Nested PCR

5
Nested PCR

description

Nested PCR. Nested PCR to metoda, w której stosuje si ę dwie pary starterów - zewn ę trzn e i wewn ę trz ne. Reakcja amplifikacji odbywa si ę w dw óch etapach. - PowerPoint PPT Presentation

Transcript of Nested PCR

Page 1: Nested PCR

Nested PCR

Page 2: Nested PCR

Nested PCR to metoda, w której stosuje się dwie pary starterów - zewnętrzne i wewnętrzne.

Reakcja amplifikacji odbywa się w dwóch etapach.

Produkty powstałe w fazie pierwszej (preegzystujące produkty amplifikacji ), stają się następnie matrycą dla wewnętrznej pary primerów.

Page 3: Nested PCR

SCHEMAT METODY :

* Wyizolowanie DNA

* Pierwsza amplifikacja z zastosowaniem pierwszej pary primerów (położonych bardziej zewnętrznie) - ok. 40 cykli

* Druga amplifikacja z zastosowaniem drugiej (położonej bardziej wewnętrznie – internal primers ) pary primerów – 15- 20 cykli

Page 4: Nested PCR
Page 5: Nested PCR

Zalety metody Nested PCR:

* Mniejsza możliwość amplifikacji niepożądanych sekwencji

* Podwyższona specyficzność

* Podwyższona czułość