SOP Sofia Respiratory syncytial virus (RSV) FIA Test

วตถประสงค

ตรวจหานวคลโอโปรตนแอนตเจนของ เรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรส เชงคณภาพ ดวยเทคนค FIA

(Fluorescence immunoassay)

การใชงาน โซเฟย อาร เอส ว เอฟไอเอ สามารถตรวจหานวคลโอโปรตนแอนตเจนของ เรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรส เชงคณภาพ โดยตรงจาก สวอปจ กโพรงหลงจมก (nasopharyngeal swab, NPS) น าลางโพรงหลงจมก(nasopharyngeal wash, NPW) หรอ จ กโพรงหลงจ ก (nasopharyngeal aspirate, NP จงใช ชวยในการวนจฉยการตดเชออยางเฉยบพลนจากเรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรสไดทนท อยางไรกตามหากผลการทดสอบเปนลบไมสามารถขจดขอสงสยในการตดเชอเรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรส และ ไมควรน าผลการทดสอบมาใชเปนพนฐานในการใหการรกษาและการตดสนใจอนๆแตเพยงอยางเดยว นอกจากนควรจะใชชดทดสอบโดยผประกอบวชาชพทหองปฏบตการหรอในสถานพยาบาล

เอกสารอางอง คมอการใช สอบโซเฟย เรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรส เอฟไอเอ

คมอการใชงานเครองโซเฟยอนาไลเซอร นยามค ายอ

สวอปจ กโพรงหลงจมก (Nasopharyngeal swab, NPS) น าลางโพรงหลงจมก (Nasopharyngeal wash, NPW) จ กโพรงหลงจมก (Nasopharyngeal aspirate, NPA) เอฟไอเอ (Fluorescence immunoassay, FIA) หลกการ ช โซเฟย : เรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรส เอฟไอเอ ใชหลกการอมมโนฟลออเรสเซนต (immunofluorescence) รวมกบเครองตรวจโซเฟยอนาไลเซอรในการตรวจวดแอนตเจนของเชอเรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรส อยางรวดเรว ซงวธการทดสอบของโซเฟย อารเอสว เอฟไอเอ อาศยการแตกออกของแอนตเจนของเชอเรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรส โดยสงสงตรวจจากผปวยจะถกน ามาสกดแอนตเจนโดยใสลงในหลอดทดลองทมน ายาสกด เมอเวลาผานไปตวเชอไวรสจะแตกออกและปลดปลอยนวคลโอโปรตนของไวรสออกมา ภายหลงขนตอนการแตกตวของไวรส สงสงตรวจทไดจะถกน ามาหยดลงสตลบทดสอบ ใหสงสงตรวจเคลอนทผานไปบนตลบทดสอบซงประกอบไปดวยสารเคมในการท าปฏกรยา โดยหากภายในสงสงตรวจปรากฏแอนตเจนของไวรส แอนตเจนดงกลาวจะถกตรวจจบดวยสารจ าเพาะบนแถบทดสอบ หากใ ตวอยางทน ามาสกด จ เรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรสอย เครองโซเฟยอนาไลเซอรจะแสดงผลบวก และ/หรอผลลบของเรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรสบนจอภาพ รวมทงจะใหผลผาน (valid) ก จ เรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรส ใ กจ จ เครองโซเฟยอนาไลเซอรจะแสดงผลลบของเรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรสบนจอภาพ รวมทงจะใหผลผาน (valid)

เอกสารทเกยวของ - คมอการเกบตวอยางสงสงตรวจ

- คมอการใชงานสงสงตรวจ

- คมอการท าลายสงตดเชอ

ความปลอดภย ใชส าหรบการตรวจวเคราะหในหลอดทดลองเทานน ไมควรใชชดตรวจทหมดอายตามฉลากแสดงวนหมดอายขางกลองผลตภณฑ ใ ก ก จ ก ก จ ก ก ก ใ

ควรสวมถงมอไนไตรลหรอถงมอยางขณะจบตองตวอยางทเกบจากผปวย ท าลายภาชนะบรรจและวสดอปกรณทใชแลวตามทหนวยงานของรฐก าหนด ตลบทดลอง ไปเปต หลอดน ายาทดลอง น ายาทดลอง และสวอปควรใชแลวทง ไมน ากลบมาใชซ า ไมควรฉกซองตลบออกมาวางทงไวเปนระยะเวลานาน เพอรอการทดสอบ ควรฉกซองและใชทนท ไมควรใชตลบทดสอบหรออปกรณอนๆทช ารดเสยหาย ก จ เปนสารละลายเกลอ ก ดวง ใ ปรมาณ กๆ เพอใหไดผลการทดสอบสมบรณ ถกตอง ควรท าการทดสอบตามวธการใชงานทแนบมากบชดทดสอบ ตลบแคลลเบชน เมอใชงานเสรจเรยบรอยแลวควรเกบเขาถงใหเรยบรอย การเกบสงตวอยาง และการขนสงทไมเหมาะสมอาจสงผลใหผลการตรวจผดพลาดได ขนตอนการเกบสงตวอยางควรตองไดรบการแนะน าและฝกฝน ควรใช Viral transport media ทแนะน าตามวธการใชงานทแนบมากบชดทดสอบ เมอตองการเกบสวอปจากโพรงหลงจมก ควรใช nasopharyngeal swab ทใหมากบชดทดสอบ ควรใชไปเปตทก าหนดปรมาตรทแนนอนใหเหมาะสมในการทดสอบโดย

