ALLOPRZECIWCIA ŁŁŁŁA ANTY -HLA - rckik. · PDF fileDost ęp do przeszczepu...
Transcript of ALLOPRZECIWCIA ŁŁŁŁA ANTY -HLA - rckik. · PDF fileDost ęp do przeszczepu...
1
ALLOPRZECIWCIAALLOPRZECIWCIAŁŁŁŁŁŁŁŁA A ANTYANTY--HLAHLAW NOWOCZESNEJ DIAGNOSTYCE W NOWOCZESNEJ DIAGNOSTYCE
TRANSPLANTACYJNEJ TRANSPLANTACYJNEJ
Zastosowanie w doborze Zastosowanie w doborze immunologicznym do przeszczepu nerkiimmunologicznym do przeszczepu nerki
Hanna ZieliHanna Zielińńskaska
Laboratorium Immunologii Klinicznej, Transplantacyjnej i HematolLaboratorium Immunologii Klinicznej, Transplantacyjnej i Hematologiiogii
Uniwersyteckie Centrum Kliniczne w GdaUniwersyteckie Centrum Kliniczne w Gdańńskusku
Obecna Transplantacyjna diagnostyka immunologiczna przed przeszczepieniem nerki
� PRA-CDC co 3 miesiące
� Dobór HLA locus A, B, DR� Próba krzyżowa CM-CDC
(FCXM u zimmunizowanych?)
� Brak możliwości przeszczepu biorcy z powtórzonąniezgodnością !!!...?Przeciwciała anty-HLA dawcy (MM) tylko u 10% biorców
� Punkty za immunizację:
PRA 50-79%: 7 pkt
PRA >80%: przeszczep obligatoryjny
Brak diagnostyki posttransplantacyjnej
ZaletyZalety� Panel odzwierciedla fenotyp
HLA regionu … (vPRA też)
� Poziom detekcji odzwierciedlający reakcjęalloprzeciwciał in vivo (główna zaleta CM ,
wykluczenie odrzutu nadostrego)
� Selektywne wykrywanie alloprzeciwciał wiążących dopełniacz (flow wykrywa
IgG)
WadyWady� Wynik badania ściśle uzależniony
od panelu (zmienność odsetku PRA pochodną zmienności
panelu?) � Problem pacjentów
nowozgłoszonych (obserwacja) � NISKA CZUłłłłOŚĆŚĆŚĆŚĆ NA POZIOMIE
CM-CDC (pacjenci do retransplantacji, w trakcie terapii, leki, monitorowanie po tx)
� Wykrywamy tylko przeciwciała
anty-HLA klasa I� Fałszywie (+) r-cje od IgM.
BADANIE STOPNIA ZIMMUNIZOWANIA BADANIE STOPNIA ZIMMUNIZOWANIA -- DZIDZIŚŚPRA /metodPRA /metodąąąąąąąą CDC/CDC/
Proponowany algorytm badawczy monitorowania immunizacji
Screening: LABScreenMixed
Wynik (-) Wynik (+)
Powtótka co 6 tyg.(okołłłło 60%)
LABScreen PRAkl. I i/lub II
PRA 1-80 % PRA > 80 %(17 pacjentów)
Powtórka co 6 tyg Single Antigen
Programy HS
5
�� ~ 20% Oczekuj~ 20% Oczekująących cych (~ 500 os(~ 500 osóób, PRA>50: 100 osb, PRA>50: 100 osóób)b)
�� DostDostęęp do przeszczepu zimmunizowanych:p do przeszczepu zimmunizowanych:
[PRA>10%] ~15% przeszczep[PRA>10%] ~15% przeszczepóów od zmarw od zmarłłych dawcych dawcóów, w,
[PRA>80%] ~ 3% [PRA>80%] ~ 3% [wg UNOS 2007][wg UNOS 2007]
�� Czas oczekiwania Czas oczekiwania ((PoltransplantPoltransplant, 2009r), 2009r)
NiezimmunizowaniNiezimmunizowani: ~ 2 lata 8,5 m: ~ 2 lata 8,5 m--caca
ZimmunizowaniZimmunizowani PRA [80PRA [80--100%]: 100%]: 6 lat, 11 6 lat, 11 mm--cycy
Prawie 2x krPrawie 2x króótszy czas przetszy czas przeżżycia przeszczepu ycia przeszczepu
PROBLEM IMMUNIZACJI CHORYCHPROBLEM IMMUNIZACJI CHORYCH
6
�� Czas oczekiwania Czas oczekiwania -- aspekt finansowyaspekt finansowy
NiezimmunizowaniNiezimmunizowani: : 33 miesi33 miesiąąąąąąąącece
ZimmunizowaniZimmunizowani [HS] PRA [80[HS] PRA [80--100%]: 100%]: 83 miesi83 miesiąąąąąąąącece
Koszt miesiKoszt miesięęcznej dializy 1 osoby: cznej dializy 1 osoby:
400 z400 złł x 3(tyg) x 4 = x 3(tyg) x 4 = 4800 z4800 złł
Koszt dializy HS: 83 miesiKoszt dializy HS: 83 miesiąące x 4800 zce x 4800 złł = = 398 400 z398 400 złłKoszt nie HS: 33 Koszt nie HS: 33 mm--cece x 4800 zx 4800 złł = = 158 400 z158 400 złł
RRóóżżnica: nica: 240 000 z240 000 złł~20 pacjent~20 pacjentóów: 240 tys. x 20 = w: 240 tys. x 20 = 4 4 mlnmln 800 tys. z800 tys. złł
Brak Brak śśrodkrodkóów na diagnostykw na diagnostykęę ??????
