UJI ANTIHIPERTENSI CAMPURAN EKSTRAK ETANOL HERBA …lib.ui.ac.id › file?file=digital › 2016-9...

UNIVERSITAS INDONESIA

UJI ANTIHIPERTENSI CAMPURAN EKSTRAK ETANOL HERBASELEDRI (Apium graveolens[Jacq.] Lag) DAN DAUN TEMPUYUNG

(Sonchus arvensis L.) SEBELUM DAN SESUDAH PURIFIKASI

TESIS

IKE YULIA WIENDARLINA0706172506

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAMPROGRAM MAGISTER ILMU KEFARMASIAN

DEPOKDESEMBER 2010

Uji Antihipertensi..., Ike Yulia Wiendarlina, FMIPA UI, 2010

UNIVERSITAS INDONESIA

UJI ANTIHIPERTENSI CAMPURAN EKSTRAK ETANOL HERBASELEDRI (Apium graveolens[Jacq.] Lag) DAN DAUN TEMPUYUNG

(Sonchus arvensis L.) SEBELUM DAN SESUDAH PURIFIKASI

TESIS

Diajukan sebagai syarat untuk memperoleh gelar

Magister Farmasi

IKE YULIA WIENDARLINA0706172506

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAMPROGRAM MAGISTER ILMU KEFARMASIAN

DEPOKDESEMBER 2010


iv

KATA PENGANTAR

Puji syukur saya panjatkan kepada Allah SWT, karena atas berkat dan rahmat-Nya,

saya dapat menyelesaikan tesis ini. Penulisan tesis ini dilakukan dalam rangka

memenuhi salahsatu syarat untuk mencapai gelar Magister Jurusan Farmasi pada

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Indonesia. Saya

menyadari bahwa, tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak, dari masa

perkuliahan sampai pada penyusunan tesis ini, sangatlah sulit bagi saya untuk

menyelesaikan tesis ini, oleh karena itu saya mengucapkan terimakasih kepada :

(1) Prof. Dr.Endang Hanani, MS dan Dra. Azizahwati, MS,Apt selaku dosen

pembimbing yang telah menyediakan waktu, tenaga dan pikiran untuk

mengarahkan saya dalam penyusunan tesis ini.

(2) Prof. Dr. Effionora Anwar, MS selaku Ketua Program S2 Ilmu Kefarmasian

F-MIPA UI, serta seluruh karyawan Departemen Farmasi F-MIPA UI.

(3) Pihak Fakultas Kedokteran Hewan dan Pusat Studi Biofarmaka IPB, Program

Studi Farmasi F-MIPA Unpak, Bogor serta Laboratorium Fitokimia Jurusan

Farmasi F-MIPA UI, yang telah banyak membantu dalam usaha memperoleh

data yang saya perlukan.

(4) Orang tua dan keluarga saya yang telah memberikan dukungan material dan

moral dan

(5) Sahabat yang telah banyak membantu saya dalam menyelesaikan tesis ini.

Akhir kata, saya berharap Allah SWT berkenan membalas segala kebaikan semua

pihak yang telah membantu. Semoga tesis ini membawa manfaat bagi pengembangan

ilmu.

Depok, 27 Desember 2010

Penulis


vi

ABSTRAK

Nama : Ike Yulia WiendarlinaProgram Studi : Magister Ilmu FarmasiJudul : Uji Antihipertensi Campuran Ekstrak Etanol Herba Seledri (Apium

graveolens[Jacq.] Lag) dan Daun Tempuyung (Sonchus arvensis L.)dengan Campuran Ekstrak Yang Sudah di Purifikasi.

Herba seledri (Apium graveolens[Jacq.] Lag) dan daun tempuyung (Sonchus arvensis L.)telah lama digunakan sebagai obat antihipertensi. Penelitian ini bertujuan untukmengetahui aktivitas antihipertensi dari campuran kedua ekstrak tersebut sebelum dansesudah purifikasi. Pada penelitian ini digunakan 8 kelompok tikus jantan galur Sprague-Dawley, masing-masing kelompok terdiri dari 4 ekor tikus. Kelompok 1 sebagai kontrolnormal diberi larutan CMC 0,5 %, kelompok 2 diberi larutan NaCl 2 %, kelompok 3(0,02 g ekstrak herba seledri dan 0,15 g ekstrak daun tempuyung), kelompok 4 (0,036 gekstrak herba seledri dan 0,206 g esktrak daun tempuyung), kelompok 5 (0,045 g ekstrakherba seledri dan 0,25 g ekstrak daun tempuyung), kelompok 6 (purifikasi kelompok 4),kelompok 7 (purifikasi kelompok 5), kelompok 8 sebagai herbal pembanding (0,141 gTensigard) Parameter yang diukur adalah volume urin, tekanan darah, arteri, sistolik dandiastolik tikus, campuran ekstrak diberikan pada hari ke 15 sampai hari ke 30. Hasilpenelitian menunjukkan kelompok 7 mengalami penurunan aktivitas hipertensi,mendekati aktivitas kelompok 4 dan kelompok 8, pemberian sediaan uji tidakmempengaruhi sekresi urin tikus.

Kata kunci : Apium graveolens[Jacq.] Lag , Sonchus arvensis L.,antihipertensi, purifikasi.

xiii + 115 halaman : 17 gambar,9 tabelDaftar Pustaka : 70 (tahun 1964 sampai2010)


vii

ABSTRACT

Name : Ike Yulia WiendarlinaStudy Program : Magister of PharmacyTitle : Comparison antihypertension activity from the mixture extract

Celery herbs (Apium graveolens[Jacq.] lag) and Sonchi folium(Sonchus arvensis L.) before and after purification.

Celery herbs (Apium graveolens[Jacq.] lag) and Sonchi folium (Sonchus arvensis L.)were used as antihypertension herbal medicinal for long time ago. Comparison ofantihypertension activity from the mixture extract before and after purification has beendone, used eight groups of Sprague-Dawley strain mail rats, each group containing fourrats.Group 1 as normal control were given 0,5 % CMC solution, group 2 were given 2 %NaCl solution, group 3 (0,02 g of celery herbs extract and 0,15 g of sonchi foliumextract), group 4 (0,036 g of celery herbs extract and 0,206 g of sonchi folium extract),group 5 (0,045 g of celery herbs extract and 0,25 g of sonchi folium extract), group 6(group 4 after purification), group 7 (group 5 after purification) and group 8 as thecomparison (0,141 g of Tensigard).The mixture of extract were given on 15th until 30th.The parameter are, urine excretion and the blood pressure of rats including arteri,systolic, and diastolic. The result showed group 7 has decreased antihypertension effectnearly group 4 and group 8, the mixtured of extract did not have the significant activityon urine excretion.

Key word : Apium graveolens[Jacq.] Lag , Sonchus arvensis L., antihypertension,purification.xii+115 pages : 17 pictures; 9 tablesBibliography : 70 (1964-2010)


viii

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDULHALAMAN PERNYATAAN ORISINALITASLEMBAR PENGESAHANKATA PENGANTARLEMBAR PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAHABSTRAKABSTRACTDAFTAR ISIDAFTAR GAMBARDAFTAR TABELDAFTAR LAMPIRAN

BAB I PENDAHULUAN ………………………………………………..1.1 Latar Belakang ……………………………………………….1.2. Tujuan Penelitian …………………………………………….1.3. Hipotesis ……………………………………………………..

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ................................................................2.1. Apium graveolens [Jacq] Lag ..................................................

2.1.1. Klasifikasi Tanaman ………………………………….2.1.2. Deskripsi Tanaman …………………………………...2.1.3. Kandungan Kimia ……………………………………2.1.4. Efek Farmakologi …………………………………….2.1.5. Efek Samping dan Efek Tidak Dikehendaki …………

2.2. Sonchus arvensis Linn ………………………………………..2.2.1. Klasifikasi Tanaman ………………………………….2.2.2. Deskripsi Tanaman …………………………………..2.2.3. Kandungan Kimia ……………………………………2.2.4. Efek Farmakologi …………………………………….2.2.5. Efek Samping ………………………………………...

2.3. Klorofil dan Sifat-sifatnya ……………………………………2.3.1. Struktur kimia klorofil..................................................

2.4. Hipertensi …………………………………………………….2.4.1. Definisi dan klasifikasi ……………………………….2.4.2. Etiologi (Hadiyanto, 2002) …………………………..2.4.3. Implikasi-implikasi Terapeutik (Katzung, 2001) .......2.4.4. Pendekatan Pada Penderita Hipertensi (Katzung,

2001) ………………………………………………….2.4.5. Mekanisme Kerja …………………………………….2.4.6. Pengukuran Tekanan Darah (Hadiyanto, 2009.,

Kelompok Kerja Ilmiah, 1993).....................................2.4.7. Induksi pada Hewan Percobaan (Kelompok Kerja

Ilmiah, 1993; Wresdining Tyas, 2007) ........................2.5. Ekstraksi ...................................................................................

iiiiiiivvviviiviiixixiixiii

1133

444455888991010101214141515

1618

22

2424


ix

2.6 Kromatografi ............................................................................2.6.1 Kromatografi Lapis Tipis ................................................

2.7 Flavonoid ..................................................................................

BAB III METODE PENELITIAN ............................................................3.1 Lokasi .......................................................................................3.2 Alat ............................................................................................3.3 Bahan .........................................................................................

3.3.1 Simplisia ..........................................................................3.3.2 Hewan Coba.....................................................................3.3.3 Bahan kimia ....................................................................

3.4 Cara Kerja .................................................................................3.4.1 Metode penelitian ............................................................3.4.2 Rancangan Penelitian ......................................................3.4.3 Persiapan Hewan Coba ...................................................3.4.4 Preparasi Ekstrak ............................................................3.4.5 Penetapan Dosis ..............................................................3.4.6 Pembuatan Sediaan Uji....................................................3.4.7 Pembuatan CMC 0, 5 % ..................................................3.4.8 Pembuatan Larutan Natrium Klorida 2 % ......................3.4.9 Purifikasi Ekstrak ............................................................

3.5 Pengujian terhadap simplisia dan ekstrak .................................3.5.1 Parameter non spesifik ...................................................3.5.2 Parameter spesifik ..........................................................3.5.3 Uji Kandungan Kimia Ekstrak .......................................3.5.4 Pola Kromatogram Dengan Metode Kromatografi Lapis

Tipis ................................................................................3.6 Purifikasi Campuran Ekstrak Seledri dan Tempuyung .............3.7 Pelaksanaan Percobaan .............................................................3.8 Pemeriksaan Tekanan Darah Tikus …………………………..3.9 Pengamatan ...............................................................................3.10 Analisis Data ...........................................................................

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN …………………………………4.1.Hasil ..........................................................................................

4.1.1 Pembuatan Serbuk Simplisia ………………..................4.1.2.Pembuatan Ekstrak ……………...……………..............4.1.3.Pengujian Terhadap Simplisia dan Ekstrak Herba

Seledri dan Daun Tempuyung ........................................4.1.4.Pengamatan Volume Urin Tikus......................................4.1.5.Pengamatan Tekanan Darah Sistolik (TDS) ...................4.1.6.Pengamatan Tekanan Darah Arteri (TDA) ………..…...4.1.7. Pengamatan Tekanan Darah Diastolik (TDD) ….…….

