecule 1”. Molekula

DNAM-1 je exprimována na většině lymfocytů T periferní krve, NK buňkách,

monocytech, makrofázích, krevních destičkách, megakaryocytech a subpopulaci

lymfocytů B.

Je také exprimována na subpopulaci thymocytů s vysokou denzitou povrchové-

ho antigenu CD3 a na žírných buňkách. Není exprimována na granulocytech

a erytrocytech.

Při stanovení na buňkách NK je výhodné použít kombinaci CD3-FITC/CD56-

PC5 (objednací číslo A07415) s lýzou erytrocytů lyzačním roztokem VersaLyse™

a s fi xací pomocí IOTest 3 Fixative Solution a následným promytím.

U vzorků odebíraných do EDTA je pozorována adheze krevních destiček na leu-

kocyty. Z tohoto důvodu se u těchto vzorků, kde se používá pouze tato proti-

látka pro značení leukocytů, doporučuje použít lyzační roztok Whole Blood

Lysing Reagent (objednací čísla 6602764 nebo 6603152), který snižuje adhezi

krevních destiček na leukocyty.

IOTest® CD7-PC7Objednací číslo A46526

Klon: 8H8.1

Izotyp: IgG2a

Druh: myš

Počet testů: 100


Nový katalog Cellular Analysis 2007V současnosti je všem zájemcům k dispozici nový katalog Cellular Analysis

2007, obsahující reagencie pro průtokovou cytometrii a imunohistochemii.

Obsahuje také širokou nabídku monoklonálních protilátek značených různými

fl uorochromy v rámci programu CUSTOM DESIGN SERVICE.

PAVEL KRUŽÍK


Alexa Fluor* 488 CD207 CD208

PC5.5 CD3 CD25

CD4 CD34

CD5 CD38

CD8 CD45

CD10 CD56

CD13 CD127

CD14 CD158a,h

CD16 CD1581/b2,j

CD19 HLA-DR

CD20 TCR PAN

PC7 CD22 CD105

CD23 CD127

CD25 CD152

CD27 CD158 a,h

CD28 CD158 b1/b2,j

CD31 CD203c

CD42b CD335

CD45R0 CD336

CD45RA CD337

CD69 IL-4

CD71 TCR V 24

CD80

APC-Alexa Fluor* 700 CD3 CD20

CD4 CD27

CD8 CD28

CD16 CD45

CD19

APC-Alexa Fluor* 750 CD3 CD25

CD4 CD34

CD5 CD38

CD8 CD45

CD10 CD56

CD14 CD127

CD16 HLA DR

CD19 IL-2

CD20

APC CD127

Alexa Fluor 700* CD19 IL-4

Pacifi c Blue* CD3 CD20

CD4 CD45

CD8 CD57

CD19 HLA-DR

PE ZAP-70

ECD CD1a CD158e1/e2

PC5 TCR V 11

Alexa Fluor 647* CD57

* Ochranné známky jsou vlastnictvím příslušných vlastníků

Více informací naleznete v katalogu Cellular Analysis 2007/2008 a What´s New (FL10712A).

CUSTOM DESIGN SERVICE


Co je nového v ultracentrifugaci?

Nová stolní ultracentrifugaNový rotor – 150 000 RPM

Nový adapter pro mikrozkumavky 1.5 ml

Nová stolní ultracentrifuga Optima MAX-XP je ideálním nástrojem pro subcelulární frakcionace, izolaci virových partikulí či

pro separaci proteinů a ostatních biologicky významných makromolekul. Opti-

ma MAX-XP dosahuje rychlosti až 150 000 RPM a přetížení až 1 019 000 g.

Velký důraz byl při vývoji kladen na tichý chod a intuitivní ovládání pomocí

plnobarevné dotykové obrazovky. Optima MAX-XP je kompatibilní se všemi

existujícími rotory Beckman Coulter určenými pro stolní ultracentrifugy - třída

TL a ML a umožňuje použít centrifugační zkumavky až do objemu 13.5 mL.

Nová ultracentrifuga umožňuje/používá:� Volbu rychlosti v RPM nebo RCF(g)

� Nastavení ID uživatele

� Ochranu pomocí přístupových kódů

� Odložený start

� Pulsní centrifugaci

� Detailní výpis historie jednotlivých běhů

� Registraci rotorů a přehled jejich historie

� Export dat skrze USB port

� Umístění do bio-kabinetu pro práci v čistém prostředí

� Katalog rotorů online

� Uživatelské změny v katalogu rotorů

� Rychlý a pohodlný přístup k seriovému číslu

a číslu verze

� Vizuální a zvuková signalizace stavu ultracentri-

fugy

� Snadno dosažitelnou funkci “Help”

� Plnobarevnou dotykovou obrazovku

Specifi kace:� Maximální rychlost (RPM): 150,000 (rotor MLA-

150)

� Maximální přetížení (RCF x g): 1 019 000 (rotor

MLA-130 rotor)

� Kontrola rychlosti – nastavení +/- 50 rpm

� Tolerance nevyvážení - 10% objemu v protileh-

lých zkumavkách

� Indukční, vzduchem chlazený pohon, kontrola

překročení povolené rychlosti rotoru

� Chlazení bez použití chladicího media (systém

bez CFC/ODC)

� Nastavení teploty - 0o až 40oC (inkrement 1oC)

� Uživatelské programy bez omezení počtu. Každý

program může mít až 5 kroků.

� Akcelerace - 10 akceleračních profi lů

� Brždění - 11 zpomalovacích programů

� Vakuový systém s odstraňováním vlhkosti

� Tepelný výkon - 0.7 kW, 2400 BTU/h

� Hluk (1 m) <47 dB (A)

Optima MAX-XP je kom-patibilní se všemi exis-tujícími rotory Beckman Coulter určenými pro stolní ultracentrifugy - třída TL a ML


� Rozměry: W x D x H (mm): 29 W x 23 D x 16.1 H

(737 x 584 x 409)

� Hmotnost: 105 kg

� Příkon: při napětí 220/240 V ~6A, 50 Hz

Nový úhlový rotor MLA-150 pro Optima MAX-XPRotor je určen pro vysokorychlostní aplikace,

zejména pro izolaci virových partikulí či pro sepa-

raci proteinů.

Maximální rychlost: 150,000 RPM

Maximální přetížení (RCF x g): 1 003 000 g

Kapacita: 20 mL (8 x 2 mL)

k-faktor: 8.7 při max. kapacitě. Při použití otevře-

ných zkumavek a plnění na 1 mL dosahuje skvělého

k-faktoru 4.8.

Rotor je možno použít se zatavovacími zkumav-

kami Quick-Seal Polyallomer s objemem 2 a1.5 mL

nebo se silnostěnnými polykarbnátovými nebo

polyalomerovými zkumavkami o objemu 2 mL.

Nový adapter pro populární formát 1.5 mL mikrocentrifugačních zkumavek (“eppendorfek”) se šroubovacím víčkem. Adapter (PN 393238, balení 6 kusů) je určen pro

rotor TLA 110, který je kompatibilní se všemi stolní-

mi ultracentrifugami Beckman Coulter.

Použití adapterů vám umožní využít běžně

používané laboratorní mikrozkumavky (PN 430909)

k ultracentrifugaci a dosáhnout přetížení 536 000

g při rychlosti 110 000 RPM.

JIŘÍ MOOS


Nejistoty imunochemických stanoveníKvalita diagnostických zdravotnických pro-středků in vitro (IVD MD) je spolu s cenou jedním z rozhodujících faktorů při výběru poskytovatele zdravotní péče, rozhoduje-li se mezi několika dodavateli.

měrnice 98/79/EC (NV č.453/2004 Sb.) ukládá výrobcům poskytovat

uživateli řadu informací týkajících se tak či onak kvality IVD MD,

nicméně orientovat se v nich nemusí být vždy zcela jednoduché,

neboť neexistuje ve všech případech jednotný způsob, jak jsou

tyto údaje předkládány. Navíc platí, že se jedná o data naměřená

za určitých podmínek výrobcem, což znamená, že při jinak vede-

ných experimentech mohou být získány mírně odlišné výsledky. Jed-

ná se zejména o údaje týkající se analytické a funkční citlivosti, reprodukova-

telnosti a opakovatelnosti, specifi city atd.