ไปเปตขนาดเลก สใส ส าหรบใชในการหยดสงตวอยางของผปวยลงในตลบทดสอบเทานน ไปเปตขนาดใหญ สชมพ ส าหรบใชการไปเปตสงตวอยางของผปวยลงในหลอดทดลองทมน ายาสกดเทานน

ไมควรขดหรอเขยนสงใดๆลงไปบรเวณบารโคดบนตลบทดสอบ เนองจากบารโคดมไวส าหรบเครองโซเฟยอนาไลเซอรสแกนเพออานเทสทตองการทดสอบ รวมไปถงปองกนการน าเอาตลบทดสอบทใชแลวกลบมาอานคาอกครง

ไมควรใหเครองแสกนอานบารโคดบนตลบทดสอบมากกวาหนงครงเนองจากบารโคดจะไมสามารถอานไดเพอปองกนการน าตลบทดสอบมาใชซ า

เนองจากน ายาทใชในการตรวจจบเปนสารเรองแสงฟลออเรสเซนตจงไมสามารถมองเหนผลการทดสอบไดดวยตาเปลา ดงนนจงตองใชเครองโซเฟยอนาไลเซอรในการอานคาผลการทดลอง

เครองมออนๆ ก จ เครองโซเฟยอนาไลเซอร Sterile saline ส าหรบใชในการเกบน าลางโพรงจมก(NPW) และน าทดดจากโพรงจมก(NPA) อปกรณเพมเตมอนๆส าหรบใชในการเกบน าลางโพรงจมก(NPW) และน าทดดจากโพรงจมก (NPA) ตลบแคลลเบชน (calibration cassette) ใหมากบเครองโซเฟยอนาไลเซอร ไมโครไปเปต

น ายาและสารควบคม

บรรจส าหรบ ก ก

ตลบ บรรจ 1 ตลบตอซอง จ 25 ซอง ก จ เรสไพราทอร ซนไซเตยล จ ก

ก ฟ ฟ ก จ ก จ จ ก จ ก ใ ก จ กโพรงหลงจมก (nasopharyngeal swab, NPS) ( ก

) ไปเปตขนาดใหญสชมพส าหรบดดตวอยาง ชนดก าหนดปรมาตรแนนอน 260 ไปเปตขนาดเลกสใสส าหรบดดตวอยาง 25 อน ชนดก าหนดปรมาตรแนนอน 120ไมโครลตร ก จ เรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรส

ใ ก ก จ ใ ความรอน คมอน ายา ก ใ จ QC Card (ตดอยทกลอง) แผนซดรอม แสดงการใชงาน กระดาษพมพผล จ านวน 1 มวน

วธด าเนนการ วธการ และการเกบรกษา

โพรงหลง nasopharyngeal swab ใ ก จ ใ ใ อ จดใ ก ก ตวอยางใ ปรมาณ ก ใ จ ก ส าหรบการเกบตวอยางจากnasopharynx ซงกานจะเปนชนดลวดออน ใ จ ก ก ม ก ก พยายามใหสวอปอยดาน septum floor ของจมก เมอสวอปอยในต าแหนงสวนหลง (posterior) ของ nasopharynx ให หลายๆรอบ จากนนน าไปทดสอบทนท ก ใน จ ก (ด วดโอ คลป การเกบตวอยางไดจาก www.cclts.org)