4.2. Pembahasan …………………………………………….……

BAB V KESIMPULAN …………………………………………………..5.1. Kesimpulan …………………………………………………..5.2. Saran ........................................................................................

252627

313131313131313232323232333435353536363738

404041424343

45454545

465152545557

636363


x

Daftar Pustaka ................................................................................................Lampiran .......................................................................................................

6571


xi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Apium graveolens [Jacq] Lag ...............................................Gambar 2.2 Struktur Kimia Apigenin …………………………………..Gambar 2.3 Struktur Kimia Apiin ………………………………………Gambar 2.4 Struktur Kimia Kumarin …………………………………...Gambar 2.5 Sonchus arvensis L ...............................................................Gambar 2.6 Struktur Kimia 7-glukosilluteolin (cynaroside) ....................Gambar 2.7 Struktur Kimia Klorin ...........................................................Gambar 2.8 Klorofil a dan b .....................................................................Gambar 2.9 Klorofil c1 .............................................................................Gambar 2.10 Klorofil c2 .............................................................................Gambar 2.12. Klorofil d ..............................................................................Gambar 2.12 Cara Kerja Diuretik Tiazid ....................................................Gambar 2.13 Renin Angiotensin Aldosteron System .................................Gambar 2.14 Kerangka Dasar Flavonoid ...................................................Gambar 2.15 Struktur Kimia Golongan Flavonoid ....................................Gambar 4.1 Pola kromatogram ekstrak herba seledri, fasa gerak hexan

: etil asetat (2:3) pada sinar ultraviolet panjang gelombang366 nm, dengan alat Reprostar ..............................................

Gambar 4.2 Pola kromatogram ekstrak daun tempuyung setelahdihidrolisis dengan asam asetat glasial, fasa gerak kloroform: metanol (11:1) pada sinar ultraviolet panjang gelombang366 nm, dengan alat Reprostar .............................................

4677910121313141419212829

49

49


xii

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Perbedaan Struktur Klorofil ......................................................Tabel 2.2 Klasifikasi Tekanan Darah Manusia Dewasa Pada JNC 7 ……Tabel 2.3 Sifat Berbagai Golongan Flavonoid ............................................Tabel 3.1 Pembagian Kelompok Perlakuan Hewan Coba ...........................Tabel 4.1 Kandungan Kimia Ekstrak ..........................................................Tabel 4.2 Data Volume Urin Tikus (mL), n = 4 ekor tikus ………………Tabel 4.3 Data Tekanan Darah Sistolik (mm Hg), n = 4 ekor tikus ...........Tabel 4.4 Data Tekanan Darah Arteri Rata-Rata (mm Hg), n = 4 ekor

tikus ……………………………………………………………Tabel 4.5 Data Tekanan Darah Diastolik (mm Hg), n= 4 ekor tikus ……

12153042485152

5455


xiii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran I. Gambar ………………………………………………..Lampiran II. Tabel ………………………………………………….Lampiran III. Hasil Determinasi Tanaman .........................................Lampiran IV. Skema Proses Ekstraksi Simplisia ...............................Lampiran V. Deskriptif (Gambaran Umum Data) Berat Badan

Tikus .............................................................................Lampiran VI. Deskriptif (Gambaran Umum) Volume Urin Tikus .....Lampiran VII. Analysis Of Variance Tekanan Darah Sistolik ………Lampiran VIII. Arteri …………………………………………………Lampiran IX. Analysis Of Variance TDD ……………………………Lampiran X. Uji Beda : Arteri ……………………………………….Lampiran XI. Uji Beda : Diastolik ......................................................Lampiran XII. Uji Beda : TDS ...............................................................

70768889

909396100105109113118


1 Universitas Indonesia

BAB IPENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Hipertensi merupakan penyakit kardiovaskuler yang lazim, ditandai

dengan kenaikan tekanan darah di atas normal, yaitu tekanan darah di atas

nilai 140/90 mm Hg, pengukuran ini didasarkan pada tekanan darah sistolik

dan diastolik. Penyebab tekanan darah meningkat adalah akibat peningkatan

denyut jantung, peningkatan resistensi (tahanan) dari pembuluh darah tepi

dan peningkatan volume aliran darah. Kenaikan tekanan darah ini dapat

disebabkan antara lain oleh faktor usia, karena pada usia lanjut pembuluh

darah cenderung menjadi kaku dan elastisitasnya berkurang, akibatnya

pembuluh darah menjadi sklerosis (aterosklerosis) dan meningkatkan

resistensi dinding pembuluh darah, hal ini akan memicu jantung untuk

meningkatkan denyutnya agar aliran darah dapat mencapai seluruh tubuh dan

mengakibatkan terjadinya hipertensi (Azwar, 2010).

Kenaikan tekanan darah secara kronis dapat meningkatkan resiko

kerusakan pembuluh-pembuluh darah pada ginjal, jantung dan otak, serta

dapat mengakibatkan insiden gagal ginjal, penyakit koroner, gagal jantung

dan stroke. Hipertensi dapat diatasi dengan penurunan tekanan darah secara

farmakologis yang efektif, karena itu pengobatan hipertensi yang terkontrol

baik tetap merupakan tujuan pengobatan (Hadiyanto, 2009; Katzung, 2001).

Pengobatan hipertensi dapat dilakukan dengan menggunakan obat-obat

yang berasal dari bahan alam atau dengan obat-obat sintetis, tetapi pada saat

ini kecenderungan masyarakat untuk menggunakan obat-obatan yang berasal

dari bahan alam meningkat, karena banyak yang beranggapan bahwa

penggunaan obat dari bahan alam lebih aman dibandingkan obat sintesis,

walaupun obat-obatan ini belum terbukti secara klinis, tapi lebih berdasarkan

pengalaman empiris, tanaman yang sering digunakan sebagai obat

antihipertensi contohnya adalah seledri (Apium graveolens [Jacq.] Lag) yang

mengandung apigenin dan mempunyai aktivitas sebagai vasodilator, tetapi

bila digunakan berlebihan dapat menurunkan tekanan darah secara tajam

bahkan dapat menimbulkan syok. Tanaman lain yang dapat digunakan


2

Universitas Indonesia

sebagai antihipertensi adalah tempuyung (Sonchus arvensis L.) yang bersifat

diuretik lemah, kandungan zat aktif dalam tempuyung antara lain flavonoid

kaemferol, luteolin-7-O-glukosida, apigenin-7-O-glukosida dan senyawa lain

seperti kumarin dan asam fenolat.

Berdasarkan sifat-sifat seledri dan tempuyung, kombinasi keduanya

diharapkan dapat menghasilkan obat antihipertensi yang lebih baik (Nien

et al.,1991; Dalimarta, 2000; Joint Mender, 2010).

Klorofil adalah pigmen pemberi warna hijau yang terdapat pada

kloroplast sel tanaman, sebagian besar klorofil terdapat pada daun sehingga

sering disebut sebagai zat hijau daun. Tidak hanya pada daun, klorofil juga

terdapat pada jaringan tanaman yang berwarna hijau, misalnya pada akar dan

batang yang berwarna hijau dalam jumlah terbatas. Klorofil bersifat non polar

sehingga tidak larut dalam air dan dapat terjadi agregasi bila dicampur

dengan air (Chandra et al., 2010; Saptono dkk, 2010).Klorofil mempunyai

inti magnesium, dalam Differing Forms of Magnesium Supplement (2010)

disebutkan bahwa suplemen yang mengandung magnesium dalam dosis

tinggi dapat menyebabkan denyut jantung yang tidak teratur, diare dan

mengurangi nafsu makan.

Pada penelitian ini dilakukan pengujian aktivitas antihipertensi

campuran ekstrak etanol herba seledri dan daun tempuyung, serta campuran

kedua ekstrak tersebut yang telah dipurifikasi dengan cara penyaringan

menggunakan pelarut air, terhadap tikus putih jantan yang telah dibuat

hipertensi. Sebagai pembanding digunakan obat herbal standar yang sudah

beredar di pasaran, purifikasi diharapkan dapat menghasilkan campuran

ekstrak yang mempunyai aktivitas hipertensi lebih baik daripada campuran

ekstrak sebelum dipurifikasi.


3


1.2. Tujuan Penelitian.

Mengetahui perbedaan aktivitas antihipertensi dari campuran ekstrak

etanol herba seledri (Apium graveolens [Jacq.]Lag) dan daun tempuyung

(Sonchus arvensis L.) sebelum dan sesudah dipurifikasi.

Mengetahui aktivitas diuretik dari campuran ekstrak etanol herba

seledri (Apium graveolens [Jacq.]Lag) dan daun tempuyung (Sonchus

arvensis L.) sebelum dan sesudah dipurifikasi.

1.3. Hipotesis

Purifikasi dapat memberikan perbedaan aktivitas antihipertensi dan

aktivitas diuretik dari campuran ekstrak etanol herba seledri (Apium

graveolens [Jacq.]Lag) dan daun tempuyung (Sonchus arvensis L.)



BAB IITINJAUAN PUSTAKA

2.1. Apium graveolens [Jacq.] Lag (Tjitrosoepomo, 1997)

2.1.1. Klasifikasi Tanaman

Dunia : Plantae

Divisi : Spermatophyta

Sub divisi : Angiospermae

Kelas : Dicotyledonae

Bangsa : Umbelliflorae/Apiales

Suku : Umbelliferae/ Apiaceae

Marga : Apium

Jenis : Apium graveolens [Jacq.] Lag

Sinonim : Apium graveolens L.

2.1.2. Deskripsi Tanaman

Gambar 2.1 Apium graveolens [Jacq.] Lag

Apium graveolens [Jacq.] Lag merupakan tumbuhan terna, tumbuh

tegak, tinggi sekitar 50 cm dengan bau aromatis yang khas. Batang

bersegi, beralur, beruas, tidak berambut, bercabang banyak, berwarna

hijau pucat. Daun majemuk menyirip ganjil dengan anak daun 3-7 helai.


5


Anak daun bertangkai yang panjangnya 1-2,7 cm, helaian daun tipis dan

rapuh, pangkal dan ujungnya runcing, tepi beringgit, panjangnya

2,7-5 cm, pertulangan menyirip, berwarna hijau keputih-putihan. Bunga

majemuk berbentuk payung 8-12 buah, kecil-kecil berwarna putih, mekar

secara bertahap. Buahnya buah kotak, berbentuk kerucut, panjang

1-1,5 mm, berwarna hijau kekuningan.

2.1.3. Kandungan Kimia

Apium graveolens [Jacq.] Lag banyak mengandung senyawa aktif

dengan kandungan utama flavonoid apiin dan apigenin, minyak atsiri

dengan komponen utama isokarlofilen, stearaldehid, senyawa kumarin

dengan komponen utama umbelliferon (Badan POM RI, 2004).

2.1.4. Efek Farmakologi

Apium graveolens [Jacq.] Lag herba memiliki efek hipotensi, baik

pada penderita hipertensi maupun pada hewan uji yang dibuat hipertensi.

Fraksi etanol memiliki efek menurunkan tekanan darah yang tidak terlalu

besar tetapi stabil (Depkes RI, 2000a). Efek hipotensif herba berkaitan

dengan efek apigenin sebagai vasodilator primer. Tekanan darah

umumnya mulai turun setelah satu hari pengobatan, diikuti dengan

meningkatnya volume urin yang dikeluarkan (Nien et al., 1991).