Je nutné si uvědomit, že výsledky získané pomocí IVD MD jsou, obdobně jako

všechna ostatní fyzikální či fyzikálně chemická měření, stanoveny s určitými

nejistotami. Vzhledem k tomu, že nejistota představuje interval, v němž se

s konkrétní mírou pravděpodobnosti nachází skutečný výsledek měření, jedná

se o parametr velmi důležitý, který může být v některých případech pro

použitelnost výrobku rozhodující.

Jednotlivé příspěvky k celkové nejistotě měření lze popsat jako příspěvek kalib-

račního systému, příspěvek vlastního procesu stanovení, příspěvek individuálního

vzorku a ostatní příspěvky (1). Podrobný výklad problematiky nejistot je podán

např. v práci Suchánka a spol. (http://www.sekk.cz/Texty/2005_Nejistoty.pdf) (2).

I když si v praxi každá laboratoř musí stanovit nejistoty prováděných stano-

vení sama, může již při výběru metodiky jejich úroveň relativně dobře odhad-


nout z údajů poskytovaných výrobcem – nejistoty kalibrátorů (nejistota typu B)

a údajů o reprodukovatelnosti metodiky (inter assay) (nejistota typu A).

Jaké jsou tedy odhady, resp. naměřené hodnoty kombinovaných rozšířených nejistot U (k = 2) některých stanovení běžně prováděných v klinických laboratořích?

StanoveníHladina

stanoveníU [%]

koncentrace fi brinogenu v plazmě2 1,8 a 2,9 g.l-1 10,8

počtu leukocytů v krvi2 2,9, 7,5 a 12,7 n. l-1 9,2

koncentrace glukózy v séru2 5,4 a 13,4 mM 4,2

katalytická koncentrace AST v séru2 2,1 a 3,4 μkat. l-1 14,6

koncentrace cholesterolu v séru3 4,11 mM 6,7

konc. C-peptidu v séru* (Immunotech, IRMA)4 < 10 - 102 pM 11,4

konc. PSA total v séru* (Immunotech, IRMA)4 < 10 - 102 pM 11,6

koncentrace fT3 v séru* (Immunotech, RIA)4 < 1 - 102 pM 13,0

koncentrace TSH v séru* (DPC Immulite 2000)3 cca 6 pM 14,4

koncentrace TSH v séru* (Immunotech, IRMA)4 < 1 - 102 pM 14,8

konc. ferritinu v séru* (Immunotech, IRMA)4 < 10 - 102 pM 15,8

konc. prolaktinu v séru* (Immunotech, IRMA)4 < 3.10 - 102 pM 17,3

koncentrace kortisolu v séru* (Immunotech, RIA)4 < 3.10 - 102 nM 20,6

*) nejistoty odhadnuté pomocí nejistot kalibrátorů a hodnot průměrných směrodatných

odchylek reprodukovatelnosti

Je nutno dodat, že pro odhad nejistot u výrobků Immunotech a.s byly použi-

ty průměrné hodnoty nejistot kalibrátorů a směrodatných odchylek inter assay

se vzorky obsahujícími různé koncentrace analytů.

Je samozřejmé, že jak nejistota konkrétního kalibrátoru, tak směrodatná

odchyka inter assay jsou kromě jiného ovlivněny i koncentrací stanovovaného

analytu.

Co z uvedených dat vyplývá? Z uvedených příkladů je zřejmé, že nejistoty

imunochemických stanovení jsou větší než u biochemických i hematologic-

kých metodik. I když to nemusí platit bez výjimky, v zásadě tomu asi skutečně

tak bude. Znamená to však, že výrobky pro imunochemická stanovení jsou

vyráběny na nižší úrovni či aplikovány hůře než jiné metodiky užívané v klinic-

kých laboratořích? Mají pravdu ti, kdo čas od času poukazují na jejich „horší“

výkonnost a kritizují „nečinnost“ výrobců?

Při bližším pohledu je zřejmé, že se zde srovnává nesrovnatelné. Většina imu-

nochemických stanovení pracuje s koncentracemi analytů na úrovni od stovek

nM až po méně než 1 pM. To je o několik řádů méně, než je tomu u jiných

technik užívaných v klinických laboratořích. Jedná se v pravém slova smyslu

o stopovou anylýzu, navíc prováděnou v komplikovaných směsích bez použití

předseparačních či purifi kačních kroků. Tyto směsi navíc obsahují vždy slouče-

niny, které jsou svým charakterem stanovované látce velmi blízké. Stačí uvést

příklad steroidních hormonů, některých thyroidálních hormonů či proteohor-

monů. S podobnými hodnotami nejistot se setká-

váme i v klasické stopové analýze. Uvědomme si, že

kombinovaná rozšířená nejistota (k = 2) pro meto-

diku, kde jsou jak nejistota kalibrátorů tak směro-

datná odchylka inter assay rovny 5 %, což nejsou

samy o sobě hodnoty nijak zarážející, činí 14,1 %.

Znamená to, že skutečný výsledek stanovení se

s pravděpodobností 95 % nachází v intervalu

± 14,1 % od výsledku měření.

Je velmi zajímavé, že velikost nejistoty při stano-

vení TSH analyzátorem Immunlite, jak ji určili Frie-

decký a spol. (3), je prakticky totožná s odhadem

provedeným v Immunotech a.s pro manuální izoto-

povou soupravu. Co se týče stanovení kortisolu

s největší hodnotou nejistoty ze všech příkladů uve-

dených výše, někteří výrobci v návodech k použití

uvádějí, že směrodatná odchylka inter assay může

dosahovat 8 - 10 %. Tyto hodnoty samy o sobě

generují kombinovanou rozšířenou nejistotu (k = 2)

16 – 20 %, a to bez započtení příspěvku nejistoty

kalibrátorů. Je jen těžko představitelné, že by se růz-

ní výrobci dopouštěli při vývoji a výrobě imunoche-

mických testů podobných chyb či opomenutí. Spíše

bude nutné si přiznat, že se v případě imunoche-

mických stanovení jedná o techniku sice nesmírně

citlivou a selektivní, zároveň však ne tak odolnou

vůči řadě obtížně postižitelných vlivů, jak bychom si

přáli. Tuto skutečnost je třeba mít na paměti při

interpretaci výsledků. Jiný nástroj obdobné ceny

a výkonnosti pro většinu „imunochemických“ ana-

lytů k dispozici není.

Na závěr snad jen poznámku o tom, že publiko-

vané hodnoty nejistot je nutno hodnotit kriticky.

Exemplární příklad uvádějí Friedecký a spol.3, kdy

výrobce uvádí nejistotu kalibrátoru menší, než je

nejistota certifi kovaného referenčního materiálu,

na který je uvedený kalibrátor navázán. Jiným

příkladem jsou nejistoty kalibrátorů udávané

renomovaným výrobcem, které jsou pro všechny

koncentrační úrovně rovny neuvěřitelným 1,5 %,

přičemž se jedná o soupravu pro stanovení auto-

protilátek!

Literatura:1. Estimation of uncertainty of measurement in

medical laboratoriem, EDMA Position Paper, Bru-

sel 2006.

2. Suchánek M., Friedecký B., Kratochvíla.M., Budi-

na M., Bartoš V.: Doporučení pro určení odhadů

nejistot výsledků měření/klinických testů v kli-

nických laboratořích, Praha 2005.

3. Friedecký B., Kratochvíla.M., Kubíček Z.: Metrolo-

gie chemických měření v laboratorní medicíně,

ČSKB ČLS JEP & SEKK, Praha 2006.

4. Immunotech a.s., nepublikované výsledky.

PETR ŠMÍDL


Navíc platí, že se jedná o data namě-řená za určitých podmínek výrobcem, což znamená, že při jinak vedených experimentech mohou být získány mírně odlišné výsledky.