PROBLEM IMMUNIZACJI CHORYCH PROBLEM IMMUNIZACJI CHORYCH -- kosztykoszty
7
�� ZimmunizowaniZimmunizowani [PRA>0%, min 2x]:
Określenie grupy ryzyka z danym dawcą => badania: FCXM, FlowC4d
�� WysokozimmunizowaniWysokozimmunizowani[cPRA>80% = PRA-CDC >50% ?]
I. Efekty wdrożenia programów dla wysokozimmunizowanych na świecie
II. Praktyka: Identyfikacja aloprzeciwciał anty-HLA: testy typu Single Antigen – podstawy, różnice z PRAScreen
Algorytm badawczy Algorytm badawczy
8
…Przyjęcie obligatoryjnego (-) wyniku FCXM nie miałoby sensu z uwagi na wyłączenie z szansy transplantacji 28% biorców, u których w 1-szym roku graft funkcjonuje dobrze, bez incydentów AR….ale
ZIMMUNIZOWANI (ZIMMUNIZOWANI (PRAPRA--CDCCDC > 0% min. 2x)> 0% min. 2x)
PrPróóba krzyba krzyżżowa z wykorzystaniem owa z wykorzystaniem cytometrucytometru
przepprzepłływowego miernikiem ryzyka ostrego odrzucaniaywowego miernikiem ryzyka ostrego odrzucania
9
OSTRE ODRZUCANIEOSTRE ODRZUCANIEOSTRE ODRZUCANIEOSTRE ODRZUCANIEOSTRE ODRZUCANIEOSTRE ODRZUCANIEOSTRE ODRZUCANIEOSTRE ODRZUCANIE –– ok. 20ok. 20--30% 30%
W grupie pacjentów z (+) FCXM dochodzi dwukrotnie częśęśęśęściej do odrzucania naczyniowego (n=455):28,9% z (+) FCXM vs. 12,6% z (-) FCXM;
Roczne przeżżżżycie przeszczepu 10% niższe (84% vs. 94%)
Ilham M.A. et.al.: Clinical significance of a positive flow crossmatch on the outcomes of cadaveric renal transplants. Transplant. Proc. 2008; 40(6):1839-43
ZIMMUNIZOWANIZIMMUNIZOWANI
PrPróóba krzyba krzyżżżżżżżżowa z wykorzystaniem owa z wykorzystaniem cytometrucytometruprzepprzepłłłłłłłływowego miernikiem ryzyka ostrego odrzucaniaywowego miernikiem ryzyka ostrego odrzucania
12
Zimmunizowani: wnioski
� Diagnostyka AR: wzrost kreatyniny następuje dopiero przy obniżeniu o połowę wartości GFR i aż 1/3 potwierdzonych histologicznie epizodów AR w pierwszych trzech miesiącach przebiega subklinicznie, tzn. przy prawidłowych wartościach kreatyniny, stąd
� (+) FCXM może stanowić niezależny czynnik ryzyka ostrego odrzucania (AR)wskazując grupę, która najbardziej skorzysta z indukcji
� (+) FCXM wiąże się ze zwiększonym ryzykiem przewlekłego odrzucania
13
Wysokozimmunizowani PRA > 80%
I. Efekty wdrożenia programów dla wysoko
zimmunizowanych na świecie
II. Identyfikacja aloprzeciwciał anty-HLA: testy typu
Single Antigen – podstawy, różnice z PRAScreen
14
�� Farmakologiczne Farmakologiczne
�� Biologiczne Biologiczne �� AAlgorytm „Emory” USA, UNOS
� „HLA-matchmaker” z AM Programme (ET-KIDNEYALLOCATION SYSTEM),
� FAMHS (Find Acceptable Mischmatches for HighlySensitized Patients), Barcelona
� British Transplantation Society