Seledri dilaporkan memiliki efek antirematik, obat penenang,

diuretik ringan dan antiseptik pada saluran kemih, juga telah digunakan

untuk radang sendi, encok, terutama untuk rheumatoid (Bisset, 1994).

Pada tikus, efek sedatif dan aktifitas antispasmodik telah dilaporkan untuk

komponen phthalide (Duke, 1985). Minyak biji seledri dilaporkan

memperlihatkan efek bakteriostatik (Kar, 1971).


6


2.1.4.1 Apigenin

Gambar 2.2 Struktur Kimia Apigenin (KEGG Encyclopedia, 2010)

Apigenin adalah senyawa aktif dalam seledri yang termasuk dalam

kelas flavon, berupa kristal jarum kuning yang tidak larut dalam air, agak

larut dalam etanol panas, larut dalam larutan alkalis, apigenin adalah

aglikon dari apiin.

Apigenin yang terdapat pada tanaman seledri, diketahui memiliki

banyak khasiat, beberapa penelitian melaporkan khasiat apigenin, antara

lain :

Mencherini et al., (2007) menyebutkan bahwa apigenin berkhasiat

sebagai antiradang.

Liu et al., (2008) menyebutkan bahwa apigenin mempunyai aktivitas

sebagai antiinfluenza.

Ko et al., (1991) menyebutkan bahwa apigenin dapat menghambat

kontraksi cincin arteri tikus, jadi dapat bersifat sebagai vasodilator.

Torkin et al., (2005) menyebutkan bahwa apigenin mampu mencegah

pertumbuhan dan menimbulkan apoptosis dari sel neuroblastoma pada

manusia.


7


2.1.4.2 Apiin

Gambar 2.3 Struktur Kimia Apiin (ChEBI, 2010)

Apiin adalah senyawa aktif yang terdapat pada tanaman seledri,

merupakan suatu glikosida, aglikon dari apiin adalah apigenin.

Seperti apigenin, apiin juga dilaporkan memiliki banyak khasiat,

diantaranya adalah :

Mencherini et al., (2007) menyebutkan bahwa apiin, seperti halnya

apigenin mempunyai khasiat sebagai antiradang.

Occhiuto et al., (2006) menyebutkan bahwa apiin berkhasiat sebagai

antiaritmia dan antiiskemi.

2.1.4.3 Kumarin

Gambar 2.4 Struktur Kimia Kumarin (Friedli ,2010)

Kumarin adalah suatu senyawa benzo-alpha- pyrones (lakton dari

asam o-hidroksinamat) yang terbentuk dari jalur sikimat. Kumarin dalam

tanaman memiliki satu gugus hidroksil atau gugus metoksi pada C7,

substitusi ini terdapat pada scopoletin, aesculetin dan umbelliferon yang


8


terdapat dalam jumlah besar pada tumbuhan dan sering terdapat dalam

bentuk glikosida (Friedli,2010).

Kumarin mempunyai bau yang mirip dengan vanilla dan terdapat pada

banyak tanaman antara lain pada wortel dan seledri.

Kumarin disebutkan mempunyai aktivitas, antara lain :

Sebagai antiradang, antiodema, meningkatkan kekebalan tubuh,

antihipertensi, dismenorae dan sebagai antikanker (Mills et al., 2000).

Arora and Mathur (1963) menyebutkan bahwa kumarin bersifat

sebagai antikoagulan.

Peneliti lain (Teixeria et al.,) menyebutkan bahwa kumarin bersifat

sebagai antioksidan.

2.1.5 Efek Samping dan Efek Tidak Dikehendaki

Apium graveolens [Jacq.] Lag dikontraindikasikan untuk pasien

penderita inflamasi ginjal karena minyak esensialnya dalam jumlah

tertentu menghasilkan efek iritasi pada epithelial. Kandungan

furanokumarin dapat menyebabkan fotodermatitis atau alergi, tapi hal ini

jarang sekali terjadi (Czygan et al., 1994).

2.2 Sonchus arvensis L. (Steenis, 1997)

2.2.1. Klasifikasi Tanaman

Dunia : Plantae

Divisi : Spermatophyta

Sub divisi : Angiospermae

Kelas : Dicotyledonae

Bangsa : Asterales

Suku : Asteraceae

Marga : Sonchus

Jenis : Sonchus arvensis L.


9


2.2.2. Deskripsi Tanaman

Gambar 2.5 Sonchus arvensis L.

Sonchus arvensis L. merupakan terna tahunan, tinggi 1-2 m, akar

tunggang yang kokoh, batang berusuk, bergetah putih. Daun bagian

bawah terpusar membentuk roset, bentuk lonjong dan lanset, berlekuk

menjari atau berlekuk tidak teratur, pangkal daun berbentuk panah atau

jantung, ujung daun bercuatan pendek, panjang daun 6-48 cm, lebar

daun 10 cm, daun bagian atas lebih kecil, duduknya berjauhan dan

bergantian serta memeluk batang. Perbungaan berbentuk bonggol yang

bergantung dalam malai, bonggol bunga berukuran 2-2,5 cm, panjang

gagang bonggol 1-8 cm, mahkota bunga panjangnya 2-2,5 cm, mula-

mula berwarna kuning terang, lama kelamaan berwarna merah

kecoklatan. Biji panjang 4-4,5 mm, berusuk.

2.2.3. Kandungan Kimia

Sonchus arvensis L. mengandung senyawa flavonoid dengan

kandungan utama 7-glukosilluteolin, komponen lain 7-glukosilapigenin,

kaemferol, senyawa kumarin dan garam kalium (Badan POM RI, 2004).


10


2.2.4. Efek Farmakologi

2.2.4.1 Cynaroside

Gambar 2.6 Struktur Kimia 7-glukosilluteolin (cynaroside)(Chemical Book,2010)

Cynaroside adalah senyawa aktif yang banyak terdapat dalam tanaman

tempuyung, termasuk flavonoid golongan flavon.

Penelitian yang pernah dilakukan menyebutkan bahwa cynaroside

berkhasiat sebagai antikolesterol (Gebhart, 2002). Odontuya (2005)

menyebutkan bahwa cynaroside berkhasiat sebagai antiradang.

2.2.5. Efek Samping

Tanaman tempuyung (Sonchus arvensis L.) sampai saat ini belum

diketahui efek sampingnya.

2.3. Klorofil dan Sifat-sifatnya

Klorofil adalah suatu kelompok pigmen yang terdapat didalam kloroplas

tanaman dan menyerap cahaya sebagai energi untuk berlangsungnya proses

fotosintesis. Sebagian besar klorofil terdapat pada daun sehingga disebut zat

hijau daun. Klorofil terdapat juga pada seluruh jaringan tanaman yang berwarna

hijau seperti pada batang, akar, buah dan biji dalam jumlah terbatas. Jika diamati

lebih lanjut ternyata klorofil memiliki struktur yang mirip dengan struktur

hemoglobin, perbedaannya terletak pada atom pusat dari molekul, klorofil


11


mempunyai atom pusat Magnesium (Mg) sedangkan hemoglobin mempunyai

atom pusat besi (Chandra et al., 2010; Bahri , 2007). Magnesium yang terdapat

dalam klorofil bersifat sebagai relaksan otot, bekerja sebagai kalsium antagonis

pada otot jantung dan ujung syaraf, serta menghambat pelepasan hormon

paratiroid yang mengakibatkan penurunan kadar kalsium dan menimbulkan

relaksasi otot. Magnesium juga bersifat menghambat pelepasan katekolamin

sehingga bersifat sebagai antikejang dan vasodilator (Osalusi et al., 2008).

Klorofil bersifat non polar sehingga tidak larut dalam air, bila terdapat air,

akan menyebabkan klorofil yang terdapat di dalamnya mengalami proses

agregasi. Proses agregasi tersebut disebabkan pusat logam magnesium yang

bersifat nukleofilik dapat membentuk ikatan hidrogen dengan air yang bersifat

elektrofilik, kemudian satu atom hidrogen yang lain akan mengikat monomerik

klorofil lain atau senyawa lain seperti protein atau pigmen lain sehingga akan

membentuk agregat. Jika jumlah air cukup banyak, maka ikatan tersebut akan

terus menerus dan akan membentuk agregat yang lebih besar (Saptono, 2010).

Penggunaan klorofil dalam jangka panjang dapat mengakibatkan diare, mual dan

muntah, maka tidak dianjurkan untuk wanita hamil dan wanita yang sedang

menyusui, pada beberapa orang dapat menimbulkan reaksi alergi (Healthline,

2010).

Berdasarkan sifat klorofil yang non polar, maka pada penelitian ini

dilakukan purifikasi campuran ekstrak seledri dan tempuyung dengan

penyaringan menggunakan pelarut air, untuk melihat apakah klorofil dapat

mengurangi aktivitas antihipertensi dari campuran ekstrak tersebut, karena

klorofil dapat membentuk agregat yang mungkin bisa menghambat proses

adsorpsi dari campuran ekstrak herba seledri dan ekstrak daun tempuyung.


12


2.3.1. Struktur Kimia Klorofil.

Klorofil adalah suatu pigmen klorin yang mempunyai beberapa rantai

samping yang berbeda, yang paling banyak terdapat dalam tumbuhan

adalah klorofil a yang ditemukan oleh Hans Fischer pada tahun 1940.

Klorofil a dan b banyak terdapat pada tumbuhan tingkat tinggi,

klorofil a dan c banyak terdapat pada alga cokelat, sedangkan klorofil a dan

d banyak terdapat pada alga merah.

Gambar 2.7 Struktur Kimia Klorin (Real, 2010)

Penelitian selanjutnya menghasilkan bermacam-macam klorofil

seperti yang terdapat pada tabel 2.1.

Tabel 2.1 Perbedaan Struktur Klorofil (Citizendia Dictionary, 2010)

Chlorophyll a Chlorophyll bChlorophyllc1

Chlorophyllc2

Chlorophyll d Chlorophyll f

Molecularformula

C55H72O5N4Mg C55H70O6N4Mg C35H30O5N4Mg C35H28O5N4Mg C54H70O6N4Mg C55H70O6N4Mg

C2 group -CH3 -CH3 -CH3 -CH3 -CH3 -CHO

C3 group -CH=CH2 -CH=CH2 -CH=CH2 -CH=CH2 -CHO -CH=CH2

C7 group -CH3 -CHO -CH3 -CH3 -CH3 -CH3

C8 group -CH2CH3 -CH2CH3 -CH2CH3 -CH=CH2 -CH2CH3 -CH2CH3

C17 group-CH2CH2COO-Phytyl

-CH2CH2COO-Phytyl

-CH=CHCOOH

-CH=CHCOOH

-CH2CH2COO-Phytyl

-CH2CH2COO-Phytyl

C17-C18bond

Single Single Double Double Single Single


13


Gambar 2.8 Klorofil a dan b (Bil 226-Lecture 10)

Gambar 2.9 Klorofil c1(Mc Graw Hill Encyclopedia, 2010)


14


Gambar 2.10 Klorofil c2 (Museum of Learning,2010)

Gambar 2.11 Klorofil d (Citizendia Dictionary,2010)

2.4. Hipertensi

2.4.1.Definisi dan Klasifikasi

Hipertensi adalah kenaikan tekanan arterial di atas nilai relatif

normal.Tekanan darah di atas nilai 140/90 mm Hg dikatakan tekanan darah

tinggi (hipertensi), pengukuran tekanan darah didasarkan pada pengukuran

tekanan darah sistolik dan diastolik. Klasifikasi tekanan darah manusia

dewasa, menurut The Joint National Committee on the Prevention,


15


Detection, Evaluation and Treatment of High Blood Pressure ke 7 (JNC7)

dalam Hadiyanto (2009) dapat dilihat pada tabel 2.2.

