scielo.sld.cuscielo.sld.cu/pdf/ibi/v20n1/ibi12101.pdf · ˘ˇ > ˙"ˇ g ˝ 9 ˆ˘# ˙ ˘˘ ˘ ˘ˆ...

5
Centro de Investigaciones Biomédicas de Cuba Universidad Autónoma de México TINIDAZOL: UNA DROGA ANTIMICROBIANA CON ACTIVIDAD GENOTÓXICA Lic. Gisell Rodríguez Ferreiro, Lic. Lourdes Cancino Badías, Dr. Elio Prieto González y Dr. Javier Espinosa Aguirre RESUMEN La reducción del grupo nitro presente en varios medicamentos, pesticidas y materiales de uso diario, produce especies reactivas del oxígeno capaces de interactuar con el ADN. El tinidazol, una droga antimicrobiana de la familia de los 5 nitroimidazoles, fue evaluada por el ensayo cometa. Se estudió la capacidad de la droga para inducir roturas de simple cadena y sitios sensibles al álcali, expresado como el porcentaje de células dañadas y el porcentaje de células en cada nivel de daño. En el ensayo in vitro a concentraciones de 100, 250 y 500 mg/mL se encontró inducción de roturas en los cromosomas de leucocitos de ratón a los 30 min de exposición, esto describió una relación dosis respuesta. La importancia de la reducción del grupo nitro, mediada por la acción de nitrorreductasas microsomales hepá- ticas, para la actividad mutagénica de los nitroimidazoles, ha sido estudiada. Sin embargo, estos resultados revelaron que el tinidazol no necesitaba ser metabolizado para inducir el daño. A los 30 min de reparación el daño en los leucocitos se mantuvo, a los 60 min solamente el daño producido con la concentración de 500 µg/mL de tinidazol había sido reparado. A concentraciones mayores se disparan diferentes mecanismos de reparación para no comprometer la viabilidad celular. Estos mecanismos pueden ser responsables de estos hallazgos, se reparan las roturas aunque se comprometa la fidelidad de la secuencia del ADN. In vivo se pudo observar que una dosis de 100 mg/kg de peso era capaz de inducir daño en el ADN de los leucocitos de ratón. Este efecto fue observado a las 24 y 48 h después del tratamiento con una dosis 3 veces superior a la dosis terapéutica (2 g/d). El mecanismo propuesto para explicar el efecto clastogénico de los 5 nitroimidazoles está relacionado con la formación de un anión nitro, que se reoxida y genera especies reactivas del oxígeno. Descriptores DeCS: DAÑO DEL ADN; TINIDAZOL/uso terapéutico; TINIDAZOL/toxici- dad; ESPECIES DE OXÍGENO REACTIVO; RATONES CONSANGUÍNEOS BALB C. El grupo nitro está presente en varios medicamentos, pesticidas y materiales de uso diario. El tinidazol, un antiinfeccioso que pertenece a los nitroimidazoles, se aplica en infecciones causadas por Trichomona vaginalis , Entamoeba hystolitica y Giardia lambia 1 y en la pro- filaxis de infecciones perioperatorias de cirugías digestivas y ginecológicas. 2 Tam- bién se utiliza en el tratamiento de Helicobacter pylori 3 y en inflamaciones periodontales. 4 Este principio activo Rev Cubana Invest Biomed 2001;20(1):54-8

Transcript of scielo.sld.cuscielo.sld.cu/pdf/ibi/v20n1/ibi12101.pdf · ˘ˇ > ˙"ˇ g ˝ 9 ˆ˘# ˙ ˘˘ ˘ ˘ˆ...