� Inne: “paired donor exchange”, „proxy donation”
15
EMORY EMORY EMORY EMORY EMORY EMORY EMORY EMORY ALGORITHMALGORITHMALGORITHMALGORITHMALGORITHMALGORITHMALGORITHMALGORITHM
�� FlowPRAFlowPRA
�� Identyfikacja alloprzeciwciaIdentyfikacja alloprzeciwciałłSwoistoSwoistośści (odpowiedniki MM) ci (odpowiedniki MM)
wprowadzane do bazy danych wprowadzane do bazy danych
UNETUNET
HLA dawcy porHLA dawcy poróównywane z wnywane z
bazbaząą UNET => 0 MM => UNET => 0 MM =>
kwalifikacja wytypowanego kwalifikacja wytypowanego
biorcy do transplantacjibiorcy do transplantacji
(tzw. wirtualny CM)(tzw. wirtualny CM)
�� CrossCross--matchmatch (FCXM T, B) w (FCXM T, B) w
oośśrodku przeszczepiajrodku przeszczepiająącymcym
16
�� DostDostęęp do przeszczepu zimmunizowanych (PRA>30%):p do przeszczepu zimmunizowanych (PRA>30%):
25% 25% vsvs. 12% w tym samym czasie w UNOS. 12% w tym samym czasie w UNOS
n=220 n=220 txtx zimmunizowanymzimmunizowanym, 5 lat, 5 lat
�� Czas przeCzas przeżżycia przeszczepu (5 lat)ycia przeszczepu (5 lat)::
PRA>30%: 69% PRA>30%: 69% vsvs. 70% w grupie . 70% w grupie niezimmunizowanychniezimmunizowanych
PRA>80%: brak statystycznie znamiennej rPRA>80%: brak statystycznie znamiennej róóżżnicynicy
�� Schemat immunosupresji identyczny jak w grupie nie Schemat immunosupresji identyczny jak w grupie nie
obarczonej ryzykiemobarczonej ryzykiem
EMORY ALGORITHMEMORY ALGORITHMEMORY ALGORITHMEMORY ALGORITHMEMORY ALGORITHMEMORY ALGORITHMEMORY ALGORITHMEMORY ALGORITHM
17
EurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantAMP (AMP (AMP (AMP (AMP (AMP (AMP (AMP (AcceptableAcceptableAcceptableAcceptableAcceptableAcceptableAcceptableAcceptable MischmatchMischmatchMischmatchMischmatchMischmatchMischmatchMischmatchMischmatch Program) + Program) + Program) + Program) + Program) + Program) + Program) + Program) + �� HLAMatchmakerHLAMatchmakerHLAMatchmakerHLAMatchmakerHLAMatchmakerHLAMatchmakerHLAMatchmakerHLAMatchmaker�� vPRAvPRAvPRAvPRAvPRAvPRAvPRAvPRAKryteria włączenia:
1. Wynik testu PRA > 85% stwierdzony co najmniej dwukrotnie w teście virtual PRA + potwierdzona lityczność przeciwciał w
klasycznym PRA-CDC z panelem 50 populacji limfocytów)
2. Wykluczenie obecności autoprzeciwciał anty-HLA u biorcy (próba autologiczna) oraz przeciwciał klasy IgM (test
mikrolimfocytotoksyczny PRA z dodatkiem DTT)
3. Dobór w zakresie HLA-A,B,C,DR,DQ
http://etrl.eurotransplant.nl/cms/index.php?page=amprogram
18
Programy dla pacjentProgramy dla pacjentProgramy dla pacjentProgramy dla pacjentProgramy dla pacjentProgramy dla pacjentProgramy dla pacjentProgramy dla pacjentóóóóóóóów wysoko w wysoko w wysoko w wysoko w wysoko w wysoko w wysoko w wysoko zimmunizowanych zimmunizowanych zimmunizowanych zimmunizowanych zimmunizowanych zimmunizowanych zimmunizowanych zimmunizowanych –––––––– EurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplantEurotransplant
1. Analiza HLA dawców z panelu PRA z (-) reakcjami w PRA-CDC
2. Testy typu Single Antigen
3. Program HLA-Matchmakerwww.matchmaker.net
HLA pacjenta (biorcy):
A24, 31; B27, 51; DR4, 8
AM: A25, 26; B44; DR 9
HLA potencjalnych dawców (test PRA)A25, 31; B27, 51; DR4, 8
A26, 31; B27, - ; DR4, 8
A25, 26; B44, 51; DR4, 9A24, 26; B27, 51; DR4, 8
A24, 25; B27, 51; DR4, 8
A24, 31; B44, 51; DR4, -
A24, 31; B27, 44; DR4, 8
A25, 31; B44, 51; DR4, 8
A25, 31; B44, 51; DR4, 9A25, 31; B44, 51; DR8, 9
Określenie akceptowalnych niezgodnośśśści (Acceptable
Mismstch) przez ETRL:
Standards for Histocompatibility Testing, wersja 5.6, kwiecień 2008; punkt G 3.110
Akredytacja EFI lub ASHI
20
ET: ET: AcceptableAcceptable MischmatchMischmatch ProgramProgramDostDostęęęęęęęęp do przeszczepup do przeszczepu
W pierwszym roku
przeszczepiono 68 z 129 wysoko zimmunizowanych. W tym 57 z 68 pacjentówotrzymało nerkę z programuET-AMP (średnia oczekiwania9,7 miesięcy, w tym większośćznalazła odpowiedniego dawcęw pierwszych sześciumiesiącach).
W oparciu o klasyczne zasady ET-KAS, dokonano 11-tu transplantacji (średniaoczekiwania 18,6 miesięcy).
21
ET: ET: AcceptableAcceptable MischmatchMischmatch ProgramProgramCzas przeCzas przeżżżżżżżżycia przeszczepuycia przeszczepu
22
� Zwyczajowo stopień doboru mierzony ilością niezgodnych z dawcąantygenów HLA-A, B, DR (0-6 MM: mismatch)
� Dlaczego obserwuje się tak duży rozrzut w funkcjonowaniu nerek o 5-6 MM u biorców przeszczepu?
ET: AMP + ET: AMP + HLAMatchmakerHLAMatchmaker
http://www.hlamatchmaker.net/
23
� Algorytm doboru pary na poziomie analizy podobieństwa epitopów (antygenowość +immunogenność), nie antygenów.
� Każdy antygen HLA przedstawiony w postaci ciągu krótkich sekwencji peptydowych (EAA: eplets amino acid), opisujących regiony polimorficzne zdolne do indukcji powstawania przeciwciał
ET: ET: HLAMatchmakerHLAMatchmaker
http://www.hlamatchmaker.net/
HLA-A2
24
� Rodzaj wytwarzanych przez biorcęprzeciwciał zależy od jego własnych HLA
� Każda nerka jest inaczej immunogenna względem danego biorcy o takiej samej liczbie niezgodnych HLA
ET: ET: HLAMatchmakerHLAMatchmaker
http://www.hlamatchmaker.net/
25
HLA-A2, 68;HLA-B27, 44
HLA-A2, 24;HLA-B7, 8
HLA-A2, 68;HLA-B35, 44
Polimorficzne epitopyHLA-B51(5)
HLAMatchmakerHLAMatchmakerImmunogenność HLA-B51dawcy dla
haplotypu biorcy:
α1
α2
α2 α1
β2M
α3
peptyd
26
Immunogenność.
Czy są różnice w immunogenności HLA-B8?