Indikátorové proteiny v moči (2)- vyšetřování proteinurieProteinurie a hematurie jsou jedny z nejčastějších patologických nálezů u onemocnění ledvin a močových cest. Testační proužky pro průkaz bílkovi-ny v moči nejsou dostatečně senzitivní a nejsou stejně specifi cké pro větši-nu bílkovin v moči, např. prerenální a tubulární proteinurie jsou testačními proužky jen velmi špatně diagnostikovatelné.

tanovení typu proteinurie pomáhá lékaři loka-

lizovat příčinu proteinurie, ale má i prak-

tický význam pro další péči o nemoc-

ného.

Nefropatie rozpoznaná v časném

stadiu bývá často reverzibilní, terapeu-

ticky ovlivnitelná ve smyslu zastavení

nebo zpomalení progrese.

V počátečních fázích (časná glomerulární dysfunkce,

glomerulární selektivní proteinurie) je důležitá preven-

ce, zejména jedná-li se o tzv. sekundární glomerulopa-

tie (vaskulární při hypertenzi, diabetická). U těžších

glomerulárních poškození (glomerulární neselektivní

nebo smíšená proteinurie) složení proteinurie nejen

kvalitativně, ale i kvantitativně odráží rychlost progre-

se, efekt terapie a spolupráci nemocného. Současná

přítomnost tubulární nebo tubulointersticiální složky

znamená horší prognózu, resp. rychlejší progresi nef-

ropatie. Je-li přítomna tubulární složka proteinurie

u nefrotického syndromu, pak tito pacienti obvykle

hůře reagují na kortikoterapii. U nemocného s čistou

nebo převažující tubulární složkou proteinurie je vhod-

ná úprava nefrotoxické medikace. Nemocní s tubu-

lointersticiální nefropatií by měli být dlouhodobě dis-

penzarizováni (zvýšené riziko karcinomu močového

měchýře a ledvinné pánvičky).

Podle exkrece jednotlivých proteinů do moče lze

s využitím určitých rozhodovacích mezí (viz. tab. 1)

zařadit nález do tzv. konstelačních typů proteinu-

rie. Tyto konstelační typy byly vytvořeny týmem

německých autorů v čele s prof. Hofmannem

a prof. Guderem v 90. letech 20. století, a to srov-

náním nálezů více než 500 pacientů z několika nef-

rologických a urologických center. U většiny

protein koncentrace

mg/g kreat. g/mol kreat.

U-celková proteinurie (TPU) 70 7,9

U-albumin (U-alb) 20 2,26

U-IgG 10 1,13

U-alfa-1-mikroglobulin (U-A1M) 14 1,58

U-transferin 1,2 0,136

U-NAG 5 IU/g 0,56 kU/mol

Tabulka1: Rozhodovací meze

nemocných byla diagnóza stanovena nejen klinicky (na základě klinického

obrazu a laboratorních vyšetření), ale i histopatologicky z renální biopsie

a interpretační nálezy byly ověřeny ve spolupráci s ordinujícími lékaři.

Mezi konstelační typy proteinurie patří renální dysfunkce, glomerulopatie

primární, glomerulopatie sekundární, čistá tubulární dysfunkce, tubulointersti-

ciální postižení, postrenální a prerenální proteinurie.

1. renální dysfunkce: exkrece proteinů (U-alb., U-A1M) zvýšena do dvojnásobku rozhodovací

meze, tj. U-alb. < 40 mg/g kreat. a/nebo U-A1M < 28 mg/g kreat.

výskyt: - metabolická onemocnění

- febrilie

- intenzivní fyzická zátěž

mikroalbuminurie U-alb. 2,28-22,8 g/mol kreat., 20 - 200 mg/g kreat.

- projev glomerulární dysfunkce

výskyt: - časná stadia diabetické nefropatie (st. I - II)

- časná stadia vaskulární (hypertenzní) nefropatie

2. primární glomerulopatie, porucha glomerulární permeability a/nebo struktury stěny glomerulu, větši-

nou v důsledku primárního onemocnění ledvin

glomerulární selektivní proteinurie:TPU 30-3000 mg/d

� U-albumin (makroalbuminurie, tj. > 22,8 g/mol (> 200mg/g kreat.)

� U-transferin > 0,136 g/mol, > 1,2 mg/g kreat.

U- IgG/U-alb. < 0,03

U-A1M/U-alb. < 0,1

výskyt: - většina akutních glomerulonefritid

- IgA nefropatie

- nefrotický syndrom s minimálními změnami (MCN)

- možný projev časných stádií sekundární glomerulopatie (hyper-

tenzní nebo diabetická nefropatie st. 2 - 3, systémový lupus, časná

EPH gestóza)

glomerulární neselektivní proteinurie:TPU 300 - 3 000 mg/d

� U-albumin, transferin, IgG

U- IgG/U-alb. > 0,03

U-A1M/U-alb. < 0,1

možná glomerulární hematurie

výskyt: - akutní glomerulonefritis

- většina tzv. primárních glomerulopatií

(imunopatologického původu)

- rychle progredující glomerulonefritis (RPGN)


- aktivní forma systémového lupusu

- eklampsie

- Goodpasture syndrom

- ortostatická proteinurie

- někdy proteinurie při febriliích

nefrotická proteinurie:TPU > 339 g/mol, > 3 g/g kreat. (u dětí >1 g/m2/d)

� U-albumin, transferin, IgG

U- IgG/U-alb. > 0,03

U-A1M/ U-alb. < 0,1


event. mírně � U- alfa-1-mikroglobulin (jako projev tzv. overfl ow tubulární

proteinurie při vysoké exkreci zejména U-albuminu)

výskyt: - kongenitální nefrotický syndrom

- hemolyticko - uremický syndrom

- pokročilá nefroskleróza

- IgA nefropatie s nefrotickým syndromem v úvodu

- amyloidóza ledvin

- postižení ledvin při light chain deposition disease (LCDD)

4. sekundární glomerulopatie: pokročilé glomerulární postižení sekundární etiologie, v důsledku jiného

primárního onemocnění

glomerulární neselektivní proteinurie, později smíšená glomerulotubulární neselektivní proteinurieTPU 300 – 3 000 mg/d, 250-2 000 mg/g kreat.

�� U-albumin, transferin, IgG, A1M

U- IgG/A < 0,03

U-A1M/A > 0,1


výskyt: - pokročilá diabetická nefropatie (st. IV + V)

- pokročilá hypertenzní nefropatie

- amyloidóza ledvin

- myelomová ledvina

- postižení ledvin při systémových onemocněních pojiva

- rejekce transplantované ledviny

- chronické pyelonefritidy

5. tubulární postižení: čistá tubulární proteinurie

TPU 150 -1 500 mg/d

� A1M, albumin

U-A1M/ U-alb. > 0,1

u akutního poškození �� U-β-NAG

někdy současně glykosurie

výskyt: - tubulotoxické poškození (aminoglykosidy, cefalosporiny, cyklospo-

rin A, methotrexát, cis-platina, rtg kontrastní látky)

- renální tubulární acidóza

- „fyziologický“ nález po transplantaci ledviny s dobře fungujícím

štěpem

- reparační po akutním renálním selhání

- metabolické tubulopatie (hyperkalcémie, hypokalémie)

- jiné tubulopatie (Fanconiho syndrom)

6. tubulointersticiální postižení, tubulointersticiální nefropatie:

TPU 150-1 500 mg/d

�� A1M, � IgG, � albumin

exkrece IgG je vyšší než exkrece albuminu (zánět-

livá produkce v intersticiu)

U-A1M/ U-alb. > 0,1

může být hematurie renálního tubulointersticiál-

ního původu

výskyt: - analgetická nefropatie

- akutní, chronická pyelonefritis

- refl uxní uropatie

- některé monoklonální gamapatie

(myelom, LCDD)