Tabel 2.2 Klasifikasi Tekanan Darah Manusia Dewasa Pada JNC 7

Klasifikasi Tekanan Darah TDS(mmHg)

TDD(mmHg)

NormalPre hipertensiHipertensi stadium 1Hipertensi stadium 2

160

danatauatauatau

100

2.4.2.Etiologi (Hadiyanto, 2009)

Berdasarkan etiologinya, hipertensi dibagi atas hipertensi esensial

dan hipertensi sekunder.

a. Hipertensi esensial, juga disebut hipertensi primer atau idiopatik,

adalah hipertensi yang tidak jelas penyebabnya, lebih dari 90 % kasus

hipertensi termasuk dalam kelompok ini. Penyebab hipertensi esensial

adalah multifaktor yang terdiri dari faktor lingkungan dan genetik.

Faktor genetik ini dapat berupa sensitivitas terhadap garam natrium,

kepekaan terhadap stres, peningkatan terhadap vasokonstriktor dan

resistensi insulin. Paling sedikit ada tiga faktor lingkungan pemicu

hipertensi, yaitu makan garam (natrium) berlebih, stres dan obesitas.

b. Hipertensi sekunder prevalensinya hanya 5-8 % dari seluruh penderita

hipertensi. Hipertensi sekunder dapat disebabkan karena penyakit

ginjal (hipertensi renal), penyakit endokrin (hipertensi endokrin), obat

dan penyakit lain.

2.4.3. Implikasi-implikasi Terapeutik (Katzung, 2001)

Terapi antihipertensi pada umumnya tidak langsung ditujukan pada

penyebab khusus, tetapi bergantung pada pengaruhnya terhadap


16


mekanisme fisiologis normal yang meregulasi tekanan darah. Terapi

antihipertensi diberikan pada pasien yang asimtomatis, terapi tersebut tidak

dapat langsung meredakan rasa tidak nyaman, tetapi keuntungannya

terletak pada pencegahan penyakit dan kematian pada masa yang akan

datang. Masalah yang dihadapi adalah kepatuhan pasien pada terapi, karena

pemberian obat antihipertensi biasanya dalam suatu regimen dan jangka

waktu yang lama, sehingga banyak pasien merasa tidak nyaman karena

harus terus menerus minum obat. Pemberian obat antihipertensi tidak sama

pada setiap pasien, karena setiap penderita hipertensi mempunyai

karakteristik sendiri, sehingga tidak ada model tunggal pengobatan yang

sesuai untuk digunakan penderita hipertensi secara umum.

2.4.4.Pendekatan pada penderita Hipertensi (Katzung, 2001)

2.4.4.1. Modifikasi Gaya Hidup

Terapi non farmakologik untuk hipertensi dapat dilakukan

dengan cara :

a. Mengurangi berat badan.

b. Diet rendah garam dan lemak jenuh, tingkatkan konsumsi buah-

buahan, sayur-sayuran, kurangi produk lemak.

c. Olah raga

d. Berhenti merokok

e. Kurangi konsumsi alkohol yang berlebihan (>30 mL alkohol per

hari)

Terapi non farmakologik dapat menurunkan tekanan darah

sama dengan obat antihipertensi, disamping itu dapat mencegah onset

dan atau progresivitas hipertensi. Sensivitas setiap pasien berbeda-

beda, misalnya dengan mempertahankan berat badan normal dan

meningkatkan aktivitas fisik dapat menurunkan tekanan darah pada

hampir semua individu yang kurang aktivitas atau kelebihan berat


17


badan, sedangkan pembatasan asupan natrium dapat menurunkan

tekanan darah pada penderita hipertensi yang termasuk ’salt sensitive’.

Terapi non farmakologik relatif aman dibandingkan dengan

pemakaian obat-obatan, tetapi mempunyai keterbatasan, yaitu reduksi

darah kecil dan kurangnya kepatuhan pasien dalam mengkonsumsi

obat antihipertensi.

2.4.4.2 Pengobatan dengan Obat Antihipertensi (Hadiyanto,2009)

Pengobatan antihipertensi bertujuan untuk menurunkan

tekanan darah di bawah 140/90 mm Hg. Pada pengobatan awal dapat

digunakan monoterapi dengan satu obat, jika perlu dosis dapat

ditingkatkan secara gradual sampai pada tingkat efektivitas atau timbul

efek samping terbatas. Walaupun monoterapi dapat meningkatkan

kepatuhan pasien, dua per tiga pasien memerlukan lebih dari satu jenis

obat. Jika digunakan dua atau lebih jenis obat, harus dipilih obat

dengan mekanisme fisiologik yang berbeda, misalnya lebih

menguntungkan mengkombinasikan diuretik dengan vasodilator

daripada menggunakan dua jenis obat yang sama-sama bekerja

mengurangi kontraksi otot polos.

Pemilihan obat pada hipertensi esensial selain perlu diperhatikan

umur, ras, riwayat penyakit kardiovaskuler, merokok, obesitas dan

juga aktivitas yang berkurang (sedentary life), juga perlu diperhatikan

adanya penyakit lain seperti penyakit ginjal, penyakit jantung iskemik,

gagal jantung, stroke terdahulu atau diabetes, masing-masing faktor

tersebut harus dipertimbangkan.

Diuretik dapat diindikasikan sebagai terapi awal pada hipertensi

tanpa komplikasi,biasanya dikombinasikan dalam dua atau lebih jenis

obat. Penggunaan obat multipel biasanya menimbulkan kerja

sinergistik, sehingga memungkinkan pengurangan dosis obat dan juga


18


mengurangi efek samping. Jika diuretik tidak dapat digunakan atau

terdapat indikasi mendesak (compelling indication), maka pergantian

dengan obat lain dipertimbangkan untuk monoterapi atau

dikombinasikan dengan diuretik.

2.4.5. Mekanisme Kerja

a. Diuretik

Diuretik adalah obat yang bekerja untuk meningkatkan volume urin

pada ginjal karena menyebabkan ekskresi natrium dan mengurangi volume

darah dengan menghambat transport elektrolit di dalam tubulus renal,

karena itu sering disebut natriuretik. Diuretik yang paling sering digunakan

adalah diuretic golongan tiazid, diuretik loop dan antagonis reseptor

aldosteron (Katzung, 2001).

Tiazid menghambat kotransporter natrium/kalium/klorida pada ginjal

dan menimbulkan diuresis, natriuresis dan kaliuresis, bermanfaat terutama

pada penderita dengan fungsi ginjal yang baik dan merupakan diuretik

yang paling banyak digunakan pada penderita hipertensi, diuretik ini

menurunkan tekanan darah melalui ekskresi natrium dan air. Pada

pemberian pertama kali pada pasien, obat ini mengurangi volume darah

sehingga curah jantung berkurang. Pemberian obat ini dalam jangka waktu

beberapa minggu atau bulan, dapat menurunkan tekanan darah perifer,

oleh karena itu dapat digunakan untuk pengobatan jangka panjang (gambar

2.12). Penurunan tahanan perifer disebabkan karena reduksi natrium dalam

sel otot polos, sehingga mengurangi kontraksi otot sebagai respon terhadap

zat vasopressor (Hadiyanto, 2009).

Diuretik loop bekerja menghambat transpor elektrolit pada ginjal dan

bermanfaat pada penderita dengan gangguan ginjal dan yang resisten

terhadap tiazid. Diuretik loop mempunyai efek diuresis yang lebih kuat

daripada tiazid, tapi masa kerjanya lebih singkat, jadi pemberian dosis


19


dilakukan dua kali atau lebih dalam sehari. Kedua sediaan ini dapat

menyebabkan berkurangnya ion kalium, untuk mengatasinya dapat

diberikan diuretik hemat kalium yang bekerja sebagai antagonis reseptor

aldosteron pada ginjal, dapat menghambat reabsorpsi natrium sehingga

tidak terjadi hipokalemia, diuretik hemat kalium dapat menimbulkan

natriuresis dan mempunyai sifat hipotensif ringan (Hadiyanto,2009).

Gambar 2.12 Cara Kerja Diuretik Tiazid


20


b. Simpatolitik

Sistem saraf simpatis memegang peranan penting dalam mengatur

tekanan darah. Simpatolitik dapat menurunkan tekanan darah melalui

hambatan terhadap pusat vasomotor di otak dengan mengurangi tonus

simpatis secara sentral. Secara perifer simpatolitik dapat bekerja terhadap

neurotransmiter pada ganglion presinaptik atau postsinaptik, atau pada

reseptor yang diaktivasi epinefrin dan norepinefrin. Simpatolitik yang

sering digunakan dalam pengobatan hipertensi adalah antagonis reseptor

adrenergik-β dan agonis reseptor-α2 yang bekerja di sentral (Hadiyanto,

2009).

Antagonis reseptor adrenergik-β (β-blocker) digunakan secara luas

dalam pengobatan hipertensi karena obat ini relatif aman dan efektif pada

pasien. Obat ini jarang menimbulkan efek samping dan dapat

dikombinasikan dengan obat antihipertensi lainnya untuk mendapatkan

penurunan tekanan darah lebih besar. Sebagai obat antihipertensi β-blocker

bekerja dengan mengurangi curah jantung, menghambat pelepasan renin

dan produksi angiotensin II, blokade terhadap presinaptik α-adrenoseptor

yang meningkatkan pelepasan norepinefrin dari terminal saraf simpatis dan

mengurangi aktivitas vasomotor sentral (Hadiyanto,2009)

Agonis reseptor-α2 adalah suatu simpatolitik yang bisa bekerja sentral

atau bekerja di perifer, simpatolitik yang bekerja secara sentral mengurangi

aktivasi rangsangan saraf simpatis yang dimediasi oleh aktivasi reseptor

adrenergik-α2 di susunan saraf pusat, sedangkan yang bekerja di perifer

dapat menurunkan tekanan darah dengan mengganggu sintesis,

penyimpanan dan atau pelepasan norepinefrin dari terminal saraf simpatis

(Hadiyanto, 2009).


21


c. Penghambat Angiotensin

Penghambat angiotensin termasuk ACE inhibitor (penghambat enzim

konversi angiotensin) dan angiotensin receptor blocker (ARB)

diindikasikan untuk pengobatan hipertensi dengan penyakit kardiovaskuler

dan diabetes. ACE inhibitor dapat menurunkan tekanan darah dengan

menghambat konversi angiotensin I menjadi angiotensin II. Angiotensin

inhibitors dapat menurunkan kadar angiotensin II plasma dan sangat

penting dalam pengobatan hipertensi, karena angiotensin II berperan dalam

sejumlah respon yang dapat meninggikan tekanan arterial dan fungsi renal,

sehingga angiotensin II memberikan kontribusi terhadap patogenesis

hipertensi, penyakit arterial, gagal jantung dan penyakit renal diabetik.

(Hadiyanto, 2009).