โพรงหลง (nasopharyngeal aspirate) ใชก ก ดด ก ( จ ก . ล. (ไมไดจดไวใหในชดทดสอบ) จ ใ หนา ก ก ใหน าเกลอ ใ จ ก .ใหชดกบผนงดานในของจมก ขนานกบเพดานปาก ดานหนง วย เมอกระบอกสบเขาไปถงบรเวณโพรงดานหลงจมก ใหใชกระบอกสบดดเพอเกบตวอยางจากโพรงหลงจมกขณะน ากระบอกสบออกจากชองจมก หากเกบตวอยางไดไมเพยงพอสามารถเกบตวอยางเพมเตมไดตามวธการดงกลาวกบชองจมกอกขางหนง เมอไดตวอยางน าทดดจากโพรงหลงจมกใหเกบลงในภาชนะเกบตวอยางและน าไปตรวจตอไป หรอจะแบงตวยางทไดในภาชนะเกบตวอยางใสในหลอดสะอาดปราศจากเชอเพอสงตรวจทางหองปฏบตการ จ านวนอยางนอง 0.5-1.0 มล การเกบน า โพรงหลงจมก (nasopharyngeal wash) ใชก ก ดด ก ( จ ก . ล. (ไมไดจดไวใหในชดทดสอบ) จ ใ หนา ก ก ใหน าเกลอ ใ จ กดานหนง จากนนจงเกบตวอยาง โดยใช ทแหงและสะอาดวาง จ ก ก ค อ ย ๆ ด น ศ ร ษ ะ ผ ป ว ย ใ ห ก ม ห น า ก ใ จ ะ ใ ก จ จจ ก ก จ ก ก จ ก

ใ ใ ใ ก จ จ ใ ก ใ ใ จ ก จ ก จ 0.5- ล.

ก ก ก ก ก ก ก ใ ก โอบล าตวเดกและแขนทงสองขางไวดวยแขนขางหนง ใ ก ก ก (NSS) ท จ ก . ล. (อาจใชปรมาตรนอยกวา นตามขนาดของเดก) จ ก ก ใ จ ก จากน น ก ก ก ใ ก ใ ใ ก ใ ก ใ จ ก ก ก ใ ก

จ ก ก จ ก ก แต ก จ อาจ ก ตวอยางสวอปแช เ ยน 2-8 ° ท 15-30 ° ใ ห ก จ สวอปทนานเกน 8 ชวโมง ควรเจอจาง (dilute) เพยงเลกนอย เพราะการเจอจางปรมาณมากจะลด sensitivity ของผลการทดสอบ รายการ viral transport media ทเหมาะกบการทดสอบดวย Sofia RSV FIA ไดแสดงในตาราง 1 ดงน

ตาราง 1

Viral Transport Media การเกบ Sample

2-8°C 25°C

Copan Universal Transport Media 24 ช.ม. 24 ช.ม. Hank’s Balanced Salt Solution 24 ช.ม. 24 ช.ม. Liquid Amies Media 24 ช.ม. 24 ช.ม. M4 24 ช.ม. 24 ช.ม. M4-RT 24 ช.ม. 24 ช.ม. M6 24 ช.ม. 24 ช.ม. Modified Liquid Stuarts Media 24 ช.ม. 24 ช.ม. Saline 24 ช.ม. 24 ช.ม. Starplex Multitrans 24 ช.ม. 24 ช.ม. Phosphate Buffered Saline 24 ช.ม. 24 ช.ม.

กอนท าการทดสอบ ตวอยางจากผปวยทกชนดจะตองมอณหภมเทากบอณหภมหอง

วนหมดอาย : ตรวจสอบวนหมดอายบนซองบรรจแถบทดสอบ หรอทขางกลองดานนอก หามใชชดทดสอบทหมดอาย

ขนตอนส าหรบตวอยางสวอป (Nasopharyngeal Swab) 1. ตรวจสอบวาตงคาเครองโซเฟยอนาไลเซอรในโหมดทตองการแลวหรอไม

ระหวาง .”Walk Away” หรอ “Read Now”

2. บดจกหลอดน ายาสกด แลวใสน ายาทงหมดลงในหลอดสกด ตวอยาง แกวงหลอดเบา ๆ จนผงบฟเฟอรละลายหมด

3. น าสวอปทเกบตวอยางจากผปวยใสลงในหลอดสกดตวอยาง กดสวอปใหสมผสดานขางและกนหลอด พรอมกบหมนสวอป อยางนอย 3 ครง แชสวอปทงไว 1 นาท

4. ในขณะทน าสวอปออกจากหลอดใหรดน าออกจากสวอป โดยหมนสวอปใหสมผสดานขางหลอดสกดตวอยาง ใชหวสวอปหมนพน mucous ทอาจผสมอยในตวอยางขนมาดวย จากนนจงทงสวอปตามวธการท าลายขยะตดเชอ

5. ใชไปเปตขนาดเลกสใสทก าหนดปรมาณแนนอน (120 ไมโครลตร ) หรอ ไมโครไปเปต ดดสารน าจากหลอดสกดตวอยาง จ านวน 120 ไมโครลตร