Biorca 1: HLA-A2,A30; B18,B27; Cw2,Cw4
Biorca 2: HLA-A2,A31; B42,B53; Cw2,Cw7
27
Biorca 1: HLABiorca 1: HLA--A2,30; B18, 27; Cw2,w4A2,30; B18, 27; Cw2,w4
82 90 105 107 127 131 138 142 144 147 149 151 156 158
A02 lRg A S W K R T T tKh W aAh aHv L A
A30 lRg A S G N R T I tQr W aAr aRw L A
B18 lRg A P G N S T I tQr W aAr aRv L A
B27 lLr A P G N S T I tQr W aAr aRv L A
Cw2 lRg A P G N R T I tQr W aAr aRe W A
Cw4 lRg D P G N R T I tQr W aAr aRe R A
Donor HLA
B8 lRg A P G N R T I tQr W aAr aRv D A
163 166 171 177 180 184 186 193 199 207 246 248 253
A02 T Ew Y Et Q A K Av A S A V Q
A30 T Ew Y Et Q P K Pi A G A V E
B18 T Ew H Et Q P K Pi A G A V E
B27 E* Ew Y Et Q P K Pi A G A V E
Cw2 E* Ew Y Et Q Eh K Pv A G A V E
Cw4 T Ew Y Et Q Eh K Pv A G A V E
Donor HLA
B8 T Ew Y Dt E P K Pi A G A V E
28
Patient HLA 9 12 14 17 41 45 56 62 66 70 74 76 80
A02 A*0201 F sV R gR A Me G Ge rKv aHs H Vd gTl
A30 A*3001 S sV R gS A Me R Qe rNv aQs D Vd gTl
B18 B*1801 H sV R GR A Te G Rn qIs tNt Y Es rNl
B27 B*2705 H sV R gR A Ee G Re qIc aKa D Ed rTl
Cw2 Cw*0202 Y aV R sR A Ge G Re qKy rQa D Vn rNl
Cw4 Cw*0401 S sV W gR A Ge G Re qKy rQa aD Vn rNl
Donor HLA
B8 B*0801 D aM R gR A Ee G Rn qIf tNt D Es rNl
Biorca 1: HLABiorca 1: HLA--A2,30; B18, 27; Cw2,w4A2,30; B18, 27; Cw2,w4
Biorca 1: Biorca 1: wzglwzglęędem HLAdem HLA--B8 ma 6 niezgodnych tripletB8 ma 6 niezgodnych tripletóóww
29
THE NUMBER OF AMINO ACID TRIPLET DIFFERENCES BETWEEN PATIENT AND DONOR IS
PREDICTIVE FOR THE ANTIBODY REACTIVITY AGAINST MISMATCHED HUMAN LEUKOCYTE
ANTIGENS
Transplantation. 2007 Apr 27;77(8):1236-9.
31
� Przykład:
Pacjent PRA=94% o genotypie
HLA-A24,-;B38,35;Cw4,-. PFD na znalezienie dawcy wynoszą PFD=0,007% (1 na 14000dawców bez ryzyka immunologicznego).
Zastosowanie aplikacji HLAMatchmaker w połączeniu z PRA-CDC (panel 50-dawców o znanych HLA), PFD zwiększa do 0,115%
(1 na 870 dawców).
źródło: Transpl. Vol. 75, 889-897, No. 6, 2003
HLAMatchmaker a pacjenci HS:
32
HLAMatchmaker korzyści:
� Możliwość określenia najmniej immunogennej pary dawca – biorca
� Określenie dodatkowych, akceptowalnych niezgodności dla zimmunnizowanych pacjentów
� Ograniczanie liczby zimmunizowanych po przeszczepie
� Poprawa przeżycia przeszczepu
� Pacjenci zgłoszeni do retransplantacji: Możliwość przeszczepiania z powtórzonym MM
33
WysokozimmunizowaniEfekty programów dla wysoko zimmunizowanych
wdrożone na świecie
Programy skierowane głównie do pacjentów
wysoko zimmunizowanych (HS) celem:
� Poprawy dostępu do przeszczepu� Wydłużenia czasu przeżycia przeszczepu
34
II. IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAII. IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAII. IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAII. IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAII. IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAII. IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAII. IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAII. IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAŁŁŁŁŁŁŁŁw praktycew praktycew praktycew praktycew praktycew praktycew praktycew praktyce
HLA-A2
HLA-B7
PE anty- human IgG
Grupy testów serii LABScreen
Screening
PRA
Single Antigen
HLA-A2
HLA-A24
HLA-B27
HLA-B44
HLA-Cw1
HLA-Cw5
Proponowany algorytm badawczy monitorowania immunizacji
Screening: LABScreenMixed
Wynik (-) Wynik (+)
Powtótka co 6 tyg.(okołłłło 60%)
LABScreen PRAkl. I i/lub II
PRA 1-80 % PRA > 80 %(17 pacjentów)
Powtórka co 6 tyg Single Antigen
Programy HS
20 µ l surowicy 5µ l „beadsów”
klasa I i /lub klasa II(lub wariant combo)
Inkubacja 30 min, RT
3x płukanie
+ PE-anty IgG, 30 min RT
2x płukanie
Luminex
IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAŁŁŁŁŁŁŁŁ
37
ZielonyZielony laser laser oznacza ilooznacza ilośćśćanalituanalitu
Czerwony laser wykrywa i identyfikuje mikrokulkę, badany
analit
Rozdzielczość =>
Ponad 155 specyficzności klasy I, II
Patient Typing Abs Produced
A*0302 A*0301
A*2403 A*2402
DRB1*1337 DRB1*1301
Sandra Rosen-Bronson, Ph.D; Georgetown University; OLI Visuals, 2003
Carol Pancoska, Ph.D, DIP; The Sharing Network; OLI Visuals, 2003
IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAIDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAŁŁŁŁŁŁŁŁSingle Single Single Single Single Single Single Single AntigenAntigenAntigenAntigenAntigenAntigenAntigenAntigen
HLA Fusion® Software
kalkulacja wynikkalkulacja wynikóów dla w dla
alloprzeciwciaalloprzeciwciałłłłłłłł
� NBG Ratio = Normalized Background ratio
[Sample bead#N - Sample bead#NC (001)][LSNC bead#N - LSNC bead#NC (001)]
Normalization by Subtraction
Zasada kwalifikacji reakcji (+/-)
� NBG (normalized background ratio) dla wariantu LS-NC(alternate BG)
�NBG > 1,6: pozytywne.