Gambar 2.13 Renin Angiotensin Aldosteron System


22


Gambar di atas menunjukkan pelepasan renin merangsang konversi

angiotensinogen (dari hati) menjadi angiotensin I, yang selanjutnya

dikonversi ke angiotensin II oleh angiotensin converting enzyme (ACE).

Angiotensin II menyebabkan vasokontriksi, pelepasan aldosteron dari

korteks adrenal dan retensi natrium, akibatnya tekanan darah meningkat

dan terjadi penurunan renin, sehingga terjadi proses homeostatis (Page

et al.,2006).

d. Vasodilator ( Penghambat Kanal Kalsium)

Vasodilator langsung menurunkan tekanan darah dengan merelaksasi

otot polos vaskular sehingga mendilatasi pembuluh darah resistans dan

pada berbagai tingkat meningkatkan kapasitans pula. (Hadiyanto, 2009).

Mekanisme kerja penghambat kanal kalsium adalah hambatan

terhadap masuknya kalsium ke dalam otot jantung dan otot polos arteri.

Hambatan terhadap otot jantung menyebabkan efek inotropik negatif dan

terhadap otot polos menyebabkan relaksasi, dengan mengurangi

kontraktilitas otot jantung dan otot polos, obat ini dapat digunakan sebagai

obat antihipertensi dan antiangina, juga menyebabkan depresi otot jantung

(Hadiyanto,2009; Katzung, 1998).

2.4.6. Pengukuran Tekanan Darah (Hadiyanto, 2009; Kelompok Kerja Ilmiah,

1993)

Pengukuran tekanan darah dilakukan untuk menilai kesehatan

kardiovaskuler, termasuk skrining hipertensi dan monitoring pengobatan

pasien hipertensi. Pengukuran dilakukan secara tidak langsung, karena itu

cara pengukuran sangat penting untuk memastikan pengukuran yang benar,

dapat dipercaya dan menuntun pengobatan. Ketepatan dalam pengukuran

darah secara berulang merupakan dasar penegakan diagnostik sekaligus

keputusan dalam pengobatan. Pengukuran tekanan darah dilakukan dalam


23


posisi pasien duduk bersandar dengan meletakkan tangan di atas meja atau

berbaring.

Dengan menggunakan manset sesuai dengan ukuran lengan, manset

kemudian dililitkan pada lengan atas kira-kira 2 cm di atas siku, kemudian

meletakkan stetoskop di atas arteri brakialis. Tekanan dinaikkan dengan

memencet alat pompa sampai 20-30 mm Hg di atas tekanan sistolik,

kemudian tekanan diturunkan dengan kecepatan 2 mm Hg per detik sambil

mendengar bunyi Korotkoff. Turbulensi aliran darah dalam arteri brakialis

menyebabkan bunyi Korotkoff yaitu bunyi yang dihasilkan oleh gelombang

pulsasi arteri, saat munculnya bunyi Korotkoff dicatat sebagai tekanan

sistolik dan saat hilangnya bunyi Korotkoff dicatat sebagai tekanan

diastolik.

Pengukuran tekanan darah pada hewan bisa secara langsung dan tidak

langsung, yang sering dilakukan adalah cara langsung. Hewan dianestesi

terlebih dahulu, kemudian ke dalam arteri karotid dimasukkan sebuah

kanula yang dihubungkan dengan alat manometer untuk mengetahui

tekanan darahnya.

Pengukuran tekanan darah pada hewan secara tidak langsung dapat

dilakukan dengan menggunakan alat” Rat tail blood pressure monitoring

system”, cara kerjanya mirip dengan pengukuran tekanan darah pada

manusia, dimana hewan coba (tikus) dimasukkan ke dalam tempat yang

seukuran badannya, kemudian didiamkan selama 10 menit supaya hewan

percobaan tenang, setelah itu ekor tikus dimasukkan ke dalam cuff (mirip

manset) dan tekanan dinaikkan sampai di atas tekanan sistolik, tekanan

diturunkan perlahan-lahan dan alat pada monitor akan mulai bekerja,

tekanan sistolik dapat dibaca pada grafik yang keluar dari alat monitor.

Alat ini mempunyai kelebihan yaitu hewan coba tidak perlu dibunuh dan

hasil pengukuran cukup akurat.


24


2.4.7. Induksi Pada Hewan Percobaan (Kelompok Kerja Ilmiah, 1993;

Wresdining Tyas, 2007)

Untuk penapisan terarah aktivitas farmakologik antihipertensi, dapat

digunakan tikus yang hipertensif. Keadaan hipertensi pada hewan dapat

dibuat dengan induksi pada hewan percobaan. Ada berbagai cara untuk

menginduksi, antara lain dengan pemberian larutan Natrium Klorida

(NaCl) 2-2,5 % pada tikus, dimana setelah 6 minggu rata- rata tekanan

darahnya meningkat. Pada hipertensi renal hewan coba dapat diinduksi

dengan cara menjepit atau mengikat arteri renalis tikus. Hipertensi renal

juga dapat terjadi apabila dilakukan penekanan pada ginjal dengan cara

membungkusnya dengan selofan.

2.5. Ekstraksi

Di dalam Depkes RI (2000b) disebutkan bahwa ekstraksi adalah kegiatan

penarikan kandungan kimia yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan-

bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair, sedangkan ekstrak adalah

sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi senyawa aktif dari

simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai,

kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk

yang tersisa diperlakukan sedemikian rupa sehingga memenuhi baku yang

ditetapkan (Depkes, 1995).

Metode ekstraksi dapat dilakukan dengan beragam cara, salahsatunya

dengan menggunakan metode maserasi, yaitu ekstraksi cara dingin, dilakukan

dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari, kemudian

dilakukan pengocokan beberapa kali secara kontinyu yang bertujuan untuk

mencapai konsentrasi yang seimbang, sehingga proses pelarutan zat aktif yang

terdapat di dalam sel tanaman akan berlangsung lebih cepat, proses ini

dilakukan berulang kali sampai terjadi keseimbangan antara larutan di luar

dengan di dalam sel.


25


2.6 Kromatografi

Kromatografi adalah suatu teknik pemisahan campuran berdasarkan

perbedaan kecepatan perambatan komponen dalam medium tertentu. Metode

kromatografi dipakai secara luas untuk pemisahan analitik dan preparatif,

hampir setiap campuran kimia mulai dari yang berbobot molekul rendah sampai

tinggi, dapat dipisahkan menjadi komponen-komponennya dengan beberapa

metode kromatografi.

Jenis pemisahan, baik pemisahan analitik maupun preparatif tidak

didasarkan pada ukuran cuplikan, tapi lebih didasarkan untuk keperluan khusus.

Kromatografi analitik biasanya digunakan pada tahap permulaan untuk semua

cuplikan dan kromatografi preparatif hanya dilakukan bila diperlukan fraksi

murni dari campuran (Gritter et al., 1991).

Pemisahan kromatografi dilakukan dengan memperhatikan sifat-sifat

fisika umum dari suatu molekul, seperti :

a. Kecenderungan molekul untuk melarut dalam cairan (kelarutan).

b. Kecenderungan molekul untuk melekat pada permukaan serbuk halus

(adsorpsi, penjerapan).

c. Kecenderungan molekul untuk menguap atau berubah ke dalam bentuk uap

(keatsirian).

Pada sistem kromatografi, campuran yang akan dipisahkan, ditempatkan

dalam keadaan sedemikian rupa sehingga komponen-komponennya harus

menunjukkan dua dari ketiga sifat tersebut (Gritter et al., 1991).

2.6. 1 Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi lapis tipis adalah suatu teknik pemisahan campuran

berdasarkan perbedaan kecepatan perambatan komponen dalam medium

tertentu. Komponen- komponen zat aktifnya dipisahkan antara dua buah

fasa yaitu fasa diam yang akan menahan komponen dan fasa gerak yang

akan melarutkan dan membawa komponen zat aktif. Komponen yang


26


mudah tertahan pada fasa diam akan tertinggal pergerakannya

dibandingkan dengan komponen yang mudah larut dalam fasa gerak.

Menurut Stahl (1985), fasa diam dapat berupa fasa polar maupun non

polar, diantaranya silika gel, alumina, kieselguhr, magnesium silikat,

selulosa dan resin. Silika gel merupakan fasa diam yang dapat digunakan

sebagai fasa polar maupun non polar. Sebagai fasa polar, merupakan

silika yang dibebaskan dari air, bersifat sedikit asam, sedangkan sebagai

fasa non polar digunakan silika yang dilapisi dengan senyawa non polar,

misalnya lemak, parafin, atau lilin.

Fasa gerak ialah medium penggerak dan terdiri atas satu atau

beberapa pelarut. Sistem pelarut ini harus berupa campuran sesederhana

mungkin, maksimum tiga komponen pelarut. Jarak pengembangan

senyawa pada kromatogram biasanya dinyatakan dengan Rf atau hRf ,

yaitu perbandingan antara jarak tempuh komponen aktif senyawa dari

titik awal dengan jarak tempuh fasa gerak.

Rf = Jarak titik pusat bercak dari titik awalJarak garis depan dari titik awal

Angka Rf berjangka antara 0,00 dan 1,00, hanya ditentukan dua

desimal, sedangkan hRf adalah angka Rf dikalikan faktor 100 (h)

sehingga menghasilkan nilai berjangka 0 sampai 100. Jika dipilih 10 cm

sebagai jarak pengembangan, maka Rf dikalikan 10 menjadi harga hRf,

karena Rf merupakan fungsi sejumlah faktor, angka ini dipakai sebagai

petunjuk saja, untuk menunjukkan letak suatu senyawa pada suatu

kromatogram digunakan hRf (Stahl, 1985).

Untuk mendeteksi senyawa yang terdapat pada kromatogram, dapat

dilakukan dengan berbagai cara, antara lain :


27


a. Fluoresensi dengan lampu UV.

Cara ini merupakan alat deteksi yang paling sederhana, jika senyawa

menunjukkan penyerapan di daerah UV gelombang pendek (radiasi

utama pada kira-kira panjang gelombang 254 nm) atau jika senyawa

itu dapat dieksitasi ke fluoresensi radiasi UV gelombang pendek dan

atau gelombang panjang (365 nm).

b. Deteksi dengan pereaksi kimia.

Bila senyawa tidak terdeteksi dengan menggunakan sinar UV, maka

dapat digunakan pereaksi kimia dengan cara penyemprotan untuk

menampakkan bercak senyawa, pertama dilakukan tanpa pemanasan

dan bila perlu dapat dilakukan pemanasan karena pembentukan warna

yang optimum seringkali memerlukan peningkatan suhu dalam waktu

yang tertentu.

c. Deteksi biologi.

Deteksi biologi dapat dilakukan untuk senyawa-senyawa yang secara

khas mempunyai aktivitas fisiologi tertentu. Prosedur tersebut meliputi

deteksi langsung pada pelat KLT dan pengerokan bercak

kromatogram, kemudian dialihkan ke deteksi biologi.

2.7 Flavonoid

Flavonoid adalah senyawa yang terdiri dari C6-C3-C6, terdiri atas dua inti

fenolat yang dihubungkan dengan tiga satuan karbon. Cincin A memiliki

karakteristik bentuk hidroksilasi phloroglusinol atau resorsinol dan cincin B

biasanya 3’,4’,5’ terhidroksilasi.