6. หยดสารสกดตวอยางจากผปวยลงบนตลบทดสอบในหลมทดสอบ

7. น าตลบทดสอบไปทดสอบดวยเครองโซเฟยอนาไลเซอร เพออานผลการทดสอบ

ขนตอนส าหรบตวอยางชนดทเปนน า (Nasopharyngeal Wash/Aspirate) 1. บดจกหลอดน ายาสกด แลวใสน ายาทงหมดลงในหลอดสกด

ตวอยาง แกวงหลอดเบา ๆ จนผงบฟเฟอรละลายหมด

2. ใชไปเปตขนาดใหญสชมพทก าหนดปรมาตรแนนอนหรอไมโครไปเปตดด

ตวอยางน าจ านวน 260 ไมโครลตรปลอยตวอยางทดดมาทงหมดลงใน หลอดสกดตวอยางแกวงหลอดผสมเบาๆ

3. ใชไปเปตขนาดเลกสใสทก าหนดปรมาณแนนอน (120 ไมโครลตร ) หรอ ไมโครไปเปต ดดสารน าจากหลอดสกดตวอยาง จ านวน 120 ไมโครลตร

4. หยดสารสกดตวอยางจากผปวยลงบนตลบทดสอบในหลมทดสอบ วธการแปลผล ผลการทดสอบจะแสดงขนบนหนาจอเครองโซเฟยอนาไลเซอร ทงยงสามารถพมพผลการทดสอบออกมาไดโดยอตโนมต แถบทดสอบซงเปนฟลออเรสเซนสไมสามารถมองเหนไดดวยตาเปลา

ผลบวก เครองโซเฟยอนาไลเซอรจะอานผลการทดสอบในชองอาร เอส ว ใหผลทดสอบบวก และชองควบคมใหผลผาน (valid) แลวแสดงผลทางจอภาพ ผลลบ เครองโซเฟยอนาไลเซอรจะอานผลการทดสอบในชองอาร เอส ว ใหผลทดสอบบวก และชองควบคมใหผลผาน (valid) แลวแสดงผลทางจอภาพ ผลทไมสามารถรายงานได เครองโซเฟยอนาไลเซอรจะอานผลการทดสอบในชองอาร เอส ว ใหผลทดสอบไมผาน (invalid) และชองควบคมใหผลไมผาน (invalid) ผลการตรวจนนเปนผลทไมสามารถ รายงานได ใหถอวาเปนผลทไมสามารถรายงานได ควรท าการทดสอบใหมโดยใชตวอยาง ทเกบมาใหม และท าการทดสอบซ าดวยแถบทดสอบใหม

การควบคมคณภาพ

การควบคมในตว ถบท โซเฟย อาร เอส ว ไอเอฟเอ ก ก ใ ก ใ ตลบ ทก ถบ

ก ทอานผลในแตละชองทดสอบ ทง ก และ ชอง (control) .ใหผลผาน(valid) มการไหลซมทด และ ก ก แตหากต าแหนงชองควบคม ใหผลไมผาน(invalid)แสดงวาการทดสอบครงนไมสามารถ ขนตอนการทดสอบ ก ใ กบตลบทดสอบตลบใหม

แถบทดสอบ สวอป ผล , ตลบทดสอบ ก

ใ ผล ก กครงทเปลยนหมายเลข Lot ของชดทดสอบใหม

กการทดสอบกบสวอปควบคมให ก ไมถกตอง จ ใหทดสอบซ าอกครง หรอ ซ เมดค จ ากด จดจ าหนาย (02-5707919, 081-8477821) ก จ ก ก

ก จ ใ ในชดทดสอบ ใ ก ใ คมอ ใ ใ ก ใ ตลบแคลลเบชน (calibration cassette) ท าหนาทเชคระบบค านวณและระบบออฟตคเซนเซอรของเครองโซเฟยอนาไลเซอร ตองใหผลการทดสอบผาน (valid) จงจะแสดงวาการท างานของเครองปกต ผลการทดสอบของตลบตวอยางถกตอง กการทดสอบกบตลบแคลลเบชน ให ก ไมถกตอง จ ใหทดสอบซ าอกครง หรอ ซ เมดค จ ากด จดจ าหนาย (02-5707919, 081-8477821) ก จ ก ก ตลบแคลลเบชน ใ ก วธ ใ คมอ ใ ใ ก ใ