7. postrenální proteinurie: TPU obvykle do 0,5 g/d

alfa-2-makroglobulin, IgG, mírně albumin

možná postrenální hematurie

výskyt: - zánět vývodných močových cest

- urolithiáza

- tbc vývodných močových cest

- prostatitis, hypertrofi e prostaty

- předávkování antikoagulanciemi

- poranění sliznice močových cest při

zavedení permanentní močové cévky

8. prerenální proteinurie: TPU obvykle 150-1 500 mg/d, ale i vyšší (kvanti-

tativní stanovení celkové proteinurie obvykle

podhodnocuje)

možný proteinový gap – při TPU > 300 mg/l:

(U-alb. + U-A1M + U-IgG)/TPU < 0,6

U-alb./TPU < 0,3

výskyt: - monoklonální gamapatie (volné lehké

řetězce)

- rhabdomyolýza (myoglobin)

- hemolytické anémie toxické, alergické,

autoimunitního původu (hemoglobin)

- febrilní stavy, katabolismus (degradač-

ní tkáňové produkty)

Rozsah proteinurie má určitý prognostický

význam, čím déle proteinurie trvá a čím vyšší je, tím

rychlejší a závažnější bývá progrese nefropatie. Kli-

nický lékař obvykle hodnotí proteinurii jako malou

(do 2 g/d), střední (2-5 g/d) a velkou (nad 5 g/d), nic-

méně jako významná je však považovaná každá

opakovaná proteinurie vyšší než 500 mg/d. Pod-

le exkrece specifi ckých proteinů, resp. albuminu jako

glomerulárního markeru a A1M jako tubulárního

markeru lze rozlišit významnost glomerulární, resp.

tubulární složky a stupeň postižení (viz. tab. 2).

Co znamená analýza indikátorových proteinů v moči?Na základě kvalitativní analýzy močovými

proužky (leukocyty, bílkovina, hemoglobin)

a kvantitativního měření několika analytů (cel-

ková proteinurie, kreatinin, alfa-1-mikroglobu-

lin a albumin v moči, event. transferin a alfa-2-

makroglobulin) lze rozlišit prerenální, renální

a postrenální etiologii proteinurie a hematurie.

Diagnostický algoritmus závisí na tom, za jakým

účelem je vyšetření požadováno, zda se jedná

o vyloučení/průkaz klinicky významné renální

dysfunkce, nebo sledování pacienta s již známým

onemocněním ledvin (viz. obr. 1):

1) Při screeningu, jehož cílem je vyloučit renál-

ní dysfunkci, je doporučeno stanovit albumin

a alfa-1-mikrogobulin společně s celkovou pro-

teinurií. Poměr albumin/ TPU může ukázat na pří-

tomnost prerenální proteinurie. Průkaz leukocytární

esterázy a hemoglobinu pseudoperoxidázovou reak-

cí jsou citlivé ukazatele zánětu a hematurie. Jsou-li

výsledky všech těchto testů v referenčním rozmezí,

resp. negativní, může být renální dysfunkce vylouče-

na s mnohem vyšší pravděpodobností (73%) než na

základě testačních proužků a vyšetření močového

sedimentu (60%) (Hofmann, Regenbogen, Guder et

al., 1994). Je-li současně ještě vyšetřen močový sedi-

ment mikroskopicky, pak pravděpodobnost vzroste

na 80%. Pozitivní výsledek proteinurie, hematurie

nebo leukocyturie by měl být doplněn vyšetřením

specifi ckých markerů.

Leukocyturie ukazuje na možnou infekci (zejmé-

na ve spojení s nálezem mírné proteinurie, TPU <

150 mg/g kreat, U-alb. < 100 mg/g kreat., U-A1M <

14 mg/g kreat.), která může být renálního, ale

i postrenálního původu. Leukocyturie s výraznou

glomerulární nebo tubulární proteinurií ukazuje

obvykle spíše na infekci renálního původu. Leuko-

cyturie může být i známkou kontaminace moče

nesprávným odběrem (vaginální sekret) a měla by

být doplněna mikroskopickým vyšetřením moče

a mikrobiologickým kultivačním vyšetřením. Mik-

roskopická hematurie by měla být doplněna kvan-

titativním stanovením albuminu v moči. V případě

jeho relativně nízké koncentrace (pod 100 mg/l) je

metodou volby mikroskopické vyšetření erytrocytů

ve fázovém kontrastu. Je-li koncentrace albuminu

v moči vyšší než 100 mg/l, pak dodatečné stanove-

ní dalších močových proteinů, alfa-2-makroglobu-

linu, IgG a alfa-1-mikroglobulinu, může pomoci při

posouzení původu hematurie.

2) Pro časnou detekci, zejména u nemocných se

systémovými nebo metabolickými onemocněními

(hypertenze, diabetes), u nemocných se známým

onemocněním ledvin nebo u nemocných s trans-

plantovanou ledvinou je vhodné využít rozšířeného

A1M albumin významnost

(mg/g kreat.) (g/mol kreat.) (mg/g kreat.) (g/mol kreat.)

14,1-20 1,59-2,26 20-30 2,26-3,39 hraniční

21-50 2,37-5,65 31-100 3,40-11,3 mírného stupně

51-100 5,76-11,3 101-1 000 11,4-113,0 významného stupně

> 100 >11,3 1 001-3 000 113,1-339,0 výrazného stupně

> 3 000 > 339,0 nefrotická proteinurie

Tabulka 2

vyšetření, které zahrnuje jednotlivé indikátorové

proteiny, zejména albumin jako marker glomeru-

lární dysfunkce (nebo generalizované dysfunkce

endotelu), IgG jako ukazatele těžšího glomerulár-

ního poškození a ev. zánětu intersticia ledviny

a alfa-1-mikroglobulin jako tubulární marker

(exkrece jednotlivých proteinů je vyjadřována ve

vztahu k močovému kreatininu), případně transfe-

rin jako další ukazatel glomerulární dysfunkce.

Současně je posuzován poměr sumární exkrece jednotlivých indikátorových pro-

teinů k celkové proteinurii. Tvoří-li součet základních indikátorových proteinů

(albumin, alfa-1-mikroglobulin a IgG) méně než 60% celkové proteinurie nebo

albuminurie méně než 30% celkové proteinurie, hovoříme o tzv. proteinovém

gapu, který ukazuje s velkou pravděpodobností na prerenální proteinurii (tkáňo-

vé degradační produkty při febrilních stavech nebo katabolismu, myoglobin při

rhabdomyolýze nebo monoklonální lehké řetězce imunoglobulinů (FLC) u někte-

rých monoklonálních gamapatií) – viz. Diagnostický algoritmus.

Obr. 2 ukazuje výsledky proteinové analýzy u defi novaných skupin renálních

onemocnění.

Horní polovina grafu ukazuje vztah exkrece IgG (cut-off 10 mg/g) k albumi-

nu (cut-off 20 mg/g kreat.). Jak je vidět, u histologicky verifi kovaných primárních

glomerulopatií je exkrece obou proteinů zvýšená, avšak albuminu výrazně více.

S rostoucí exkrecí albuminu stoupá i exkrece IgG. U tubulointersticiálních nefro-

patií je exkrece albuminu zvýšena jen mírně, resp. méně než exkrece IgG (inters-

ticiální syntéza IgG), tento rozdíl je vidět ještě více u A1M (dolní polovina grafu).

Stanovení A1M pomůže odlišit glomerulární a tubulointersticiální původ IgG.

Poměr IgG/Alb. může odlišit glomerulární neselektivní (IgG/Alb. > 0,03) od selek-

tivní proteinurie (IgG/Alb. < 0,03).