28


Gambar 2.14 Kerangka Dasar Flavonoid (Friedli,2010)

Flavonoid umumnya terdapat dalam tumbuhan dan merupakan zat warna

tumbuhan, jarang terdapat sebagai senyawa tunggal, pada umumnya terdapat

dalam bentuk campuran dan terikat pada gula sebagai glikosida dan aglikon

flavonoid. Gugus hidroksil selalu terdapat pada karbon no. 5 dan no. 7 pada

cincin A, pada cincin B gugusan hidroksil atau alkoksil terdapat pada karbon

no. 3´ dan no. 4´.

Senyawa ini terdapat dalam semua tumbuhan berpembuluh, tetapi hanya

beberapa kelas yang tersebar lebih banyak dalam tanaman, misalnya flavon dan

flavonol, sedangkan isoflavon dan biflavonol hanya terdapat pada beberapa suku

tumbuhan (Harborne, 1987). Pada saat ini lebih dari 2000 jenis flavonoid yang

terdapat dalam bentuk bebas (aglikon) sisanya terdapat dalam bentuk O atau C

glikosida.

Flavonoid merupakan senyawa fenol, sehingga larut dalam air (bersifat

polar), bila diberi senyawa yang bersifat basa atau ammonia, akan berubah warna

sehingga mudah dideteksi pada kromatogram atau dalam larutan. Flavonoid

mengandung sistem aromatik yang terkonjugasi, oleh karena itu menunjukkan

pita serapan yang kuat pada daerah spektrum UV dan spektrum tampak.

Menurut Sirait (2007) semua flavonoid, merupakan turunan senyawa induk

flavon dan dikenal sekitar 11 kelas flavonoid, yaitu : flavon, flavonol, flavanon,

flavanonol, isoflavon, calkon, dihidrokalkon, auron, antosianidin,katekin, flavan-

3,4-diol


29


Gambar 2.15 Struktur Kimia Golongan Flavonoid (Sirait,2007)

Dari klasifikasi di atas, ada 3 kelas yang paling banyak terdapat di alam, yaitu

flavon, flavonol dan flavonon.


30


Tabel 2.3 Sifat Berbagai Golongan Flavonoid

Golongan Flavonoid Penyebaran Ciri khasAntosianin Zat warna merah tua,

merah, biru kehijauandan biru pada bunga,daun dan jaringan lain

Larut dalam air, λmaks 515-545nm..

Flavonol Merupakan co-pigmen pada bunga,tersebar luas padadaun berwarna kuning

Sesudah dihirolisis oleh asam,bercak berwarna kuning terangdengan sinar UV padakromatogram maks 350-386 nm.

Flavon Seperti flavonol Sesudah dihidrolisis oleh asam,bercak berwarna coklat padakromtaogram maks 330-350 nm

Calkon Zat warna kuningpada bunga, kadangterdapat pada jaringanlain.

Memberikan warna merahdengan ammonia maks 370-410nm

Iso flavon Sering terdapat dalamakar, hanya terdapatdalam familiaLeguminosae. Tidakberwarna

Tidak ada reaksi yang khas.

Flavonoid mempunyai banyak kegunaan, antara lain :

1. Bagi Tumbuhan :

a. Untuk menarik serangga, yang membantu proses penyerbukan.

b. Untuk menarik perhatian binatang yang membantu penyebaran biji.

2. Bagi manusia :

a. Dosis kecil, flavon bekerja sebagai stimulan pada jantung, hesperidin

mempengaruhi pembuluh darah kapiler.

b. Flavon terhidroksilasi bekerja sebagai diuretik dan sebagai antioksidan

pada lemak.



BAB IIIMETODE PENELITIAN

3.1 Lokasi

Penelitian dilakukan di 3 tempat, proses ekstraksi dilakukan di

Laboratorium Fitokimia Farmasi FMIPA UI, Uji karakteristik kimia

dilakukan di Pusat Studi Biofarmaka IPB, pengukuran tekanan darah

dilakukan di Laboratorium Farmakologi Fakultas Kedokteran Hewan IPB.

3.2 Alat

Shaker, rotary evaporator (Janke & Kunkel), waterbath (Lab line), tanur

(Thermolyne), oven (Jumo), bejana kromatografi (Camag), lempeng silica gel

60 F2544, sonde lambung, kandang metabolit, Rat Tail Blood Pressure

Monitoring System (Harvard), Reprostar (Camag).

3.3 Bahan

3.3.1 Simplisia

Simplisia herba seledri varietas besar dengan panjang 30-40 cm

diperoleh dari pasar Bogor, daun tempuyung diperoleh dari kebun

F-MIPA UI dan sekitarnya, Depok. Kedua tanaman ini dideterminasi di

Kebun Raya Bogor.

Obat herbal pembanding yang digunakan adalah Tensigard yang

diperoleh dari Apotik Bogor Baru, Bogor.

3.3.2 Hewan Coba

Hewan yang digunakan dalam percobaan adalah tikus putih jantan

(Rattus novergicus) galur Sprague-Dawley yang berumur kurang lebih

2 bulan dan berbobot antara 135-225 gram, diperoleh dari Fakultas

Kedokteran Hewan IPB.

3.3.3 Bahan Kimia

Pelarut dan bahan kimia yang digunakan dalam penelitian ini yaitu

pelarut teknis etanol 96 % yang telah didestilasi, aquadest, pelarut p.a


32


antara lain asam klorida (Merck), asam sulfat (Merck), n- heksan

(Merck), metanol (Merck), n-butanol (Merck), kloroform (Merck),

asam asetat glasial (Merck)

3.4 Cara Kerja

3.4.1 Metode Penelitian

Penelitian ini menggunakan metode eksperimental

3.4.2 Rancangan Penelitian

Rancangan penelitian menggunakan Rancang Acak Lengkap

(RAL) dengan 9 kelompok perlakuan. Jumlah ulangan tikus yang

digunakan dalam setiap kelompok ditentukan berdasarkan rumus

Federer :

(t-1) (n-1) ≥ 15

Dimana, t = jumlah kelompok perlakuan hewan coba

n = ulangan tikus

beda perlakuan kelompok adalah 8 (t=8), jumlah minimum tikus yang

diperlukan untuk masing-masing kelompok yaitu 3 ekor, dalam

penelitian ini digunakan 4 ekor tikus untuk tiap kelompok sehingga

tikus yang dibutuhkan untuk seluruh kelompok yaitu n ≥ 4x8 ≥ 32 ekor

tikus.

3.4.3 Persiapan Hewan Coba

Hewan coba diaklimatisasi terlebih dahulu selama kurang lebih

dua minggu di laboratorium Farmakologi FKH IPB agar dapat

menyesuaikan diri dengan lingkungan baru.

3.4.4 Preparasi Ekstrak (Wresdining Tyas,2007; Depkes RI, 2000a)

Ekstrak herba seledri dan daun tempuyung dibuat dengan cara

maserasi dalam botol coklat yang terpisah, dengan pelarut yang sesuai

sampai seluruh serbuk terendam. Maserasi dilakukan secara total

dengan penggantian pelarut setiap 24 jam, sampai filtrat tidak berubah


33


warna lagi. Serbuk simplisia sebanyak 1500 gram, dibagi dalam empat

buah botol coklat dimaserasi dengan 1 L pelarut pada hari pertama,

kemudian dilakukan penggantian pelarut yang baru sebanyak 750 mL

pada hari-hari berikutnya. Pelarut yang digunakan adalah etanol 30 %

untuk seledri dan etanol 50 % untuk tempuyung.

Maserasi dilakukan dengan pengocokan berulang-ulang setiap jam

nya sebanyak 6 kali pengocokan, kemudian didiamkan selama 24 jam

Ekstrak hasil maserasi dipekatkan dengan rotary evaporator sampai

volumenya menjadi sepertiga volume awal, selanjutnya ekstrak tersebut

dipekatkan lagi dengan waterbath pada suhu 50o C sampai menjadi

ekstrak kental yang siap pakai (kadar air di bawah 10 %). Kemudian

masing-masing ekstrak disimpan dalam lemari pendingin 4-11o C

dalam wadah tertutup rapat.

3.4.5 Penetapan Dosis

Dosis yang digunakan yaitu dosis normal, berdasarkan hasil

penelitian sebelumnya (Wresdining Tyas, 2007) diperoleh dosis sbb :

a. Campuran 1, 75 % dari dosis awal (0,02 g ekstrak seledri dan 0,15

g ekstrak tempuyung/200 g bb tikus)

b. Campuran 2, dosis awal (0,036 g ekstrak seledri dan 0,206 g

ekstrak tempuyung/200 g bb tikus).

c. Campuran 3, 125 % dari dosis awal (0,045 g ekstrak seledri dan

0,25 g ekstrak tempuyung/200 g bb tikus)

d. Campuran 4/Purifikasi 2 ( Campuran 2 yang dipurifikasi dengan

penyaringan menggunakan pelarut aquadest).

e. Campuran 5/Purifikasi 3 (Campuran 3 yang dipurifikasi dengan

penyaringan menggunakan pelarut aquadest)

g. Sediaan herbal pembanding Tensigard (0,141 g tensigard /200 g bb

tikus).

Perhitungan dosis di atas adalah hasil konversi dari penelitian

sebelumnya, yaitu untuk rendemen seledri 26,92% dan rendemen

tempuyung 34,01 % (Wresdining Tyas, 2007). Pada percobaan ini


34


diperoleh rendemen seledri sebesar 25,11 % dan rendemen tempuyung

28,20 %, jadi perhitungan dosisnya dikonversikan sesuai dengan

rendemen sekarang, contoh :

Dosis campuran 1 (0,034 mg ekstrak seledri dan 0,171 mg esktrak

tempuyung/ 200 g bb tikus), maka dosis yang diperlukan :

Ekstrak seledri : 26,92/25,11 x 0,034 mg = 0,036 mg /200 g tikus

Ekstrak tempuyung : 34,01/28,20 x 0,171 mg = 0,206 mg/ 200 g tikus

Jadi untuk dosis awal digunakan dosis 0,036 mg ekstrak seledri dan

0,206 mg ekstrak tempuyung.

Perhitungan herbal standard (Tensigard)

Komposisi obat herbal yang digunakan sebagai pembanding yaitu

Tensigard , setelah dilakukan keseragaman bobot, diperoleh :

Dalam 1 kapsul 262,12 mg mengandung :

92 mg ekstrak seledri (Apium graveolens)

28 mg ekstrak daun kumis kucing (Orthosiphons staminae)

Dosis pengobatan pada manusia 3x1 kapsul/ hari

Perhitungan dosis untuk tikus :

Perhitungan dosis untuk tikus menggunakan rumus konversi dari

Lawrence & Bacharach (1964) dan rumus faktor keamanan dari Lu

(1995), yaitu :

Tikus dengan berat badan 200 gram, faktor farmakokinetik /faktor

keamanan 10 dan faktor konversi dari manusia ke tikus = 0,018.