สาระส าคญและค าอธบาย เชอไวรสเรสไพราทอร ซนไซเตยล เปนเชอไวรสทแพรกระจายไดงายและกอใหเกดการตดเชอแบบ ใน ใจในเดกและผสงอาย ซงเรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรสมลกษณะเปน RNA ไวรสสายเดยว โดยพบวาเกอบครงหนงของเดกแรกเกดมการตดเชอไวรสดงกลาวในชวงขวบปแรก และเปนเชอไวรสตวหลกทเปนสาเหตของอาการปวยในเดกทเขารบการรกษาในโรงพยาบาลดวยโรคตางๆ ในประเทศสหรฐอเมรกาเชอเรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรสเปนสาเหตทกอใหเกดโรคถงลมปอดอกเสบ หรอ ปอดบวมในเดกทมอายต ากวา 1 ปไดมากถง 73,400-126,300 รายตอป ในเดกทเขารบการรกษาในโรงพยาบาลดวยการตดเชอเรสไพราทอร ไวรสพบวาเปนเชอไวรสตวหลกทเปนสาเหตการตายในเดกทมอายต ากวา 5 ปโดยเฉพาะอยางยงในเดกทมอายต ากวา 1 ป โดยอตราการตายพพบจะต ากวา 0.3%-1.0% .ในเดกทปกตทไมมโรคแทรกซอนใดๆ แตจะพบอตราการตายทสงขนถง 2.5%-4.0% ในเดกทเปนโรคหวใจและโรคปอดรวมดวย ขอจ ากดของชดทดสอบ สวนประกอบของชดทดสอบนใชส าหรบการตรวจหาแอนตเจนของไวรสเรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรสเชงคณภาพจากตวอยางทเกบจากชองหลงโพรงจมกดวยวธสวอป (NPS) น าลางโพรงหลงชองจมก (NPW) และน าคดหลงทดดจากชองหลงโพรงจมก (NPA) ชดทดสอบนสามารถตรวจหาเรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรสไดทงแบบมชวต (viable) และไมมชวต (non-viable) ประสทธภาพการทดสอบขนอยกบปรมาณของแอนตเจนในตวอยาง และ อาจหรออาจไมสามารถเทยบเคยงกบผลการเพาะเลยงเซลลจากตวอยางเดยวกนน

ผลลบอาจเกดจากปรมาณแอนตเจนในตวอยางมต ากวาระดบทชดทดสอบจะตรวจพบได หรอในกรณทการเกบหรอขนยายตวอยางไมเหมาะสม

การไมปฏบตตามขนตอนของการทดสอบและการแปลผลอาจท าใหผลการทดสอบไมถกตองหรอไมสามารถแปลผลได

ผลการทดสอบควรน าไปประเมนผลรวมกบอาการทางคลนกทแพทยตรวจพบ

หากทดสอบไดผลบวก กไมสามารถตดประเดนการตดเชออนๆรวม ออกไปได หากทดสอบไดผลลบ ไมสามารถตดประเดนการตดเชอดวยไวรสชนดอนๆนอกเหนอจากเรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรสหรอแบคทเรยออกไปได ตวอยางจากผปวยเดกมแนวโนมทจะมไวรสเยอะและยาวนานกวาผใหญ ดงนนตวอยางจากผใหญมกใหผลทม sensitivity ต ากวาเดก การคาดเดาคาผลบวกและผลลบทจะเกดขน ขนอยกบการแพรระบาดในชวงนน ผลลบปลอมมกเจอในชวงทเชอโรคแพรระบาดมากๆ ผลบวกปลอมมกเจอชวงทไขหวดใหญไมคอยระบาด คอระบาดปานกลางหรอต า เชอเรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรส ทมการเปลยนแปลงของกรดอะมโนตรงบรเวณ epitope จะท าให monoclonal

antibodies ไมสามารถตรวจจบได หรอ ท าใหมความไวในการตรวจจบลดลงได

สงตวอยางทมการปนเปอนของเลอดครบสวนมากกวา 1% v/v อาจรบกวนการแปลผลการทดสอบ โดยเฉพาะอยางยงถามองเหนเลอดหรอตวอยางหนด ไมควรน าตวอยางนนมาทดสอบ