Page 1: scielo.sld.cuscielo.sld.cu/pdf/ibi/v20n1/ibi12101.pdf · ˘ˇ > ˙"ˇ g ˝ 9 ˆ˘# ˙ ˘˘ ˘ ˘ˆ ˚ =˚ˆ#˚ ˘0 ˝˘ 9 ˙ˇ ˙˜ ˘

������� ����������������������� ����� ������>������� � ����"����� ����G���

��������� ���� ����� ������������ ���� ������� ������������9���� ��#��������� �� ������ ����������� �=��#��������0� ���� �9 �����������<�1���0���� ��������

� ��� �

�!%�#2&&'A�#�-+%21��'�%�1%��������)!%'����#'&!�������1���'&'#!�*�!��%'!-��#�2��#'!%'��1%�#2&���1�&'��%�!&�')!�#�-�$@+���&!1!&��#�'���%!&�2!%&���-��8�-�'�'#!,�-�2�!#%�+!!��'�'&%�.'!�!#�-! !�'-'!#�-��=�'�%�'�'#!,�-��� 2��)!-2!#!1�%�-�������0���8�����2#'A-!&!1!&'#!##�-!#%�+!1!%!'�#2&'%%��2%!�#��'�1-�&!#��!*�'�'������'.-��!-B-&!-'��$1%��!#�&����-1�%&���!>�#�&?-2-!�#!N!#!�*�-1�%&���!>�#�&?-2-!���&!#!�')�-#�#!N�8���-���!*� ��) ��!&��&���%!&'����#�FDD�L=D*=DD�+H������&���%A'�#2&&'A�#�%��2%!���-��&%������!�#�-�2&�&'���#�%!�A�!-��OD�'�#��$1��'&'A������#��&%'.'A2�!%�-!&'A�#��'�%��12���!8�!'�1�%�!�&'!#�-!%�#2&&'A�#�-+%21��'�%����#'!#!1�%-!!&&'A�#��'�%�%%�#2&�!�!��'&%����!-��(�1B��'&!��1!%!-!!&�')'#!#�2�!+?�'&!#�-���'�%�'�'#!,�-���(!�'#����2#'!#!8�'���.!%+�������%��2-�!#��%�)�-!%��62��-�'�'#!,�-����&��'�!.!��%���!.�-',!#�1!%!'�#2&'%�-#!N�8�-��OD�'�#�%�1!%!&'A��-#!N���-�� -�2&�&'������!��2)��!-��MD�'���-!������-#!N�1%�#2&'#�&��-!&��&���%!&'A�#�=DDµ+H��#��'�'#!,�-(!.@!�'#�%�1!%!#�8�&��&���%!&'�����!*�%����#'�1!%!�#' �%�������&!�'����#�%�1!%!&'A�1!%!��&��1%�����%-!)'!.'-'#!#&�-2-!%8�������&!�'����12�#����%%��1���!.-��#������(!--!,+�����%�1!%!�-!�%��2%!�!2�62���&��1%����!-! '#�-'#!##�-!��&2��&'!#�-��8 *��) )��12#��.��%)!%62�2�!#��'�#�FDD�+HW+#�1����%!&!1!,#�'�#2&'%#!N����-��#�-��-�2&�&'���#�%!�A�8����� �&�� 2��.��%)!#�!-!�LP*PR(#��12?�#�-�%!�!�'����&��2�!#��'�O)�&���21�%'�%!-!#��'���%!1?2�'&!7L+H#98�-��&!�'���1%�12����1!%!�$1-'&!%�-� �&��&-!���+?�'&�#�-��=�'�%�'�'#!,�-�����B%�-!&'��!#�&��-! �%�!&'A�#�2�!�'A��'�%��62���%��$'#!*+���%!��1�&'��%�!&�')!�#�-�$@+���8

����� ��������$:��:������K �������H2����%!1?2�'&�K �������H��$'&'�#!#K��/���������4������� ���K�� ���������4��������8

��)�2.!�!��)����'���#LDDFKLD7F90=P�R

�-+%21��'�%����B1%��������)!%'����#'&!�������1���'&'#!�*�!��%'!-��#�2��#'!%'�8�-�'�'#!,�-�2�!��''� �&&'���62� 1�%����&� ! -�� �'�%�'�'#!,�-��� ��!1-'&! �� '� �&&'���� &!2�!#!� 1�% � �%0��� )�� ��� �� 6���0�+�

��

%���� � ��*' ��� ����0+ �F�*��-!1%�� '-!$'� #� '� �&&'���� 1�%'�1�%!��%'!� #�&'%2+@!�#'+���')!�*+'��&�-A+'&!�8L !��.'?� �� 2�'-',! �� �- �%!�!�'���� #�D�� �+������ ���� O * �� '� -!�!&'����1�%'�#���!-��8P ���� 1%'�&'1'� !&�')�

Page 2: scielo.sld.cuscielo.sld.cu/pdf/ibi/v20n1/ibi12101.pdf · ˘ˇ > ˙"ˇ g ˝ 9 ˆ˘# ˙ ˘˘ ˘ ˘ˆ ˚ =˚ˆ#˚ ˘0 ˝˘ 9 ˙ˇ ˙˜ ˘

'���%!&&'��! &�� �- �� #� -! &?-2-!.!&��%'!�!�1%�#2&�'�('.'&'A�#�-!�@�����'�#�B&'#���2&-�'&��*�2�%��&�-2-!%8�!�'�%�%%�#2&&'A�#������&��12���������&��!%'!1!%!�2!&�')'#!#�2�!+?�'&!K=�G

�'� ��.!%+� �� &?-2-!� #��!�@ �%�� �-#!N�!-�����B%�-!&'��!#�&��-! �%��!&'A�#���1�&'��%�!&�')!�#�-�$@+����62�)!%@!�#�2�&��12����!��%�#�1���#'��#�#�-!1��'&'A�62��&21��-+%21��'�%�#���%�#�-!��-?&2-!8M�R�V�-�.>��')�#����� �%!.!>� 2�&���&�% -!&!1!&'#!##�-�'�'#!,�-#�'�#2&'%%21�2%!�#��'�1-�&!#��!��-�2&�&'���#�%!�A�� ��) ��� �) )��&��-!�2�'-',!&'A�#�-�������0���8�#��B�������2#'A-!&!1!&'#!#%�1!%!�')!#����!�&?-2-!� ��) ��*#��12?�#�2��%!�!�'����&��2�!#��'�O)�&���21�%'�%!-!#��'���%!1?2�'&!7L+H#98

�������

*��) ��:RDh�#��!�+%� 2�%���$�12�����#2%!���OD�'�!OGS��!O&���&���%!&'����#��'�'#!,�-7FDD�L=D*=DDh+H��98/!%!��#'%-!%�1!%!&'A����'�&2.A!OGS��#2%!���OD*MD�'�*��2�'-',A�-1�%A$'#�#�('#%A+���7O=D���-9&���&���%�-1��'�')�8

*��) ):�FDD�+#��'�'#!,�-HW+#�1����� '��&2-!%�� 1�% )@! '��%!1�%'����!- ��%!������!-.H&�&!#!!�'�!- 2��21%�1'�&���%�-*-!&'&-� �� !�'#!7FDD�+HW+#�1���9�-&���%�-1��'�')�8�!��2���%!�#��!�+%������!%��!-!�LP*PR(#��12?�#�-!'��&2-!&'A�8

6������0���0FDh�#�-!�2�1����'A�&�-2-!% ����,&-!%��&��G=h�#�!+!%��!#�.!>�12���#� 2�'A�7D�=U9*���$���#'�%����-B�'�!�1�%�!�.>����8��!N!#'A-!��%&�%!&!1!#���/�7G=h�9*-!�-B�'�!� 2�%��12���!���-'�'�7L�=��-!�-� FDD���- �� �� FD���- %'��-!2%'- �!%&��'�!�� #� ��#'� FU�1<FDK

%'�A��FDDFU�����FDU9F(!PS�8�-#����%�--!�'������%�!-',A��-!��-2�&'A��!�1A�7ODD���-#�!�<�F���-�� ��1<FL�M9!PS��#2%!���LD�'�8��&�%%'A-!�-�&�%� �%��'�!L=�*L=D��#2%!���OD�'�8/����%'�%�������-!)!%��-!� -B�'�!�&���- �!�1A�#���2�%!-',!�&'A�7D�P��- %'��1<G�=9*���'N�%��&��.%��2%�#���'#'�7LDh+H��98��!�!�-',!%��LDD&?-2-!�1�%�%!�!�'������2��'&%��&�1'�#� -2�%��&��&'!*���$1%��A�-#!N�!-��&����-1�%&���!>�#�&?�-2-!�#!N!#!�*�-1�%&���!>�#�&?-2-!���&!#!�')�-#�#!N�8��&���'#�%!%��=&!���+�%@!�!%.'�%!%'!�7�')�-D����'+%!&'A�K�')�-F��'+%!&'A�&�%�!K�')�-L��'+%!�&'A���#'!K�')�-O��'+%!&'A�-!%+!*�'�)�-P��C&-����#� '�'#�98�!)'!.'-'#!#&�-2-!% ���'#'A 2�'-',!�#� -! �?&�'&! #��$&-2�'A�&���%'1!�!,2-8���+%21�� 2��%��&��1!%!#�����%��@1�%-!1%2�.!����$�������1!%!V=*VVU#��'+�' '&!&'A��2�'-',!�#� �- 1!62��� ���!#@��'&������� � 8