Banyak obat herbal yang dibutuhkan :

0,262 x 0,018 x 10 x 3= 0, 141 g/200 g BB tikus per hari

3.4.6 Pembuatan Sediaan Uji.

Masing-masing ekstrak kental herba seledri dan daun tempuyung

ditimbang sesuai jumlah yang dibutuhkan ke dalam tempat yang sama,

kemudian campuran tersebut disuspensikan ke dalam CMC 0,5 %

sesuai dengan dosis yang akan diberikan, caranya sediaan digerus


35


dengan CMC 0,5 % dan diencerkan perlahan-lahan sambil

dihomogenisasi hingga mencapai volume suspensi yang diinginkan.

Suspensi ini dimasukkan ke dalam beberapa botol kecil dan

disimpan didalam freezer selama percobaan , hal ini dilakukan untuk

menjaga stabilitas suspensi tersebut , satu hari sebelum diberikan pada

hewan coba, satu botol suspensi dikeluarkan dari freezer dan disimpan

di lemari pendingin. Pemberian pada hewan coba dilakukan secara oral

dengan menggunakan teknik sonde.

3.4.7 Pembuatan CMC 0, 5 %

Sebanyak 500 mg CMC ditimbang seksama, kemudian ditaburkan

secara merata pada lumpang yang berisi air panas kurang lebih 20 kali

berat CMC, didiamkan selama 10 menit hingga CMC mengembang,

lalu digerus homogen dan ditambahkan aquadest sampai mencapai

volume 100 mL.

3.4.8 Pembuatan Larutan Natrium Klorida 2 %

Sebanyak 2 gram natrium klorida ditimbang seksama, kemudian

dimasukkan ke dalam labu takar 100 mL, ditambahkan aquadest sedikit

demi sedikit sampai tanda batas, dikocok berulangkali hingga larutan

menjadi homogen.

Pemberian larutan natrium klorida 2 % pada hewan coba dilakukan

secara oral dengan menggunakan teknik sonde, sebanyak 2 ml tiap 200

gram bb tikus.

3.4.9 Purifikasi Ekstrak

Sebanyak 1,48 g ekstrak herba seledri dan 11,17 g ekstrak daun

tempuyung (Campuran 1), 2,67 g ekstrak herba seledri dan 15,33 g

ekstrak daun tempuyung (Campuran 2) dan 3,375 g ekstrak herba

seledri dan 19,50 g ekstrak daun tempuyung (Campuran 3)ditimbang

seksama. Masing-masing campuran ekstrak dimasukan ke dalam

mortar, kemudian ditambahkan 25 ml aquadest dan digerus, disaring


36


berulang kali sampai filtrat tidak berwarna lagi, aquadest yang

dibutuhkan adalah 600 ml. Filtrat yang diperoleh dikeringkan dengan

menggunakan alat freeze dryer selama 48 jam sampai diperoleh ekstrak

kering. Pada saat akan digunakan serbuk ekstrak tersebut dibuat

suspensi dengan CMC 0,5 % dan diencerkan sampai volume yang

diinginkan. Sediaan ini dibuat untuk pemakaian selama 14 hari,

disimpan dalam beberapa botol kecil dan tertutup rapat kemudian

ditaruh di freezer, sehari sebelum digunakan dikeluarkan dari freezer

dan ditaruh di lemari pendingin sampai ekstrak siap digunakan.

3.5 Pengujian terhadap simplisia dan ekstrak

3.5.1 Parameter Non Spesifik

3.5.1.1 Kadar Air

Prosedur penentuan kadar air simplisia dan ekstrak dilakukan

dengan menggunakan alat moisture balance. Sebanyak 1 gram

simplisia/ekstrak disimpan di atas punch, kemudian diratakan sampai

menutupi permukaan punch, lalu ditutup, kemudian alat dinyalakan,

maka kadar air akan tertera secara otomatis pada alat setelah proses

penentuan kadar air selesai.

3.5.1.2 Kadar Abu Total

Lebih kurang 2-3 gram simplisia dan ekstrak ditimbang seksama ,

masukkan ke dalam krus silikat yang telah dipijarkan dan ditara . Zat

dipijar dalam tanur dengan suhu 600oC hingga arang habis, lalu

didinginkan dalam desikator dan ditimbang. Kadar abu dihitung

terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Depkes RI, 2000b).

3.5.1.3 Kadar Abu yang Tidak Larut Asam.

Abu yang diperoleh pada penetapan kadar abu, dilarutkan dalam 25

mL asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam

asam disaring melalui kertas saring bebas abu dan dipijar hingga bobot

tetap, kemudian ditimbang. Kadar abu yang tidak larut dalam asam


37


dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Depkes RI,

2000b).

3.5.1.4. Penetapan Susut Pengeringan

Lebih kurang 2 gram ekstrak ditimbang seksama dalam wadah

yang telah ditara. Keringkan pada suhu 105oC selama 5 jam dan

ditimbang. Pengeringan dilanjutkan pada jarak 1 jam sampai perbedaan

antara 2 penimbangan berturut-turut tidak lebih dari 0,25 % (Depkes

RI, 2000b).

3.5.2 Parameter spesifik

3.5.2.1 Identitas

Parameter identitas simplisia dinyatakan dengan menguraikan

deskripsi tata nama meliputi nama simplisia, nama latin tanaman,

bagian tanaman yang digunakan dalam bahasa Indonesia.

3.5.2.2 Organoleptik

Parameter ini dilakukan dengan menggunakan pancaindera dalam

mendeskripsikan bentuk, bau dan warna simplisia/ekstrak tersebut.

3.5.2.3 Senyawa Terlarut Dalam Pelarut Tertentu

a. Kadar Senyawa yang Larut Dalam Air.

Sebanyak 2 gram ekstrak dimaserasi selama 24 jam dengan 100

mL air-kloroform (1:1) menggunakan labu bersumbat sambil berkali-

kali dikocok selama 6 jam pertama dan kemudian didiamkan selama 18

jam, kemudian disaring dan 20 mL filtrat diuapkan hingga kering dalam

cawan dangkal berdasar rata yang telah ditara dan residu dipanaskan

pada suhu 105°C hingga bobot tetap. Kadar dihitung dalam persen

senyawa yang larut dalam air terhadap ekstrak awal (Depkes RI, 1995).


38


b. Kadar Senyawa yang Larut Dalam Etanol

Sebanyak 2 gram ekstrak dimaserasi selama 24 jam dengan 100

mL etanol 95% menggunakan labu bersumbat sambil sekali-kali

dikocok selama 6 jam pertama, kemudian didiamkan selama 18 jam.

Saring dengan cepat untuk menghindari penguapan etanol, setelah itu

20 mL filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan dangkal berdasar

rata yang telah ditara, residu dipanaskan pada suhu 105°C hingga bobot

tetap. Kadar dihitung dalam persen senyawa yang larut dalam etanol

95 % terhadap ekstrak awal (Depkes RI, 1995).

3.5.3 Uji Kandungan Kimia Ekstrak

3.5.3.1 Uji Alkaloid

Sebanyak 500 mg ekstrak dilarutkan dalam 10 mL kloroform dan 4

tetes amonium hidroksida kemudian disaring dan filtratnya dimasukkan

ke dalam tabung reaksi bertutup. Ekstrak kloroform dalam tabung

reaksi dikocok dengan 6 mL asam sulfat 2 M dan lapisan asamnya

dipisahkan ke dalam tabung reaksi yang lain. Lapisan asam ini

diteteskan pada lempeng kaca, bila ditambahkan pereaksi Meyer akan

menimbulkan endapan putih, dengan pereaksi Wagner akan

menimbulkan warna coklat, sedangkan dengan pereaksi Dragendorf

akan menimbulkan endapan berwarna merah jingga (Depkes RI, 1995).

3.5.3.2 Uji Triterpenoid dan Steroid

Sebanyak 500 mg ekstrak dilarutkan dalam 250 mL etanol panas

(50°C) kemudian hasilnya disaring ke dalam pinggan porselein dan

diuapkan sampai kering. Residu ditambah eter dan ekstrak eter di

pindahkan ke dalam lempeng tetes, kemudian ditambahkan 3 tetes

anhidrida asetat dan 1 tetes asam sulfat pekat (uji Liebermann-

Bourchard). Warna merah atau ungu menunjukkan adanya triterpenoid

dan warna hijau menunjukkan adanya steroid (Depkes RI, 1995).


39


3.5.3.3 Uji Saponin dan Flavonoid

Sebanyak 500 mg ekstrak dimasukkan ke dalam gelas piala,

kemudian ditambahkan 100 mL air panas dan dididihkan selama 5

menit, setelah itu disaring dan filtratnya digunakan untuk pengujian.

Saponin diuji dengan cara 10 mL filtrat dalam tabung reaksi dikocok

selama 10 detik, kemudian dibiarkan selama 10 menit, adanya saponin

ditunjukkan dengan terbentuknya buih yang stabil. Uji saponin

dilakukan dengan cara 10 mL filtrat dimasukkan ke dalam tabung

reaksi, ditambah 0,5 g serbuk magnesium, 2 mL alkohol klorhidrat

(campuran asam klorida 37 % dan etanol 95 % 1:1) dan 20 mL amil

alkohol, kemudian dikocok dengan kuat, terbentuknya warna merah,

kuning, jingga pada lapisan alkohol menunjukkan adanya flavonoid

(Depkes RI, 1995).

3.5.3.4 Uji Kuinon

Sebanyak 500 mg ekstrak ditambahkan 100 mL air panas, didihkan

selama 5 menit dan disaring, 10 mL filtrat yang dihasilkan kemudian

ditambah beberapa tetes larutan natrium hidroksida 0,1 N, terbentuknya

warna merah menunjukkan adanya kuinon (Depkes RI, 1995).

3.5.3.5 Uji Tanin

Sejumlah 0,2 g fraksi aktif dimasukan dalam tabung reaksi dan

ditambahkan 10 mL air panas, didihkan selama 5 menit, saring dengan

kertas saring dinginkan kemudian dibagi menjadi dua bagian. Kedalam

larutan pertama ditambahkan larutan besi (III) klorida, terbentuknya

warna biru tua atau hijau kehitaman menunjukkan adanya senyawa

golongan tannin. Kedalam larutan kedua ditambahkan pereaksi Stiasny

( formaldehid 30% : asam klorida p (2:1),kemudian dipanaskan dalam

penangas air terbentuknya endapan warna merah muda menujukan

adanya tanin katekuat. Selanjutnya endapan disaring, filtrate dijenuhkan

dengan natrium asetat, ditambahkan larutan besi (III) klorida


40


terbentuknya warna biru tinta menunjukkan adanya tanin galat (Fong

et al., 1980).

3.5.3.6 Uji Kumarin

Sebanyak 500 mg ekstrak ditambahkan 10 mL kloroform P

kemudian dipanaskan selama 10 menit, didinginkan dan disaring. Filtrat

diuapkan , kemudian ditambahkan 10 mL air panas dan didinginkan, ke

dalam campuran kemudian ditambahkan 0,5 mL ammonia 10 % P,

adanya fluoresensi hijau atau biru pada sinar UV 366 nm menunjukkan

adanya kumarin (Depkes RI, 1995).

3.5.4 Pola Kromatogram Dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis

Pola kromatogram dilakukan terhadap ekstrak metanol seledri dan

ekstrak metanol tempuyung , juga terhadap fraksi air seledri dan fraksi

air tempuyung.