ไมใชการทดสอบนเปนตวประเมนผทไมมอาการตดเชอทางเดนหายใจ

ผลทคาดหวง อตราการเกดผลบวกจากการทดสอบจะแตกตางกนขนอยกบวธการเกบสงตวอยาง ระบบการเกบและขนสงสงตวอยาง วธการทดสอบ ชวงระยะเวลาภายในป อายของผปวย และการแพรระบาดของโรค โดยพบวาอตราการแพรระบาดจากการศกษาโดยการเพาะเชอพบถง 7% (81/1142) ผลการใชชดทดสอบ ผลการใชชดทดสอบโซเฟย อาร เอส ว ไอเอฟเอ เทยบกบการเพาะเลยงเชอ การศกษาทางคลนกในป 2012 ไดมการศกษาเปรยบเทยบผลการใชชดทดสอบโซเฟย อาร เอส ว ไอเอฟเอ กบการเพาะเลยงเชอ และยนยนผลการตรวจดวยวธ DFA การศกษานไดท าในศนยสขภาพ ประเทศสหรฐอเมรกา ในฤดกาลไขหวดใหญเดอนกมภาพนธถงมนาคม ป2012 โดยการศกษาในครงนมการควบคมดแลโดยบคลากรผมความรทางดานสขภาพในศนยสขภาพทงหมด 7 แหงในประเทศสหรฐอเมรกา โดยมการเกบตวอยางสวอปจากโพรงหลงจมก 2 อน (nasopharyngeal swab) หรอน าทลางหรอดดจากโพรงหลงจมก (nasopharyngeal aspirate/wash specimens) จากผปวย 1142 ราย ตวอยางสวอปจากโพรงหลงจมก 421 ราย ตวอยางจากน าทลางหรอดดจากโพรงหลงจมก 730 ราย โดยสงตวอยางทงหมดเกบมาจากผปวยทมอาการซงเปนเดกอายต ากวาหรอเทากบ 18 ปแบงออกเปนเพศชาย 56% เพศหญง 44%

มการท าการทดสอบทนท ณ ตรงทเกบตวอยางเลย 1 สวอปจากโพรงหลงจมกหรอ น าลางหรอดดจากโพรงหลงจมก จะถกน ามาวเคราะหโดยบคคลากรทางการแพทยหรอจากทางโรงพยาบาลดวยโซเฟย อาร เอส ว เอฟไอเอ โดยบคคลากรทางการแพทยหรอจากทางโรงพยาบาล สวนสวอปท 2 จะถกใสใน UTM เพอน าไปท าการเพาะเลยง สวอปจะถกสงไปทดสอบดวยโซเฟย อาร เอส ว เอฟไอเอเทยบกบการเพาะเลยงเชอ การเพาะเลยงเชอจะท าทหองทดลองในทองถนหรอถกแชเยน (ไมใชแชแขง) สงไปทหองทดลองศนยกลางเพอเพาะเลยงเซลลภายใน 48 ชม. ผลทได แสดงไวในตาราง 2-3

ตารางท 2 ผลการตรวจ Nasopharyngeal Swab เปรยบเทยบระหวางชดทดสอบโซเฟย อาร เอส ว เอฟไอเอ กบการเพาะเลยง

ความไว = 22/22 = 100% (ระดบความเชอมน 95% = 82-100%) ความจ าเพาะ = 376/390 = 96% (ระดบความเชอมน 95% = 94-98%)

ผลเพาะเชอ

+ - โซเฟย บวก 22 14

โซเฟย ลบ 0 376

ตารางท 3 ผลการตรวจ Nasopharyngeal Aspirate/Wash เปรยบเทยบระหวางชดทดสอบโซเฟย อาร เอส ว เอฟไอเอ

กบการเพาะเลยงเชอ

ความไว = 54/59 = 92% (ระดบความเชอมน 95% = 81-97%) ความจ าเพาะ = 656/671 = 98% (ระดบความเชอมน 95% = 96-99%)

ผลเพาะเชอ

+ - โซเฟย บวก 54 15

โซเฟย ลบ 5 656

ประสทธภาพของการใชชดทดสอบโซเฟย อาร เอส ว เอฟไอเอ เทยบกบการเพาะเลยงเชอเมอเกบสงตวอยางใน Viral Transport Media ไดมการศกษาเปรยบเทยบผลการใชชดทดสอบโซเฟย อาร เอส ว เอฟไอเอ จากสงตวอยางทเกบใน viral transport media กบการเพาะเลยงเซลล และยนยนผลการตรวจดวยวธ DFA การศกษานไดท าในศนยสขภาพ ประเทศสหรฐอเมรกา ในฤดกาลไขหวดใหญเดอนกมภาพนธถงมนาคม ป2012 โดยการศกษาในครงนมการควบคมดแลโดยบคลากรทางหองปฏบตการจากหองปฏบตการ 2 แหงในสหรฐอเมรกา สวอปจากโพรงหลงจมก หรอ น าลางหรอดดจากโพรงหลงจมกจะถกเกบรกษาใน 1.5 มล. Universal Transport Media (Copan) และขนสงภายใตความเยน (ไมแชแขง) มาทหองปฏบตการภายใน 48 ชวโมง โดยแบงสงสงตรวจเปนสองสวนส าหรบการตรวจดวยชดทดสอบโซเฟย อาร เอส ว เอฟไอเอ และการเพาะเลยงเชอ โดยใชสวอปจากโพรงหลงจมกจ านวน 413 รายและน าลางหรอดดจากโพรงจมกจ านวน 738 ราย ผลทไดแสดงไวในตารางท 4 และ 5