Spodní polovina grafu ukazuje exkreci A1M (cut-off 14 mg/g) a albuminu

(cut-off 20 mg/g kreat.). U primárních glomerulopatií je zřetelné, že exkrece

tubulárního markeru se zvyšuje jen velmi pomalu nad horní hranici fyziologic-

Obrázek 1: Diagnostický algoritmus (Ivandic M., Ogurol Y., Hofmann W., Guder W. G.:From a Urinanalysis Stra-

tegy to an Evaluated Urine Protein Expert Systém, Methods of Information

in Medicine 2000, 39: 93-98)


ké exkrece, resp. až v pokročilejších fázích s postupnou progresí glomerulárního

onemocnění jako projev sekundární tubulární dysfunkce. Při vysoké exkreci

albuminu (U-alb > 3 000 mg/g kreat.) je v moči přítomno vždy zvýšené množství

A1M jako projev tzv. overload funkční tubulární proteinurie. Výpočet tzv. kori-

govaného A1M pomáhá rozlišit mezi tubulární proteinurií v důsledku sekun-

dárního postižení intersticia u primární glomerulopatie (A1M corr.> 14 mg/g

kreat) a tubulární proteinurií způsobenou překročením resorpční kapacity jinak

funkční tubulární buňky (A1M corr.< 14 mg/g kreat).

A1M corr. = A1M – 4,7 x e 0,00022 x Alb

Tubulární intersticiální nefropatie (TIN) ukazuje zcela jiné rozložení exkrecí A1M

a albuminu. Ačkoli je přítomna mírná albuminurie, dominujícím proteinem je

A1M. Tzv. sekundární glomerulopatie (např. při pokročilé diabetické nebo vaskulár-

ní nefropatii) představuje smíšený typ proteinurie se současným glomerulárním

Obr. 2: Poměrné exkrece IgG/Alb. a A1M Alb. u histologicky ověřených glomerulopatií a tubu-lintersticiálních nefropatií, cut-off: Alb: 20 mg/g, A1M: 14 mg/g, IgG: 10 mg/g (Guder, Hofmann, 1992)

Obr. 3: Rozlišení akutní tubulotoxické a chronické TIN: Současná exkrece A1M > 40 mg/g + NAG > 20 U/l (4-násobek

URL) ukazuje na akutní tubulotoxické poškození, nižší exkrece (< 20 U/l)

na chronické poškození (Guder, Ivandic, Hofmann: Clin Chem Lab Med,

1998, 36 (12): 935-939)

i tubulointersticiálním postižením a objevuje se

obvykle až při vyšší proteinurii. U výrazné smíšené

proteinurie však nelze často spolehlivě rozlišit, zda se

jedná o tzv. primární nebo sekundární glomerulopa-

tii. Poměr A1M/Alb. koreluje s progresí nefropa-

tie, resp. vzestup ukazuje na sekundární tubu-

lointersticiální změny (histologicky odpovídající

fi bróze intersticia).

Pro rozlišení akutního (tubulotoxického) a chro-

nického tubulárního poškození němečtí autoři

doporučují využít stanovení koncentrace katalytické

aktivity N-acetyl- β, D-glukosaminidázy (β-NAG),

která je u akutního poškození výrazněji zvýšená (viz.

obr. 3).

V současnosti však stanovení β-NAG není součás-

tí běžného portfolia největších výrobců diagnostik

na trhu v ČR.

Stanovení v praxi:Na OKB Fakultní Thomayerovy nemocnice používá-

me systém německých autorů Hofmann – Guder –

Ivandic ve vlastní modifi kaci. Vyšetřujeme následující

spektrum analytů: celkovou proteinurii, albumin, kre-

atinin v moči, IgG, A1M a transferin. Při pozitivním

průkazu hematurie doplňujeme o vyšetření alfa-2-

makroglobulinu. Stanovení transferinu pomáhá při

diferenciaci časných glomerulárních lézí.

Jako vyšetřovaný materiál se doporučuje vzorek

druhé ranní moče. Je provedeno orientační vyšet-

ření močovými proužky (Hexaphan), proteinová

analýza se provádí po centrifugaci (800 g, 10 min).

Vzorky moče jsou stabilní při + 4 °C 7-10 dnů, není

doporučeno je uchovávat po delší dobu ve

zmraženém stavu (dekompozicí IgG pokles hodnot

až -30%, oproti tomu hodnoty albuminu a A1M

uchovávané při + 4 ˚C a - 20˚C se významně neliší).

Lékař dostává výsledek ve formě pacientsky orie-

ntovaného interpretačního nálezu. Jeho součástí

jsou číselné údaje (koncentrace jednotlivých analytů

v mg/l a v mg/g kreat.), poměry (A1M/Alb., IgG/Alb.,

A1M/Alb. event. A2M/Alb.) a slovní komentář. Pro

jeho sestavení je třeba spolupráce s ordinujícím léka-

řem, požadujeme klinické údaje o nemocném (pří-

tomnost diabetu, hypertenze, jiných onemocnění,

event. předchozí hodnotu glomerulární fi ltrace

a kvantitativní proteinurie, anamnestickou přítom-

nost hematurie apod.). Pro zařazení do konstalač-

ních typů jsou využívány grafy (viz. obr. 2), slouží

však jen pro interní potřeby.

Na několika příkladech ukazujeme možnosti využi-

tí stanovení indikátorových proteinů.

Časná detekce renální dysfunkceTradiční testy na proteinurii (testační proužky

a celková proteinurie) jsou málo senzitivní pro

detekci časných stadií progresivních renálních one-

mocnění (Hofmann, Guder et al, 1994: u 49% paci-

entů ze 150 hospitalizovaných pro renální one-


mocnění nebyla renální dysfunkce detekovaná

konvenčními (výše uvedenými) metodikami).

V OKB FTN vyšetřujeme močové indikátorové

proteiny od r. 2005, v období 6/2006 – 7/2007 bylo

vyšetřeno 152 nemocných, z nich 70 z nefrologické

ambulance a 16 z pediatrické kliniky, z toho 20%

pacientů bylo hodnoceno ve sledovaném období

opakovaně (2 - 4x). Pokud bychom hodnotili nález

pouze podle velikosti proteinurie, pak 33% pacien-

tů mělo tzv. „fyziologickou proteinurii“, tj. do 150

mg/d (viz. graf 1). Při hodnocení pomocí indikáto-

rových proteinů však jen 1/3 z těchto proteinurií

byla fyziologická i svým složením, resp. s fyziolo-

gickou exkrecí indikátorových proteinů (viz. graf 2).

S využitím indikátorových proteinů tedy bylo dete-

kováno o 21% více patologických nálezů.

Využití při diagnostice a sledování proteinurie:Př. 1: tubulointersticiální postižení – viz. tab. 3 a obr. 4

J.S., 78 letý muž, sledován v nefrologické ambulanci od

5/2005. Při prvním vyšetření v nefrologické ambulanci

renální insufi cience s S-kreatininem 241 μmol/l, v moči

bílkovina na +/++, proteinurie 1,5g/d, metabolická aci-

dóza. Při vyšetření indikátorových močových bílkovin

bylo zjištěno výrazné tubulointesticiální postižení

(vysoká exkrece A1M, mírně IgG, hraničně albumin),

současně však byly prokázány v moči a následně

i v séru monoklonální lehké řetězce (FLC-K) s patolo-

gickým poměrem K/L. Nemocný je veden pod pracovní

diagnózou MGUS s produkcí FLC-K s renálním

postižením a tubulární toxicitou FLC, jednou z mož-

ných diagnóz je LCDD. V průběhu 2 let byl vyšetřen

celkem 4x, zpočátku bez terapie, poté pro progresi

hematologického i nefrologického nálezu (vzestup

koncentrace FLC se zhoršením poměru K/L) byla nasa-

zena terapie (11/06). V jejím důsledku v nefrologickém

nálezu došlo zpočátku ke zpomalení progrese. Při

poslední kontrole je vidět ještě zlepšení v tubulární

složce, v souvislosti s tím i pokles exkrece FLC, dochází

však k vzestupu celkové proteinurie, albuminu a IgG,

které mohou souviset se zhoršením sekundární glo-

merulární dysfunkce.