Ekstrak ditotolkan pada lempeng kromatografi Silica gel 60 F254

yang telah diaktifkan, kemudian dicoba dengan berbagai fasa gerak,

antara lain n-heksan-etil asetat (1:1, 1:2, 1:4, 2:3), kloroform – metanol

(1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5 dan seterusnya sampai perbandingan 14:1),

n-butanol-asam asetat glasial-air (7:1:2, 4 :1: 5), etil asetat : metanol

(4:1), Hexan : etanol (1:9), diklormetan : metanol (9:1), asam klorida :

asam asetat : air (3:30:10).

3.6 Purifikasi Campuran Ekstrak Seledri dan Tempuyung

Purifikasi dilakukan terhadap campuran ekstrak seledri dan tempuyung

dengan cara penyaringan menggunakan pelarut air. Campuran ekstrak

dengan berbagai variasi dosis disaring dengan sejumlah tertentu pelarut air

secara terpisah sampai filtrat jernih , residu dikeringkan di udara terbuka dan

ditimbang, sedangkan filtratnya dikeringkan dengan menggunakan alat freeze

dryer selama 2 hari hingga diperoleh ekstrak kering.


41


3.7 Pelaksanaan Percobaan

Dalam percobaan ini tikus dibagi dalam 8 kelompok perlakuan, masing-

masing kelompok uji menggunakan 4 ekor tikus. Tikus yang digunakan

adalah tikus normal dan tikus yang dibuat hipertensi. Tikus hipertensi dibuat

dengan menginduksi tikus dengan larutan natrium klorida 2 % setiap hari satu

kali pemberian, selama 4 minggu terhadap tikus normal. Setiap perlakuan

terhadap hewan coba diberi jarak satu jam, hal ini dilakukan untuk

mengurangi stres pada hewan coba setelah mendapat perlakuan yang pertama.

Pengukuran tekanan darah dilakukan pada hari ke satu sebelum

diinduksi dengan larutan natrium klorida 2 %, kemudian pada hari ke

limabelas sebelum pemberian sediaan uji dan pada hari ke tigapuluh.

Adapun pengelompokannya sebagai berikut :

Kelompok 1 = tikus normal, diberi air minum biasa, pada minggu ke tiga

disonde dengan CMC 0,5 % selama 14 hari.

Kelompok 2 = tikus disonde dengan larutan natrium klorida 2 % selama

4 minggu berturut-turut dan disonde larutan CMC 0, 5 % selama 14 hari.


4 minggu berturut-turut, pada minggu ke 3 diberi sediaan uji campuran 1

selama 14 hari


4 minggu berturut-turut, pada minggu ke 3 diberi sediaan uji campuran 2

selama 14 hari


4 minggu berturut turut, pada minggu ke 3 diberi sediaan uji campuran 3

selama 14 hari


4 minggu berturut-turut, pada minggu ke 3 diberi sediaan uji purifikasi

campuran 2 selama 14 hari.


4 minggu berturut-turut, pada minggu ke 3 diberi sediaan uji purifikasi

campuran 3 selama 14 hari.


42



4 minggu berturut-turut, pada minggu ke 3 diberi sediaan uji sediaan herbal

selama 14 hari.

Tabel 3.1 Pembagian Kelompok Perlakuan Hewan Coba

Kelompokperlakuan

PerlakuanHari ke

1Hari ke

2-14Hari ke

15Hari ke16-30

Hari ke31

1(Normal)

a+b+c a a+b+c a a+b+c

2(NaCl)

b+c+d d b+c+d d b+c+d

3(Campuran 1)

b+c+d d b+c+d+e d+e b+c+d+e

4(Campuran 2)


5(Campuran 3)


6(Purifikasi 2)


7(Purifikasi 3)


8(Obat herbal)


Keterangan : a = air, b = berat badan, c = volume urin, d = NaCl 2 %, e = sediaan

uji.

3.8. Pemeriksaan Tekanan Darah Tikus

Pengukuran tekanan sistolik tikus dilakukan dengan cara tidak langsung

dengan menggunakan alat Rat tail blood pressure monitoring system. Tikus

yang akan diukur dimasukkan ke dalam kandang khusus seukuran badannya

supaya tidak bisa banyak bergerak, kemudian didiamkan selama 10 menit

supaya tikus tenang, setelah itu ekor tikus dimasukkan kedalam cuff dan

tekanan dinaikkan sampai di atas tekanan sistolik, tekanan kemudian

diturunkan perlahan-lahan dan hasilnya dapat diamati pada kertas grafik yang

keluar dari monitor.


43


3.9 Pengamatan

Selama percobaan yang diamati adalah berat badan tikus, volume urin,

tekanan sistolik tikus, tekanan arteri rata-rata, tekanan diastolik dihitung

dengan cara tekanan arteri rata-rata dikalikan dua, dikurangi tekanan sistolik.

3.10 Analisis Data

Data tekanan sistolik tikus, volume urin dan berat badan tikus yang

diperoleh diuji homogenitasnya dan normalitasnya, selanjutnya dilakukan

analisis varian satu arah (one way anova) untuk melihat hubungan antara

kelompok perlakuan. Bila terdapat pengaruh nyata, maka untuk mengetahui

perbedaan antar perlakuan dilakukan dengan analisis peragam.

Analisis Peragam (Covariance Analysis)

Analisis peragam adalah analisis yang digunakan dalam perancangan

percobaan yang di dalamnya terdapat peubah pengiring (concomitant

variable). Peubah pengiring adalah peubah tertentu yang tidak dapat

dikendalikan, tetapi sangat mempengaruhi peubah respon yang diamati.

Peubah pengiring ini digunakan untuk mengurangi keragaman percobaan.

Peubah pengiring yang digunakan dapat lebih dari satu, seperti dalam regresi.

Oleh karena itu ada yang mengatakan bahwa analisis peragam merupakan

gabungan dari analisis ragam dan regresi (Gaspersz 1995).

Model linear analisis peragam dalam RAL.

dengan i = 1, …, t dan j = 1, …, n

dimana:

Yij = nilai respon yang dihasilkan perlakuan ke-i dan ulangan ke-j

µ = nilai rata-rata respon yang sesungguhnya

τi = pengaruh aditif dari perlakuan ke-i

β = koefisien regresi yang menunjukkan ketergantungan Yij pada Xij

Xij = pengukuran peubah pengiring pada perlakuan ke-i pada ulangan ke-j

yang berkaitan dengan Yij.

= nilai rata-rata peubah pengiring yang diukur

= komponen galat yang timbul pada ulangan ke-i dan perlakuan ke-j.


44


Hipotesis yang diuji:

Pengaruh perlakuan

H0 : τi = … = τt = 0 (perlakuan tidak berpengaruh terhadap respon yang

diamati)

H1 : minimal ada satu i dimana τi ≠ 0 (perlakuan berpengaruh terhadap respon

yang diamati.

Pengaruh peubah pengiring

H0 : β = 0 (peubah pengiring tidak berpengaruh terhadap respon yang

diamati)

H1 : β ≠ 0 (peubah pengiring berpengaruh terhadap respon yang diamati).



BAB IVHASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil

4.1.1 Pembuatan Serbuk Simplisia

Simplisia yang digunakan adalah herba seledri yang diperoleh dari

pasar Bogor, Jawa Barat dan daun tempuyung diperoleh dari kebun Farmasi,

FMIPA-UI dan sekitarnya, Depok. Masing-masing simplisia kemudian

dikeringkan dengan menggunakan oven pada temperatur 50°C, lalu digiling

dan diayak hingga diperoleh serbuk simplisia.

Serbuk simplisia yang diperoleh adalah 1529 gram serbuk simplisia

herba seledri dari 15 kg herba segar dan 1375 gram serbuk simplisia daun

tempuyung dari 13,5 kg daun tempuyung segar. Rendemen serbuk simplisia

herba seledri adalah 10,19 % dan untuk daun tempuyung adalah 10,18 %.

(Lampiran 13).

4.1.2 Pembuatan Ekstrak

Serbuk simplisia herba seledri dimaserasi dengan menggunakan pelarut

etanol 30 %, sedangkan serbuk simplisia daun tempuyung menggunakan

pelarut etanol 50 %, maserasi dilakukan berulangkali sampai filtrat tidak

berwarna , proses maserasi ini membutuhkan waktu satu minggu, filtrat yang

terkumpul kemudian dipekatkan di atas waterbath dengan suhu 50°C hingga

diperoleh ekstrak kental, proses pemekatan ini membutuhkan waktu dua

minggu.

Ekstrak herba seledri yang diperoleh sebanyak 384 gram dari

1529 gram serbuk simplisia dan ekstrak daun tempuyung yang diperoleh

sebanyak 387,75 gram dari 1375 gram serbuk simplisia. Rendemen yang

diperoleh untuk herba seledri adalah 25, 11% dan rendemen untuk daun

tempuyung adalah 28,20 %. (Lampiran 1, Lampiran 2, Lampiran 14).



46

4.1.3 Pengujian Terhadap Simplisia dan Ekstrak Herba Seledri dan

Daun Tempuyung.

4.1.3.1 Parameter Spesifik.

a. Identitas

Simplisia yang digunakan dalam penelitian ini adalah herba seledri

yang berasal dari seluruh bagian tanaman kecuali akar dan daun

tempuyung dengan panjang daun 15-30 cm, keduanya telah

dideterminasi di Pusat Konservasi Tumbuhan-Kebun Raya Bogor, Jawa

Barat. (Lampiran 27).

b. Organoleptik

Hasil permeriksaan organoleptik pada serbuk simplisia diperoleh

hasil serbuk simplisia berwarna hijau tua, terasa agak pedas, bau

aromatis khas, sedangkan serbuk simplisia tempuyung berwarna hijau

kecoklatan, rasa agak pahit dan kelat. Pemeriksaan organoleptik pada

ekstrak seledri, berwarna coklat tua, berbau aromatis khas, rasa agak

pedas, sedangkan ekstrak tempuyung berwarna coklat kehitaman, bau

khas, rasa agak pahit dan sedikit terasa asin. (Lampiran 1, Lampiran 2).

c. Penetapan kadar sari yang larut dalam air

Penetapan kadar sari yang larut dalam air menghasilkan kadar

37, 03 % untuk ekstrak herba seledri dan 35,61 % untuk ekstrak daun

tempuyung. Hal ini menunjukkan senyawa yang larut dalam air cukup

tinggi, walaupun tidak sesuai dengan ketentuan dalam Depkes RI

(1995) yang menyebutkan bahwa kadar sari yang larut dalam air tidak

kurang dari 40 %. (Lampiran 15).

d. Penetapan kadar sari yang larut dalam etanol.

Hasil percobaan diperoleh kandungan senyawa yang larut dalam

etanol untuk ekstrak herba seledri adalah 12,08 % dan 22,14 % untuk

ekstrak daun tempuyung, hal ini sesuai dengan ketentuan dalam buku



47

Depkes RI (1995) yang mensyaratkan kadar senyawa yang larut dalam

etanol tidak kurang dari 11 %. (Lampiran 16).

4.1.3.2 Parameter Non Spesifik

a. Penetapan kadar air

Kadar air yang diperoleh untuk simplisia herba seled

UJI ANTIHIPERTENSI CAMPURAN EKSTRAK ETANOL HERBA …lib.ui.ac.id › file?file=digital › 2016-9...

Documents

Transcript of UJI ANTIHIPERTENSI CAMPURAN EKSTRAK ETANOL HERBA …lib.ui.ac.id › file?file=digital › 2016-9...