ตารางท 4 ผลการตรวจ Nasopharyngeal Swab ทเกบจาก VTM เปรยบเทยบระหวางชดทดสอบ

โซเฟย อาร เอส ว เอฟไอเอ กบการเพาะเลยง

ความไว = 22/22 = 100% (ระดบความเชอมน 95% = 82-100%) ความจ าเพาะ = 380/391 = 97% (ระดบความเชอมน 95% = 95-98%)

ผลเพาะเชอ

+ - โซเฟย บวก 22 11

โซเฟย ลบ 0 380

ตารางท 5

ผลการตรวจ Nasopharyngeal Aspirate/Wash ทเกบจาก VTM เปรยบเทยบระหวางชดทดสอบ โซเฟย อาร เอส ว เอฟไอเอ กบการเพาะเลยง

ความไว = 58/60 = 97% (ระดบความเชอมน 95% = 88-100%) ความจ าเพาะ = 657/678 = 97% (ระดบความเชอมน 95% = 95-98%)

ผลเพาะเชอ

+ - โซเฟย บวก 58 21

โซเฟย ลบ 2 657

ความเขมขนต าสดทเครองสามารถตรวจวดไดและความวองไวในการวเคราะห ความเขมขนต าสดทเครองสามารถตรวจวดได หรอ Limit of Detection ของวธการตรวจโซเฟย อาร เอส ว เอฟไอเอ วเคราะหโดยใชเชอ 4 สายพนธของไวรสเรสไพราทอร ซนไซเตยล ไวรส แบงออกเปน 2 สายพนธจาก RSV A และอกสองสายพนธจาก RSV B ดงแสดงผลในตารางท 6

ตารางท 6

ความเขมขนต าสดทเครองสามารถตรวจวดไดกบเชอไวรส RSV A และ B สายพนธของคน

สายพนธของเชอไวรส ระดบทตรวจวดไดต าสด (TCID50/mL)

RSV A-2 2073

RSV A Long 172

RSV B Washington/18537/62 27

RSV B CH93-18(18) 225

ความไวเชงวเคราะหพจารณาจาก 2 สายพนธของ RSV B คอ West Virginia Strain/14617/85 และ RSV 9320 ผลทดสอบพบวาใหผลบวกทมากกวา 142 TCID50/ml ในสายพนธ West Virginia Strain/14617/85 และมากกวา 7 TCID50/ml ในสายพนธ 9320

ความจ าเพาะเชงวเคราะหและปฏกรยาขามกลม ชดทดสอบโซเฟย อาร เอส ว เอฟไอเอ ไดประเมนผลการทดลองกบแบคทเรยและเชอรา 32ชนด และไวรสอนอก 42 ชนด โดยแบคทเรยและเชอราจะประเมนทความเขมขนในชวงระหวาง 1.76 x 104- 1.76 x 106 cfu/ml สวนไวรสจะประเมนทความเขมขนในชวงระหวาง 2.00 x 104 – 1.76 x 107 TCID/ml ผลการทดลองไมพบวามแบคทเรย เชอรา หรอไวรสสายพนธอนในความเขมขนทก าหนดท าปฏกรยาขามกลมในวธการทดสอบนได โดยพบวาการเคลอนทของตวอยางและการปรากฏของแถบควบคมไมไดสงผลรบกวนการทดลอง ดงแสดงผลในตารางท 7

ตารางท 7 ความจ าเพาะเชงวเคราะหและปฏกรยาขามกลม

สายพนธของเชอจลชพ ความเขนขน ผลการทดสอบ Acinetobacter baumannii 1.76 x 106 cfu/ml Negative Bacteroides fragilis 1.76 x 106 cfu/ml Negative Bordetella pertussis 1.76 x 106 cfu/ml Negative Candida albicans (yeast) 1.76 x 106 cfu/ml Negative Corynebacterium diptheriae 1.76 x 106 cfu/ml Negative Escherichia coli 1.76 x 106 cfu/ml Negative Haemophilus influenza 1.76 x 106 cfu/ml Negative Klebsiella pneumoniae 1.76 x 106 cfu/ml Negative Lactobacillus plantarum 1.76 x 106 cfu/ml Negative Legionella pneumophila 1.76 x 106 cfu/ml Negative Moraxella catarrhalis 1.76 x 106 cfu/ml Negative Mycobacterium avium 1.76 x 106 cfu/ml Negative Mycobacterium intracellulare 1.76 x 106 cfu/ml Negative Mycobacterium tuberculosis 1.76 x 106 cfu/ml Negative Mycoplasma pneumonia 1.76 x 104 cfu/ml Negative Neisseria meningitides 1.76 x 106 cfu/ml Negative Neisseria mucosa 1.76 x 106 cfu/ml Negative Neisseria sicca 1.76 x 106 cfu/ml Negative Neisseria subflava 1.76 x 106 cfu/ml Negative Pseudomanas aeruginosa 1.76 x 106 cfu/ml Negative Serratia marcescens 1.76 x 106 cfu/ml Negative Staphylococcus aureus 1.76 x 106 cfu/ml Negative Staphylococcus aureus (Cowen 1) 1.76 x 106 cfu/ml Negative Staphylococcus epidermidis 1.76 x 106 cfu/ml Negative Streptococcus mutans 1.76 x 106 cfu/ml Negative Streptococcus pneumoniae 1.76 x 106 cfu/ml Negative Streptococcus sanguis 1.76 x 106 cfu/ml Negative Streptococcus sp. Group B 1.76 x 106 cfu/ml Negative