datum S-FLC-K (mg/l) S-FLC-L (mg/l) K/L

28. 5. 05 235,4 20,3 11,59

5. 10. 06 944,0 24,5 38,53

30. 10. 06 636,0 19,2 33,13

19. 4. 07 833,0 17,7 47,06

datum U-FLC-K mg/g (mg/l) U-FLC-L mg/g (mg/l) K/L

28.5.05 122,8 (333,9) 81,8 (31,4) 10,62

5.10.06 14 053,9 (3 335,0) 304,7 (72,3) 46,13

30.10.06 5 442,5 (1 476,0) 95,1 (25,8) 57,21

19.4.07 337,1 (1 517,5) 98,1 (49,9) 30,41

datum U-kr.

mmol/l

TPU

mg/lmg/g

Alb.

mg/lg/mol mg/g

A1M

mg/lmg/g

IgG

mg/lmg/g

28. 5. 05 2,4 0,36 1,33 34 14,17 125,4 146 538,3 22,9 84,4

5. 10. 06 2,1 0,21 0,88 30 14,29 126,4 146 615,3 5,5 23,2

30. 10. 06 2,4 0,22 0,81 34 14,17 125,4 163 601,0 4,7 17,3

19. 4. 07 4,5 0,61 1,20 67 15,95 131,8 237 466,1 11,4 22,4

Tabulka 3: Indikátorové proteiny

Moč:

Sérum:

V grafu jsou zaneseny poměrné exkrece Alb., A1M a IgG z prvního (1) a posled-

ního vyšetření (viz. obr. 4).

V tomto případě byla diagnóza stanovena již ve stadiu pokročilé nefropatie

(pacient byl několik let dispenzarizován pod nesprávnou diagnózou), z pohledu

nefrologa byl vyšetřovaný soubor vyšetření přínosný pro stanovení správné dia-

gnózy, pro sledování průběhu onemocnění i efektu terapie.

Př. 2: smíšená proteinurie (1) – viz. tab. 4 a obr. 5

J. P., 62 letý muž, diabetes mellitus 1. typu na inzulinu (20 let) s orgánovými

komplikacemi, nefrologicky je sledován od 5/2006. Při prvním vyšetření nedo-

statečně kompenzovaný diabetes, chronická renální insufi cience s S-kreatini-

nem 134 μmol/l, proteinurie 5,7 g/d a nedostatečně korigovaná hypertenze.

Vyšetření indikátorových proteinů ukázalo pokročilou nefropatii smíšeného

typu charakteru sekundární glomerulopatie, která může odpovídat diabetické

nefropatii IV. st. (vysoká celková proteinurie až nefrotického rozsahu, velmi

vysoká exkrece albuminu, IgG, transferinu, A1M) společně s mikroskopickou

Graf 1: proteinurie podle velikosti (FTN 6/06-5/07, n=152) Graf 2: proteinurie podle typu nálezu (FTN, 6/06-5/07, n=152)


hematurií glomerulární etiologie. Kontrolní vyšetření bylo provedeno s odstu-

pem cca 12 měsíců po úpravě terapie, kterou pacient dodržoval. Je patrné zře-

telné zlepšení ve všech složkách (celková proteinurie, glomerulární i tubulární

složka, zmenšení intenzity hematurie).

Tehdy měl nemocný vysokou proteinurii (6,55 g/l),

avšak jen s mírně zvýšenou exkrecí albuminu, hra-

ničně transferinu a exkrece IgG nepřevyšovala fyzi-

datum

sérum

S-FLC-K

(mg/l)

S-FLC-L

(mg/l)

K/L

19. 1. 07 967,0 8,6 112,42

26. 4. 07 1135,0 5,1 221,68

Sérum:

datum

moč

FLC-K

mg/g

(mg/l)

FLC-L

mg/g

(mg/l)

K/L

19. 1. 07 8 363,9

(15 500,0)

9,5

(9,1)

711,9

26. 4. 07 6 715,3

(6 450,0)

5,1 221,68

Moč:

Obrázek 4: Tubulointersticiální postižení

Obrázek 5: Smíšená proteinurie (1)

Nefrolog hodnotí u tohoto nemocného spektrum

vyšetření jako přínosné pro stanovení pokročilosti

susp. diabetické nefropatie, ale zejména pro sledo-

vání průběhu onemocnění a reakce na terapii.

Př. 3: smíšená proteinurie (2)– viz. tab. 5 a obr. 6

Tento příklad ukazuje nálezy u pacienta se špatnou

spoluprácí. J.S., 61 letý muž, diabetes mellitus (16 let)

s orgánovými komplikacemi (chronická renální insufi -

cience, proteinurie, těžká hypertenze). Nefrologicky je

sledován od 9/2006. Při prvním vyšetření renální insu-

fi cience s S-kreatininem 146 μmol/l, hypertenze, pro-

teinurie 3 g/d, nedostatečně kompenzovaný diabetes.

Vyšetření indikátorových proteinů ukázalo podobný

nález jako u předchozího pacienta, jen bez mikrosko-

pické hematurie (1). Pacient však nedodržoval doporu-

čená terapeutická opatření ani medikaci, při kontrole

po 4 měsících byla zjištěna zřetelná progrese nálezu –

zhoršení celkové proteinurie na 5,6 g/d, vzestup mar-

kerů v obou složkách, nově mikroskopická hematurie

glomerulárního původu (2).

V tomto případě soubor vyšetření pomohl při stano-

vení pokročilosti nefropatie, ale zejména v monitoro-

vání průběhu onemocnění a spolupráce pacienta.

Př. 4: proteinový gap – viz. tab. 6

M.P., 49 letý muž, odeslán k nefrologickému vyšetření

pro nález proteinurie při screeningovém vyšetření

u praktického lékaře. Dodatečně zjištěno, že orientač-

ně pozitivní nález bílkoviny v moči byl pozorován

opakovaně v průběhu předchozích 2 let, avšak dále

nevyšetřován. Při prvním vyšetření v nefrologické

ambulanci v 1/2007 (1) na základě nálezu v elektro-

foréze séra a moče bylo vysloveno naléhavé podezře-

ní na monoklonální gamapatii s produkcí jen mono-

klonálních lehkých řetězců (FLC-K) typu myelomu

s produkcí jen lehkých řetězců nebo LCDD-K, viz.

vyšetření FLC v séru a moči:


datum U-kea.

mmol/l

TPU

mg/l mg/g

Alb.

mg/l mg/g

g/mol

A1M

mg/g

(mg/l)

TRU

mg/g

(mg/l)

IgG

mg/g

(mg/l)

ostatní

24. 11. 06 6,4 1,62 2,24 1158 1601,1

(180,9)

44,5

(32,2)

125,8

(91,0)

110,1

(79,6)

B1

GTNS, G>T

26. 3. 07 5,3 2,42 4,04

(+80%)

1598 2662,8

(301,5)

(+66%)

75,1

(45,0)

(+69%)

223,7

(134,0)

(+78%)

290,5

(130,4)

(+164%)

B3, G3, K2,

mHU glom.

G: +75%

T: +60%,

�HU

Tabulka 5: Smíšená proteinurie (2)

datum U-kea.

mmol/l

TPU

mg/l mg/g

Alb.

mg/l mg/g

g/mol

A1M

mg/g

(mg/l)

TRU

mg/g

(mg/l)

IgG

mg/g

(mg/l)

ostatní

4. 5. 06 6,9 4,82 6,18 3650 4680,8

(528,9)

166,7

(130.0)

313,6

(244,5)

430,9

(336,0)

B3,G3,K1,

mHU glom.

25. 4. 07 6,4 1,18 1,64

(-73%)

762 1053,5

(119,5)

(-77%)

71,5

(53,40)

(-57%)

72,9

(53,7)

(-77%)

116,4

(82,4)

(-73%)

B3,G1,K1,

mHU glom.

G:-75%

T:-50%,

�HU

Tabulka 4: Smíšená proteinurie (1)

datum U-kr.

mmol/l

TPU

mg/l g/g

Alb.

mg/l mg/g

g/mol

A1M

mg/g

(mg/l)

TRU

mg/g

(mg/l)

IgG

mg/g

(mg/l)

ostatní

19.1.07 16,4 6,55 3,55 68 36,7

(4,16)

35,4

(65,7)

4,9

(9,1)

n B1

tubulární až tubuloglomerulární protei-

nurie, susp. paraprotein!!