�NBG pomiędzy 1.2 - 1.5 = szary kolor
�NBG < 1.2: negatywne
�Wszystkie „beadsy” muszą być negatywne aby kwalifikowały się jako (-)
�Nie wszystkie „beadsy” z danym Ag muszą być (+) aby kwalifikować alloswoistość jako obecną.
SPOSÓB OKREŚŚŚŚLANIASPECYFICZNOŚŚŚŚCI PRZEZ
OPROGRAMOWANIEEPITOPE ALGORITHM EPITOPE ALGORITHM
w wariancie LABScreenPRALABScreenPRA
Wstęp
� Ogon (Tail analysis) powinien być traktowany
jako wstęp do właściwej analizy specyficzności
obecnych w surowicy, ma jednak podstawy
teoretyczne.
� Algorytm wykorzystywany w OLI rozwinął siępodczas „8th International Histocompatibility
Workshop”:
� Formuła statystyczna odpowiednia do analizy
wieloswoistych surowic (opracowanie na podstawie analogii z panelami komórkowymi)
TAIL ANALYSIS
� Częstości antygenów obecnych na mikrosferach = częstościom w populacji
(odzwierciedlenie panelu) np. HLA-A2 vs. HLA-A66 dlatego
� Alloprzeciwciała anty-A2, A1, A3 lub Cw sąoceniane bardziej restrykcyjnie, wg algorytmu R-value (nie wg [% positive] czy [Stranght])
R-value. (Rvalue=√ Χ²/N gdzie Χ²=N[(ad-bc)-N/2]²/[(a+b)(c+d)(a+c)(b+d)]) gdzie (a)=rreal
positive, (b)=false positive, ©=false negative, (d)=true negative.
� Algorytm „naśladuje” manualne kreowanie „ogona” =>
� 61 surowic: wykryto łącznie 166 specyficzności alloab, 136 wykryto poprawnie (zgodność 83%). (Potwierdzenie na single antigen)
� Nie ma w 100% poprawnego algorytmu –poliklonalna odpowiedź, wysokie miana: testy typu single antigen.
�� PrzykPrzykłłłłłłłład 1 ad 1 ((Cz. M)Cz. M)
PRA (panel 43): 27%
Prawdopodobne źźźźródłłłła immunizacji: ciążążążąże (brak przetoczeńńńń)
1. Screen: klasa I (+++)klasa II (++) =>
2. Identyfikacja: Alloprzeciwciałłłła anty-HLA klasa I, II (mix, wskazana analiza single antigen)
WYNIK:silna reakcja (MFI 10-14 tys) z antygenami HLA kl. IPRA: 25 % (reakcja pozytywna w 25% analizowanych beadsów)
SWOISTOŚŚŚŚCI POZYTYWNIE REAGUJĄĄĄĄCYCH AG: HLA A 23(9), 24(9)HLA A 23(9), 24(9)
WYNIK:silna reakcja (MFI 8-15 tys) z antygenami HLA kl. IIPRA: 26 % (reakcja pozytywna w 26% analizowanych beadsów)
SWOISTOŚŚŚŚCI POZYTYWNIE REAGUJĄĄĄĄCYCH AG: HLA DR 7, 9
(Ostrożżżżnie z całąłąłąłą grupąąąą CREG DR4,7,9 )
„„RODZAJRODZAJ”” ODPOWIEDZI HUMORALNEJODPOWIEDZI HUMORALNEJA. „poli”swoisty
korzyści: określenie „akceptowalnych antygenów”