� ��������

6������0��� '� )'�%�0 �� �.��%)A2�'�&%�������'+�' '&!�')�#�-1�%&���!>�#�&?-2-!�#!N!#!���-!�O&��&���%!&'��������!*!#!�7 '+8F98 !�.'?�����&����%A 62� FDD * L=D h+H�� #� �'�'#!,�-'�&%�����!%���'+�' '&!�')!������-1�%&����!>�#�&?-2-!�&���'+%!&'A���#'!�&��%��1�&��!-&���%�-7 '+8L9��'���%!�62�=DDh+H��!2����A-!&!��'#!##�&?-2-!�&���'+%!&'A�&�%�!8�����'�&%���������&�%%��1��#��&��2�!#'��'�2&'A��'+�'� '&!�')!#�&?-2-!��'��'+%!&'A�#�-��1!%!��#!�-!�&��&���%!&'�������!*!#!�K����&�� '%�!-��%��2-�!#���.���'#��1!%!�-1�%&���!>�#�&?-2-!�#!N!#!�8

�2%!���-!%�1!%!&'A�1�%��&'�'A�#�.!���*�2&-�A�'#�� ��+���%!� %21�2%!��

��

Page 3: scielo.sld.cuscielo.sld.cu/pdf/ibi/v20n1/ibi12101.pdf · ˘ˇ > ˙"ˇ g ˝ 9 ˆ˘# ˙ ˘˘ ˘ ˘ˆ ˚ =˚ˆ#˚ ˘0 ˝˘ 9 ˙ˇ ˙˜ ˘

62�12�#����%�!�.'?�&!2�!#�-!�'+%!�&'A� #�-�� �� �- ������ �0���8FD�FF

���12?�#�OD�'���(!�'#�%�1!%!#��-#!N�+���%!#�1�%�-�'�'#!,�-8�-��MD�'���� �$'���� #' �%��&'!� �'+�' '&!�')!� &��%��1�&��!-&���%�-#�-1�%&���!>�#�&?-2�-!���#!N!#!�*��-��#' �%������')�-��#�#!N���-�1!%!=DDh+H��8

6������0���'�)')�0���.�2)'�%��#' �%��&'!��'+�' '&!�')!����%�-��!�'�!�-��!����*#��12?�#�-�%!�!�'����1!%!�-1�%&���!>�#�&?-2-!�#!N!#!�7 '+8O98�#' �%��&'! #�- ���2#'� �� ) ���� #��#� ����&���%!%����-!�����&?-2-!�&���'+%!�&'A�&�%�!*��#'!��-�'�'#!,�-� ��) )�'�#2�>�-! �%�!&'A�#�&�-!�-!%+!�7�')�-O98

6�������0�� ��� �'�� ��� ������ ����� �� ���� ��F*�%����'� �������(��+�*�*)/�

��

��

���

������ �������� ������)� �����)��

�����+��� �,�%�� ������

�����������

��

�������

���%��2-�!#�� ��) ���#��2���%!�62����� B%�!&� �� ��&��'�! #� !&�')!&'A����!.A-'&!1!%!+���%!%%21�2%!�#��'��1-� &!#��! �� -�2&�&'��� #� %!�A�8 �� *��%��� �� FVVG�R #�����%!%�� 62� �-���%��'#!,�-*�-#'���%'#!,�-�L��#'&!�������&�����%2&�2%!�'�'-!%!-�'�'#!,�-�'�#2&��%��2%!����-��#� -'� �&'���(2�!���� �� !2���&'! #� !&�')!&'A�

6����5��� ��� �3�����������6������0���� �� % ���������(��+�*�*)/�(��+�*�*,/�

��

��

��

��

������ ������� ������

�����+���&�������"�

������� ���-%$%�"� �.� �"��

)�

��

��

+��� �,�%

���%�/�"/��� �

6����-���� ��� �3�����������������1�����6 ��� ��F*�%�����'� ��&�����(��+�*�*)/

*�

��

������ �����% ������ �����*

����� �#����������4����������������5��%�������5���$������5��$��

Page 4: scielo.sld.cuscielo.sld.cu/pdf/ibi/v20n1/ibi12101.pdf · ˘ˇ > ˙"ˇ g ˝ 9 ˆ˘# ˙ ˘˘ ˘ ˘ˆ ˚ =˚ˆ#˚ ˘0 ˝˘ 9 ˙ˇ ˙˜ ˘

���!.A-'&!*��&��#'&'����!�%�.'!�8�!��$'&'#!#�.���'#!�����!�&��#'&'����1!�%�&����!%%�-!&'��!#!&��-!%�#2&&'A�#�2��-�&�%A�#� -!��-?&2-!1!%���!-* -!1%�#2&&'A�#�-%!#'&!-�'�%��62���1%�����&'!#��$@+�����%��$'#!#�*+���%!��1�&'��%�!&�')!��R&���*! 2�#�����%!�#�1!%!�-F����'-�L��'�%�'�'#!,�-8V

��1��#'��#�#�-!&��&���%!&'A�*-!�!+�'�2##�-#!N�� 2�&'��!�F��B����&!�'����#�%�1!%!&'A�8FL�2!�#���&���1%�����-!)'#!#�-!&?-2-!���#'�1!%!�-��&!�'���#�%�1!%!&'A����*-�� %!+����������%�1!%!#��!2�62���1'�%#!-! '#�-'#!##�-!��&2��&'!�%'+'�!-�FO-�62�12�#��$1-'&!%-��%��2-�!#���.���'#�����-���!*�#�%�1!%!&'A�8

�! �%�!&'A�#�('#%�$'-!�'�!�62�12�#���%&��)�%�'#!1�%)@!��,'�B�'&!�����,'�B�'&!!2�'A��-�&�%� @-'&��1�����&'!-!!&�')'#!#�2�!+?�'&!#�-�'�'#!,�-*�-���%��'#!,�-�M*12�#���%�-%��1���!�.-�#�+���%!%2�#!N�&!%!&��%@��'&�#�!+�����&����-1�%A$'#�#�('#%A+���*-!�%!#'!&'����'��',!����8FD�������%��2-��!#�����.��%)!62��-�'�'#!,�-#!N!�-�����-�')�-&%����A�'&��!#��'�

O)�&���!*�%62�-!#��'���%!1?2�'&!7L+H#9�!2�62�*!!#��'�#�=D�+HW+#�1�����'�#2&�-! �%�!&'A�#��'&%��C&-�����%!������8

�!�%21�2%!�#��'�1-�&!#��!����-%��2-�!#�#�#' �%������'1��#�%�!&&'����62�'�&-2*��0%�1!%!&'A�1�%��&'�'A�#�.!���*�2&-�A�'#���%��2%!�1%�#2&'#!�1�%�-!�!62�#�2�&��12����62@�'&��%!#'!�&'�������&'�'A�1�%&!2�!#�-!2�'A�#�!+����� '���%&!-!����� !#2&��� #�-���!&&'A�#�-!���#��2&-�!�!����1�'�����%!�!�*-!!&&'A�#�('#%�-!�!�8FF�-������0���%�)�-A62��-�'�'#!,�-'�#2&�%��2�%!�#��'�1-�&!#��!��-�2&�&'���#�%!��A�� ��) ��� ��) )��1�%�&2B-#��������&!�'����12�#���%�-%��1���!.-�#�-� �&��&-!���+?�'&�#����!#%�+!���(!�'#����2#'!#�8

