ODPOWIEDZI KOMÓRKOWE

I ICH DIAGNOSTYKA

Antygeny komórkowe

Normy podstawowych subpopulacji limfocytów w krwi obwodowej osób dorosłych

Średnio Zakres

LEUKOCYTY (WBC) x103/mm3 5,9 4,6-7,1

Limfocyty (%) 32 28-39

Limfocyty T CD3+ 72 67-76

Limfocyty B CD19+ 13 11-16

Komórki NK 14 10-19

Limfocyty T CD4+ 42 38-46

Limfocyty T CD8+ 35 31-40

CD4/CD8 1,2 1,0-1,5

CD Reactivity

CD 45 LCA

TdT terminal transferase, progenitors of T and B lymphocytes

CD10, CALLA

acute B-cell leukaemias

CD34 Progenitor cells, acute lymphoblastic and myeloblasic leukaemias

CD5 T cells

CD19

B lymphocytesCD20

CD21

CD22

CD23 Differentiation of B-cell neoplasms

CD7 Limfocyty T

CD103 HCL

CD56NK cells

CD57

CD13

Myelo-monocytic markers

CD15

CD33

CD11c

CD14

CD25, 71,69Ki-67 Markers of proliferating cells

Antygeny różnicowania leukocytów

T CD3FITC

PE

Bezpośrednia reakcja immunofluorescencyjna

Zasada cytometrii przepływowej

Injector Tip

FluorescenceFluorescencesignalssignals

Focused laserFocused laserbeambeam

Sheath fluid

FSC – forward scetter (cell size)

Side scatter – cell granularity

Fluorescence detection

Normalny obraz krwi obwodowej

B-CLL

Badania czynnościowe limfocytów in vivo

Testy skórneŚródskórne podanie antygenu jest stosowane do badania czynnościowej wydolności limfocytów

Reakcja na ś. podanie tuberkuliny

• Pozytywna reakcja pojawia się 24-48 h jako rumień i stwardnienie

• Jest charakterystyczna dla uczulonych T limfocytów gromadzących się w miejscu podania antygenu

• Umiakowana odpowiedź (rumień o śr. 5-6 mm) – osoby , które miały kontakt z prątkami, ale nie zachorowały

• Silna reakcja (15-20 mm) sugeruje aktywną infekcję

• Brak reakcji – brak kontaktu z prątkami lub anergia

Podnaskórkowe podanie antygenu (alergenu)

• Badania nadwrażliwości (uczulenia) na określone antygeny

• Lokalna skórna reakcja zapalna świadczy o wrażliwości na dany alergen

IS = Cpm w hodowli stymulowanejCpm w hodowli niestymulowanej

cpmT – średnia arytmetyczna z liczby rozpadów na jednostkę czasu w próbie badanej

cpmS – w próbie z uwalnianiem spontanicznym

cpmM – w próbie z uwalnianiem maksymalnym

% cytotoksyczności = cpmT - cpmS

cpmM - cpmS

Mechanizmy zabijania drobnoustrojów przez komórki żerne

Tlenowe: H2O2, rodniki hydroksylowe, tlen singletowy, kwas podchlorawy, chloraminy

Pozatlenowe: BPI (cz. b-bójczy zwiększaający przepuszczalność), defensyny, lizozym

PHAGOTEST

Diagnostyczny test do badania zdolności do fagocytozy granulocytów i monocytów w pełnej, heparynizowanej krwi.

Test zawiera znakowane fluoresceiną opsonizowane (Ig, C) bakterie (E. coli-FITC) i niezbędne odczynniki

Przy pomocy testu ocenia się odsetek granulocytów i monocytów wykazujących zdolność do fagocytozy na podstawie liczby bakterii sfagocytowanych przez komórkę.

Ocena wyników: cytometria lub m. fluorescencyjny

The test kit contains:1. 1 bottle (2 ml) of stabilized and opsonized FITC-labelled E.coli suspension (E.COLI FITC OPSONIZED), 1 x solution, ready to use, 1 x 109 bacteria per ml.2. 1 bottle (10 ml) of QUENCHING SOLUTION for suppressing fluorescence of the bacteria attached to the outside of the cell, blue reagent solution, 1 x solution.3. 1 bottle (20 ml) of DNA STAINING SOLUTION for cytometric discrimination of bacteria during leukocyte analysis, pink reagent solution, 1 x solution.4. 1 bottle (20 ml) of LYSING SOLUTION (10 x stock solution for storage), provides 200 ml of 1 x solution after 1 : 10 dilution with double distilled water for lysing erythrocytes and simultaneous fixing of leukocytes.5. 1 bottle of Instamed-Salts as a WASHING SOLUTION (SALTS f. WASHING SOLUTION) to be reconstituted in 1000 ml aqua bidest, provides 1000 ml ready-to-use WASHING SOLUTION.

BURSTTEST (PHAGOBURST™)

Allows the quantitative determination of leukocyte oxidative burst in heparinized whole blood.

It contains unlabeled:• opsonized bacteria (E.coli), phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) and the chemotactic peptide N-formyl-Met-Leu-Phe (fMLP) as stimulants, •Dihydrorhodamine (DHR) 123 as a fluorogenic substrate •necessary reagents.

It determines the percentage of phagocytic cells which produce reactive oxidants (conversion of DHR 123 to R 123)

The evaluation of these bioactivities should be performed by flow cytometry.

Heparinized whole blood is incubated with the various stimuli at 37°C, a sample without stimulus serves as negative background control.

Upon stimulation, granulocytes and monocytes produce reactive oxygen metabolites (superoxide anion, hydrogen peroxide, hypochlorous acid) which destroy bacteria inside the phagosome.

Formation of the reactive oxidants during the oxidative burst can be monitored by the addition and oxidation of DHR 123.

The reaction is stopped by addition of LYSING SOLUTION, which removes erythrocytes and results in a partial fixation of leukocytes.

After one washing step with WASHING SOLUTION, DNA STAINING SOLUTION is added to exclude aggregation artifacts of bacteria or cells.

The percentage of cells having produced reactive oxygen radicals are then analyzed as well as their mean fluorescence intensity

aktywacja oksydacja Liza i utrwalanie płukanie

Test chemiluminescencyjny

Po pochłonięciu mikroorganizmów, komórki fagocytujące emitują niewielkie ilości promieniowania elektromagnetycznego,

którego wielkość można zmierzyć przy pomocy odpowiednich mierników.

Źródłem tej energii jest reaktywny i bardzo niestabilny tlen singletowy.