Streptococcus sp. Group C 1.76 x 106 cfu/ml Negative Streptococcus sp. Group F 1.76 x 106 cfu/ml Negative Streptococcus sp. Group G 1.76 x 106 cfu/ml Negative Adenovirus 3 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Adenovirus 4 2.00 x 104 TCID50/ml Negative Adenovirus 5 6.80 x 105 TCID50/ml Negative Adenovirus 7A 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Adenovirus 11 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Coranavirus OC43 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Coranavirus 229E 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Coxsackievirus B5 (Faulkner) 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Cytomegalovirus AD-169 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Cytomegalovirus Towne 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Echovirus Type 3 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Herpes Simplex virus 1 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Herpes Simplex virus 2 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Human Metapneumovirus A1 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Human Metapneumovirus A2 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Human Metapneumovirus B1 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Human Metapneumovirus B2 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Human Metapneumovirus VR-03-00181 UIHC 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Influenza A H1N1 (5 strains) 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Influenza A H3N2 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Influenza B Hong Kong 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Influenza B Panama 1.76 x 107 TCID50/ml Negative Influenza C/Taylor/1233/47 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Measles (Enmonston) 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Mumps (Enders) 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Parainfluenza virus 1 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Parainfluenza virus 2 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Parainfluenza virus 3 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Parainfluenza virus 4A 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Parainfluenza virus 4B 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Rhinovirus Type 1B 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Rhinovirus Type 2 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Rhinovirus Type 3 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Rhinovirus Type 7 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Rhinovirus Type 15 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Rhinovirus Type 18 1.76 x 105 TCID50/ml Negative

Rhinovirus Type 37 1.76 x 105 TCID50/ml Negative Varicella Zoster Virus 2.69 x 104 TCID50/ml Negative

สารรบกวนการทดสอบ เลอด, mucin, ผลตภณฑหลายชนด และสารเคมทวไป ไดน ามาทดสอบแลววา ไมรบกวนการท างานชดทดสอบโซเฟย อาร เอส ว เอฟไอเอทปรมาณตาง ๆ ดงแสดงในตารางท 8

ตาราง8 ความเขมขนของสารทไมรบกวนการทดสอบ

ชนดของสาร ความเขมขน Whole Blood 1 % Mucin 7 mg/mL Listerine Cool Mint mouthwash [eucalyptol, menthol, methyl salicylate, and thymol]

44%

Crest Pro-health mouthwash [cetylpyridinium chloride]

44%

Scope mouthwash [cetylpyridinium chloride] 44% CVS Menthol [menthol] 26% Halls Mentho-lyptus [Menthol] 26% Ricola [menthol] 26% Vicks Sinex nasal spray [oxymetazoline hydrochloride]

18%

4 Way Fast Acting nasal spray [phenylephrine hydrochloride]

18%

Equate Fast Acing nasal spray [phenylephrine hydrochloride]

18%

Acetamidophenol 18 มก./มล. Acetylsalicylic Acid 18 มก./มล. Chlorpheniramine 3 มก./มล. Dextromethorphan 3 มก./มล. Diphenhydramine 3 มก./มล. Guaiacol 35 มก./มล. Phenylephrine 9 มก./มล. Rimantadine 88 ไมโครกรม/มล. Albuterol 35 มก./มล.

ความชวยเหลอ หากมปญหาในการใชชดทดสอบสามารถตดตอท บรษท ซ เมดค จ ากด ซงเปนตวแทนจ าหนายในประเทศไทย (02-197-8652ถง3, 090-5499594 หรอ supasorn@z-medic.com) หรอตดตอไปยงแผนกสนบสนนดานเทคนคของบรษทไควเดล สหรฐอเมรกา หมายเลข 800-874-1517 858-552-1100 วนจนทร ถง ศกร เวลา 7.00 -17.00 น. หรอ technicalsupport@quidel.com