26.4.07 8,5 3,16 3,28 31 32,2 33,4 3,1

(2,9)

n B1

v S hranič. progrese, moč bez progrese

Tabulka 6: Proteinový gap

ologické hodnoty. Měl normální glomerulární fi l-

traci a hodnotu S-kreatininu. Součet exkrecí

hlavních indikátorových proteinů (A, A1M, IgG)

představoval jen 2,2 % (0,02) z celkové proteinurie,

což ukazuje na tzv. proteinový gap ((A+A1M+IgG)/

TPU < 0,6). Proteinurie byla tvořena zejména

monoklonálními FLC-K.

Dalšími hematologickými vyšetřeními byla stano-

vena diagnóza mnohočetného myelomu s produkcí

jen FLC-K, klinické stadium Ia, zatím bez terapie.

Exkrece indikátorových proteinů ukazuje na mírné

tubulární postižení, které může být jen funkčního

charakteru tzv. overload proteinurie při překročení

maximální resorpční kapacity. Při kontrole po 3 měsí-

cích nález v séru vykazuje hraniční progresi, v moči je

zatím bez významných změn.

(Poděkování za spolupráci MUDr. L. Hornové, MUDr.

L. Fantové, nefrologická ambulance Centromed, a.s.)

Literatura u autora.

MUDR. JANA GRANÁTOVÁ

OKB, FAKULTNÍ THOMAYEROVA NEMOCNICE

VÍDEŇSKÁ 800, 140 59 PRAHA 4


Obrázek 6: Smíšená proteinurie (2)


Masarykova městská nemocnice v Jilemnici má novou laboratoř

loňském roce se vedení nemocnice v Jilemnici rozhodlo vypsat

výběrové řízení na vybudování konsolidované laboratoře v prosto-

rách nové nemocniční budovy. Důvodů bylo několik. Jedním z nich byla

konsolidace tří stávajících laboratoří (hematologické laboratoře na HTO,

imunoanalytické laboratoře a oddělení klinické biochemie), které sídlily

většinou v naprosto nevyhovujících prostorách, do jedné velké laboratoře se

společným laboratorním informačním systémem a jednotným příjmem vzor-

ků. Dalším důvodem byla snaha o co nejekonomičtější provoz laboratoří.

Výběrové řízení vyhrála fi rma Beckman Coulter. Na přelomu března a dubna

letošního roku se začaly instalovat nové přístroje a zaškolovat personál. Hlavní

částí projektu je tzv. „core laboratoř“, kde probíhá většina rutinních analýz. Ta

je vybavena biochemickým analyzátorem UniCel DxC 600, dvěma imunoche-

mickými analyzátory Access 2 a hematologickým analyzátorem HmX, vše od

fi rmy Beckman Coulter. Koagulometr ACL Elite TOP dodala fi rma Comesa. Na

hlavní laboratoř, kromě příjmu s centrifugovnou vybavenou vedle starší centri-

fugy Jouan ještě novou centrifugou Allegra X12R, navazuje močová laboratoř

a laboratoř manuálních a izotopových metod. Zde se používá kromě gamačíta-

če i elisa automat DTX. Součástí laboratoře je také sklad krve. Instalace i škole-

ní personálu probíhaly za současného provozu stávajících laboratoří.

K vlastnímu přesunu příjmu vzorků a personálu došlo 27. 4. 2007. Od

tohoto data jsou již všechny vzorky zpracovány v nové laboratoři. Na příjmu

jsou zkumavky označeny čárovým kódem a naprostá většina analýz se pro-

vádí přímo z primárních zkumavek bez nutnosti tvorby alikvotů. Tím se jed-

nak snížila možnost záměny vzorků a také se zkrátil čas od příjmu vzorku do

vydání výsledku. Laboratoř, která kromě vzorků

z nemocnice zpracovává velké množství vzorků

ze svozů ze širokého okolí, je nyní připravena i na

případný nárůst počtu analýz. Většina výsledků je

k dispozici v den příjmu vzorku, a to i o víkendu.

Ofi ciální slavnostní otevření laboratoře uspořá-

dalo vedení nemocnice 31.5.2007 za účasti starosty

města a regionálního tisku. Při této příležitosti byla

rovněž laboratoř představena lékařům z nemocnice

i z okolních ordinací. Řada návštěvníků využila pří-

ležitosti k diskuzi a zodpovězení dotazů přímo

v laboratoři nebo v rámci občerstvení, které nemoc-

nice připravila v prostorách transfuzní stanice. Při

této příležitost bylo možno si prohlédnout i rekon-

struované porodnické oddělení nemocnice.

Celé vybudování laboratoře proběhlo plynule

a bez vážnějších komplikací a laboratoř je nyní při-

pravena plnit rychle a kvalitně požadavky lékařů.

RNDR. BOHUŠKA ČERNÁ

KONSOLIDOVANÁ LABORATOŘ,

MASARYKOVA MĚSTSKÁ NEMOCNICE

JILEMNICE

METYŠOVA 465, 514 01 JILEMNICE


TEREZA TIETZE



Euromedlab 2007 17. Evropský kongres klinické biochemie a laboratorní medicíny, známý pod názvem Euromedlab, se letos konal od 3.6. do 7.6. v Amsterdamu. Společná česko-slovenská výprava fi rmy Beckman Coulter měla 21 členů, z nichž většinu tvořili uživatelé systémů této fi rmy.

kterých kamery umístěné uvnitř systému ukazovaly detailně pohyb vzorku

linkou. Poprvé zde byl ofi cálně představen kombinovaný systém UniCel DxC

880i s modulem CTA, umožňujícím propichování primárních zkumavek (ten-

to systém mohli naši zákazníci již vidět v „předpremiéře“ na Imunoanalytic-

kých dnech v Českých Budějovicích).

Kromě novinek z oblasti hematologie a průtokové cytometrie zde premié-

ru zažil rovněž imunochemický analyzátor DxI 600, který v blízké době bude

možno vidět i v České republice.

Komu mezi prohlídkou jednotlivých stánků a přednáškami zbylo trochu

času, pro toho byla připravena a denně obměňována posterová sekce, číta-

jící kolem 300 posterů rozdělených do ucelených tématických bloků.

Kromě toho byl pro účastníky připraven bohatý doprovodný program.

Například v pondělí večer se všichni účastníci mohli zúčastnit koncertu váž-

né hudby. Pro naše zákazníky byla navíc připravena okružní jízda městem,

prohlídka centra města z lodi a večeře v plovoucí čínské restauraci Sea Pala-

ce. Volných chvil bylo možno využít k návštěvě některého z věhlasných

Amsterodamských muzeí, květinových trhů nebo k objevování specifi cké

noční atmosféry města.

Nezbývá než doufat, že příští Euromedlab, který se bude konat v roce 2009

v Innsbrucku, bude stejně úspěšný a nabitý novinkami jako ten letošní.

TEREZA TIETZE


bytování bylo zajištěno v hotelu IBIS

nedaleko centra města.

Vlastní konference probíhala v kon-

ferenčním centru RAI v jižní části měs-

ta. Po zahajovacím ceremoniálu v nedě-

li 3. 6. odpoledne následoval večírek

s občerstvením, na kterém bylo možno

ochutnat řadu místních specialit, různé druhy ryb

a sýrů a například i ústřice.

Maratón přednášek se naplno rozběhl 4. 6. Ve

více než deseti konferenčních místnostech probí-

hala řada přednášek, diskuzí i fi remních worksho-

pů. Na workshopech fi rmy Beckman Coulter se

hovořilo o konsolidaci laboratoří (kombinovaný

systém UniCel DxC 880i, preanalytická linka

Automate 800) a novinkách v menu testů (Inhi-

bin A, markery preeklampsie).