��%�����2#'��#�.����%�.>��')�#�'�)���'+!&'���� 2�2%!����-!�62������&-!%�,&! -! &���%'.2&'A� #�- ���!.�-'��('#%�$'-!#��-!%�-�)!�&'!#�-!���,'�!�!��'�$'#!�����-!&���%'.2&'A�#�-!�%��2�%!�'�#2&'#!�1�%-����&!�'����#�%�1!�%!&'A��!�@&����-���2#'�#�-� �&��+�����A$'&�#�-�'�'#!,�-��&?-2-!�(2�!�!�8

�������

(�%�#2&�'��� �(��'�%�+%�21�$'��'�+'�)!%'�2�#%2+��1���'&'#��!�#�!��%'!-�� #!'-*2��+')��%'����%�!&�')��$*+���1�&'��&!1!.-�� '���%!&�'�+"'�(��8 '�'#!,�-��!�!��'�'&%�.'!-#%2+� �(� !�'-*� �(�=�'�%�'�'#!,�-�"!������#2�'�+!&����!��!*8 (�&!1!&'�*� �('�#%2+��'�#2&��'�+-�&(!'�.%�!W�!�#!-W!-'�����'�')��'����$1%����#!��(�1�%&���!+��� #!�!+�#&�--�!�#&�--�!��!&(-�)�-� #!�!+�"!���2#'�#8 (� ��) �� !��!* !� &��&���%!�'��� � FDD� L=D !�#=DDhH�� �(�"�# �(� '�#2&�'��� .%�!W� '� %!� -�2W�&*��&(%��������! ��%OD�'�2���� �$1��2%�8 ('� '�#'&!��#!#��!+��%��1���� %!�'�8 (� '�1�%�!�&�� �(�(�1!�'&�'&%����!-�'�%�%�#2&�!�����#'!��#�'�%�+%�21%�#2&�'�� �%�(��2�!+��'&!&�')'�*� �'�%�'�'#!,�-�(!�.�����2#'�#8<�"�)�%��(���%��2-��%�)�!-�#�(!��'�'#!,�-�#'#���%�62'%���.����!.�-',�#��'�#2&�#!�!+�8� ��%OD�'�2���� %�1!'%� �(� -�2W�&*��#!�!+�1�%�'���#�!�#MD�'�2���! ��%��-* �(�#!�!+�&!2��#.*�(�=DDhH�-�'�'#!,�-�&��&���%!�'��(!#.���%�1!'%�#8��('+(�%&��&���%!�'����#' �%���%�1!'%��&(!�'���!%��%'++�%�#��!������12�&�--)'!.'-'�*'�>��1!%#*8 (�����&(!�'����!*.�%��1���'.-� �%�(��� '�#'�+�K�(�.%�!W�!%�%�1!'%�#�)��' �(� '#�-'�*� ����62��&�'���#!�+�%�#8��&!�.��.��%)�#'��(�'�)')�H!��!*�(!�!#���� FDD�+HW+"�'+(�&!�'�#2&�#!�!+�'���2��-�2W�&*����8 ('�� �&�"!�����LP!�#PR(%�! ��%�(��%�!�����"'�(!#����(!��%'1-'&!��#�(��(�%!1�2�'&!-#���7L+H#!*98 (��2++����#��&(!�'�� �%�$1-!'�'�+�(�&-!���+��'&� �&�� �(� ')��'�%'�'#!,�-�'�%�-!��#"'�(�(� �%�!�'��� !�'�%�!��'��"('&(%���$'#',��!�+���%!���%�!&�')��$*+���1�&'��8

$�+8����%��� ���:��������K ��������H�(�%!1�2�'&2��K ��������H��$'&'�*K���� ���������/�����K����������8

��

Page 5: scielo.sld.cuscielo.sld.cu/pdf/ibi/v20n1/ibi12101.pdf · ˘ˇ > ˙"ˇ g ˝ 9 ˆ˘# ˙ ˘˘ ˘ ˘ˆ ˚ =˚ˆ#˚ ˘0 ˝˘ 9 ˙ˇ ˙˜ ˘