Ve výstavních prostorách představovala řada

fi rem (z nich některé u nás zcela neznámé) své

výrobky. Hlavním tématem většiny expozic byly

kombinované laboratorní systémy a možnosti

automatizace. Stánek fi rmy Beckman Coulter

patřil k největším. Na stánku probíhaly pravidelné

prezentace preanalytické linky Automate 800, při


Víkend plný zábavy a her

Ve dnech 2. a 3. června 2007 uspořádala v Příbrami Oblastní nemocnice Příbram, a.s. a Divadlo A. Dvořáka k Mezinárodnímu dni

dětí dvoudenní zábavný program.

rojekt byl tentokrát zaměřen nejen na děti, které se v příbram-

ské nemocnici léčí, nebo rodiny zaměstnanců nemocnice, ale

také na všechny ostatní děti z Příbrami a jejího okolí.

Díky sponzorům, mezi nimiž byla i společnost Immunotech, byl

pro děti připraven program na celý víkend, jehož součástí byly například

pouťové atrakce v čele s kolotoči, ukázky z práce záchranářů, hasičů, policis-

tů nebo kynologů, vystoupení mažoretek, hraná pohádka, živá hudba, spous-

ta her a soutěží o ceny, k vidění byl i tank.

Možná proto, že se podobný program pro děti konal v Příbrami po delší době,

byla jeho návštěvnost více než vysoká.

A tak se v Příbrami dva dny hrálo, soutěžilo, vozilo na ponících, kolotoči

i v tanku, poslouchala se živá muzika, mlsala se

zmrzlina, cukrová vata a další dobroty.

Děti byly nadšené, a o to nám všem šlo.

Bez sponzorů by se ale tato akce uspořádat

nemohla, proto společnosti Immunotech patří náš

velký dík.

MONIKA BOUŠKOVÁ

OBLASTNÍ NEMOCNICE PŘÍBRAM

U NEMOCNICE 84, 261 26 PŘÍBRAM



ádi Vás přivítáme na našem firem-

ním stánku a na firemním worksho-

pu Beckman Coulter. V rámci

workshopu uslyšíte firemní i uživa-

telské prezentace na tato témata:

� UniCel Concept – biochemické a imunoche-

mické analyzátory

� Kombinované systémy Beckman Coulter

� Automatizace preanalytické fáze – AutoMa-

te 800

� Konsolidace laboratorního provozu

V prezentaci UniCel Concept Vám budou před-

staveny biochemické systémy DxC 800 a DxC

600 a imunochemické systémy DxI 800 a nový

analyzátor DxI 600. Dozvíte se obecné informace

o technických parametrech, ale především zku-

šenosti stávajících uživatelů.

Čas vymezený pro kombinované systémy

budeme věnovat především novému modulu

CTA (Closed Tube Aliquoter). Tento

modul slouží jako spojovací

článek mezi biochemickým

a imunochemickým analy-

zátorem. Koncepce kombi-

novaných systémů Bec-

kman Coulter vychází

především z požadavků

laboratoří na maximální

možnou variabilitu těch-

to systémů. Díky CTA

modulu je tudíž možné

Vaše stávající „stand

alone“ analyzátory pro-

pojit v libovolné kombi-

naci imunochemie-biochemie (UniCel DxI 600/800 - DxC 600/800). Pouze

takové řešení kombinovaného systému, které vychází z Vašich konkrétních

objemů a spektra vyšetření, vede k jeho optimálnímu využití.

Úzkým místem laboratorního provozu je ve většině případů preanalytická

fáze. Beckman Coulter nabízí řešení. V této přednášce Vám představíme

plně automatizovanou preanalytickou linku AutoMate 800. Ukážeme Vám

výhody, které automatizace přinese do Vaší laboratoře.

V posledním příspěvku se budeme věnovat konsolidaci laboratorního

provozu. Zaměříme se především na zvýšení bezpečnosti práce, snížení

doby TAT a optimalizaci celého procesu v laboratoři. Zmíníme také výhody

používání software Remisol 2000.

LUKÁŠ PALIVEC


Ve dnech 23. - 25. 9. 2007 se uskuteční VIII. Celostátní sjezd České společnosti klinické biochemie.

Pozvánka na akci


ZamyšleníPokusme se na chvíli odpoutat od každodenního

shonu a pocitu, co všechno právě teď neodkladně

musíme…..

Fotografi e, které provázejí toto číslo našeho

časopisu, nás zavedou alespoň na chvíli někam ji-

nam, do zadumané krajiny České Vysočiny.

Lavička je v krajině zasazena tak, jako by jinak ani

nemohla být. Je to místo vybízející k odpočinku po

dlouhé cestě, místo přátelského setkání, místo

k důvěrnému rozhovoru, k rozjímání a usebrání.

Tak se dívá na svět a tak pro nás tato místa Vyso-

činy citlivým způsobem zachytila paní Daniela

Švandová.

Rešením s UniCel AutoMate 800 zvýšíte efektivitu Vaší laborator e

www.beckmancoulter.cz

AUTOMATIZACE PREANALYTICKÉ FÁZE DO VAŠÍ LABORATOŘESystém UniCel AutoMate 800 je plně automatická linka zahrnující všechny kroky preanalytické fáze v laboratoři, jako jsou odstředění vzorku, alikvotace do sekundárních zkumavek a třídění zkumavek do sektorů a stojánků podle následného použití pro biochemická, imuno-chemická a jiná vyšetření.

VÝHODY AUTOMATE 800 � zpracování zkumavek různých velikostí a průměrů� vstupní a výstupní stojánky se vzorky se vkládají i vyjímají

za chodu linky� vyhrazená pozice pro statimové vzorky� inteligentní alikvotace zajišťující optimální přípravu alikvotů � jednoduché nastavení režimu zpracování vzorku� minimální nároky na údržbu

PRO VÍCE INFORMACÍ KONTAKTUJTE PRODUKTOVÉ SPECIALISTY:Ing. Miroslav Bischof, e-mail: [email protected], tel.: 605 200 149Ing. Lukáš Palivec, e-mail: [email protected], tel.: 603 538 361či navštivte stránky www.beckmancoulter.com/automate800_eu

6. - 7. 9. 2007 VIII. Slovensko-české dni

laboratórnej hematológie

a transfuziológie

Dunajská Streda

13. - 14. 9. 2007 XVIII. Izakovičov memoriál

Košice

15. - 19.9.2007 35th Congress of the Interna-

tional Society for Oncodevelop-

mental Biology and Medicine

Praha

19. – 21. 9. 2007 40. výroční cytogenetická

konference

Praha

21. – 22. 9. 2007 Severočeský imunologický

seminář

Ústí nad Labem

23. – 25. 9. 2007VIII. Celostátní sjezd

ČSKB

České Budějovice

26. – 28. 9. 2007IV. Košické hematologické

a transfuziologické dni

Košice

2. – 5.10. 200724. kongres Československé

společnosti mikrobiologické

Liberec

11. – 13.10. 2007III. Bratislavské hematologické

a transfuziologické dni

Bratislava

17. 10. 2007Brněnský genetický den

Brno

19. – 20.10. 2007Prague Meeting on

Screening for Down

Syndrome

Praha

24. – 27.10. 2007Sjezd slovenských

a českých imunologů

a alergologů

Trnava

26. – 28.10. 2007Mezinárodní konference

Bioptické laboratoře s.r.o.

a SPAU Plzeň

Hrdoňov

29. – 31.10. 20071st Central and Eastern uropean

Proteomic Conference

Praha

28. – 30.11. 20073. ročník Dnů diagnostické,

prediktivní a experimentální

onkologie

Olomouc

12. – 13.12. 2007Pracovní dny

Karlova Studánka

Konference/seminář s účastí společnosti Immunotech formou stánku

Kde se můžeme setkat (září – prosinec 2007)

EXPANZE ANALYZÁTORŮ IMUNOCHEMICKÉ DIABETES, METLA … 2007-07.pdf · 2014. 7. 24. ·...

Documents

Transcript of EXPANZE ANALYZÁTORŮ IMUNOCHEMICKÉ DIABETES, METLA … 2007-07.pdf · 2014. 7. 24. ·...