� � � ���������������

F8 �!2%'�!�����?����&��%�!&WX�8�2%�� ���%��'#!,�-�!�#�'�'#!,�-�%��'��!�� %'&(����'!�'�"'�(2��� ('+(#����%!-!�#'��%!)!+'�!-�'�'#!,�-�8�-'��� �&��'�FVVRKLM7=90FLOR8

L8 �%'��!%���#-2�#���!-�.�%+���%#�8�&�-�+'&!-'�1!&�� !��'�'&%�.'!-1%�1(*-!$'���'�����'�!-�'&%� -�%!'�1!�'����2�#�%+�'�+&�-�%�&�!-�2%+�%*8�&!�#3�� �&��'�FVVDKGD0L=8

O8 �#�%#!3�/��,���������%�����--'�����%�'���!'%!������8�!�'-*�%�!������ �*�1���!�'&&('-#%��"'�(D�� �+���������� '� �&�'��8��!-3�!��%�����%�-<�1!��-FVVGKLV7M90=DV8

P8 ��%&*/��#%'!�������8� �&�� �'�'#!,�-���+'�+')!-'� -!��!�'��!�#�2.+'�+')!-1-!62�8�2%% (�%!1���FVVDKPG0ODM8

=8 ���?����!��--�/���%�!#'�'���!+�����!-#��!#�3�3���,�%������8�)!-2!�'��� �(��2�!+��'&!�#+�����$'&!&�')'�'��� PR�'�%�'�'#!,�-��!�#%�-!��#'�'#!,�-�#�%')!�')��.*�(���������!�#�(�����(%�������8��)'%����-�2�!�FVVLKFV0FMG8

M8 �21�!����!���� 32��>! �8�&�')!�'�� � �'�'#!,�-�� !�!-�+�2� !��'1%���,�!- #%2+ �� !�2�!+�� .*�!��!-'!�-')�%�V8�2�!����FVVMKOGD0FV=8

G8 ��1'���!33� �%%�����!%�����2.'�3���%!#���X��+������8�!&��%'!-�2�!+���'��(�2%'��� 1!�'����2�#�%�'�'#!,�-��%�!�����8�2�!����FVVMKO=V0FOO8

R8 ��3�����?��/��!+�-���2-%!!#<��!���+�!%����!��--�/�����8�)!-2!�'��� �(�+�����$'&!&�')'�*� ���%��'#!,�-�!�##'���%'#!,�-�'�(2�!�-*�1(�&*���.*�(�&����!��!*8�2�!����FVVGKOG=7L90FPG8

V8 �%�,#����<�%����&�-�--!�#���!2�(�8�$'#!�')���%���!�#F����(*-�L��'�%�'�'#!,�-�&*����$'&'�*8�'�&(��/(!%�!&�-FVVRK=M7O90OO=8

FD8 '&��8 (��'�+-�&�--+�-H&����!��!*0!�'&%�+�-�-�&�%�1(�%��'&��&(�'62� �%#���&�'��� ��#!�!+�!�#%�1!'%'�'�#')'#2!-&�--�8��0/('--'1��<����'�����#�8��)'%������!-�2�!+����'�8�$ �%#�'���FVV=0OF=8

FF8 <�%)B�(�)B���-!����)B��<-'&@W�)B��Y2�!% ��B.�-�)B����--'���8 (��!�2%�!�#�%'+'�� ���'�+-���%!�#.%�!W�#���%�'��#"'�(�(�&����!��!*8�2�!����FVVRKPDV0FMO8

FL8 �2���(��3���%#���%!&W-�*����-'&W�!��X8<2�!���%�1!'%�*�����0���)�%)'�"8��)'%����-�2�!+FVVVKOO0O8

FO8 ����������3�8��%�1-'&!�'���%�1!'%�!�#%�&��.'�!�'��8��0�'�&(��'��%*8L�#�#8FVV=0FDPM8

��&'.'#�8FD#� �.%�%�#�-LDDD8�1%�.!#�0FR#��!*�#�-LDDD8�'&8' ��������"���������� �������%�#���)���'+!&'�����'��?#'&!� "�'&��%'!#��'%A�"8�)��'#!FPM��8OFDL��62'�!!OF�%�1!%���2.!�!&B���2�'&'1'�/-!*!��'2#!##��!<!.!�!��2.!8�/FFMDD8

��